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Previous issue date: 2014-12-11 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Malaria is a parasitic disease with the highest number of hospitalizations and
deaths each year worldwide, one of the major public health problems in Africa, South
America and East Asia. According to estimates by the World Health Organization, 198
million people became ill in 2014. This evidence led to the development of new strategies for
the treatment of malaria in order to minimize the growing problem of parasite resistance to
commonly used medicinal products. With the elucidation of metabolic pathways essential for
some of the malaria parasite development, new molecular targets have been proposed for the
development of new drugs, among which can be cited Hypoxanthine Guanine
Phosphoribosyltransferase (HGPRT) Chorismate synthase, enoyl-ACP reductase and purine
nucleoside phosphorylase (PNP). Objective: The objective of this study was the identification
of compounds as potential inhibitors of beta-ketoacyl-ACP reductase enzyme - OAR
Plasmodium falciparum. Results: The 28kDa enzyme was expressed in Escherichia coli and
purified by affinity chromatography. Searches of new molecules through Sceenning by
Virtual Docking were able to find 30 molecules of which was selected Skyrin molecule due to
its higher affinity for the enzyme OAR. Analysis of enzyme activity by spectrophotometry
using NADPH and acetoacetyl-CoA substrates the enzyme showed activity OAR reducing
NADPH in the various substrates concentrations, and was shown to be inhibited by Skyrin. It
was also possible to show by surface plasmon resonance (SPR) Skyrin that the molecule binds
to the enzyme OAR but dissociates easily.In tests using cell cultures infected with P.
falciparum this molecule showed antimalarial activity with IC50 8,88μg / ml, and is not toxic
to HepG2 cell line. Conclusion:This new approach has significant advantages compared to
traditional methods, since it establishes in advance the specific bioactive and its mechanism of
action. Ideal targets for the development of antimalarial drugs against infectious agents must
be essential to the survival of the pathogen and the host is absent. / A Malária é a doença parasitária com maior número de internações e mortes por
ano em todo o mundo, sendo um dos maiores problemas de saúde pública na África, América
do Sul e Ásia Oriental. Segundo estimativas da Organização Mundial de Saúde, 198 milhões
de pessoas ficaram doentes em 2014. Essas evidências levaram ao desenvolvimento de novas
estratégias para o tratamento da malária a fim de minimizar o crescente problema da
resistência do parasita aos medicamentos de uso corrente. Com a elucidação de algumas Vias
Metabólicas essenciais para do desenvolvimento do parasita da malária, novos alvos
moleculares foram propostos para o desenvolvimento de novas drogas, entre eles pode-se citar
a Hipoxantina Guanina Fosforribosiltransferase (HGPRT), Corismato sintase, Enoil –ACP
redutase e a Fosforilase de nucleosídeos purínicos (PNP). Objetivo: O objetivo desse estudo
foi a identificação de compostos como possíveis inibidores contra a enzima Beta-cetoacil-
ACP- redutase - OAR de Plasmodium falciparum. Resultados: A enzima de 28kDa, foi
expressa em Escherichia coli e purificada através de cromatografia de afinidade. Buscas de
novas moléculas através de Sceenning Virtual por Docking foram capazes de encontrar 30
moléculas das quais foi selecionada a molécula Skyrin por apresentar maior afinidade pela
enzima OAR. Análise da atividade enzimática por espectrofotometria utilizando os substratos
NADPH e Acetoacetil-COA a enzima OAR apresentou atividade reduzindo NADPH, em
concentrações dos substratos variadas, e mostrou ser inibida por Skyrin. Foi possível mostrar
também por Ressonância Plasmônica de Superfície (SPR) que a Skyrin liga-se à enzima OAR
porém dissocia-se facilmente. Em testes utilizando-se culturas celulares infectadas com P.
falciparum essa molécula apresentou atividade antimalárica com IC50 de 8,88μg/mL, não
sendo tóxica para a linhagem celular HepG2. Conclusão: Esta nova abordagem apresenta
vantagens significativas quando comparada aos métodos tradicionais, uma vez que se
estabelece antecipadamente a especificidade do bioativo e respectivo mecanismo de ação.
Alvos ideais para o desenvolvimento de fármacos contra agentes infecciosos antimaláricos
devem ser essencial para a sobrevivência do patógeno e estar ausente no hospedeiro.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5657 |
| Date | 11 December 2014 |
| Creators | Grava, Andréa Fagundes |
| Contributors | Astolfi Filho, Spartaco |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 461231695918095045 |
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