CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Este trabalho teve como objetivos caracterizar fÃsico-quÃmica e estruturalmente
polissacarÃdeos obtidos de folhas de Aloe barbadensis e avaliar suas atividades
antiviral, anti-hemorrÃgica e prÃ-coagulante e possÃveis sinais de toxicidade. Foi
realizada extraÃÃo aquosa de polissacarÃdeos totais (PT) de A. barbadensis,
seguido de precipitaÃÃo por etanol e remoÃÃo dos contaminantes proteicos com
TCA. A cromatografia em DEAE-celulose foi eficiente no fracionamento dos PT,
onde foram obtidas as fraÃÃes PI e PII. A caracterizaÃÃo fÃsico-quÃmica mostrou
que a fraÃÃo PI Ã composta por manose (78,4%), glucose (7,3%), galactose
(2,1%), fucose (2,8%) e Ãcidos urÃnicos (10,0%), e isenta de grupos Ãster sulfato.
Enquanto, a fraÃÃo PII Ã constituÃda por manose (39,2%), glucose (22,2%),
galactose (26,3%), arabinose (3,8%), xilose (1,1%), Ãcidos urÃnicos (8,0%) e
grupos Ãster sulfato (12,0%). Na revelaÃÃo das bandas polissacarÃdicas da fraÃÃo
PII, obtidas por PAGE e gel de agarose corados com stainsall foi constatado a
presenÃa de duas bandas que apresentaram diferentes coloraÃÃes, roxa e ciana,
correspondentes a presenÃa de grupos sulfato e carboxilados, respectivamente.
Na anÃlise estrutural das fraÃÃes PI e PII, por espectroscopia no IR, foi
demonstrado que a fraÃÃo PI apresenta unidades monossacarÃdicas de Ã-manose
O-acetiladas (812,2 e 960 onda.cm-1) e Ãcidos urÃnicos neutros (1738 onda.cm-1)
em sua estrutura. Diferentemente, a fraÃÃo PII, mostrou-se ser constituÃda por
unidades monossacarÃdicas de manose (1014,7 onda.cm-1), galactose (1078,2
onda.cm-1), Ãcidos urÃnicos carregados negativamente (1635 onda.cm-1) e Ãster
sulfato (1329,5 e 1260,9 onda.cm-1). Na avaliaÃÃo estrutural da fraÃÃo PII por RMN
foi comprovado à presenÃa do grupo Ãster sulfato. Em relaÃÃo Ãs atividades
biolÃgicas, o teste de citotoxicidade mostrou que os PT e as fraÃÃes PI e PII nÃo
apresentaram toxicidade para a maioria das cÃlulas testadas e nÃo foram
eficientes na inibiÃÃo de vÃrus nÃo envelopados Ad-19 e Ad-41. No entanto, os PT
e a fraÃÃo PI foram capazes de inibir a infecÃÃo causada por HSV-1 e HSV-2. Em
ensaios com metapneumovÃrus (HMPV), a fraÃÃo PII apresentou atividade antiviral
superior à ribavirina. Embora os PT e as fraÃÃes PI e PII nÃo terem apresentado
atividade contra dengue vÃrus sorotipo 1 (DENV-1), os PT puderam inibir a
hemorragia em ratos, diminuindo o tempo de sangramento e o tempo de
protrombina. Os PT nÃo apresentaram toxicidade em camundongos, mas
aumentaram o tamanho do baÃo e o nÃmero de plaquetas sanguÃneas. Pode ser
concluÃdo que extratos foliares de A. barbadensis podem apresentar polissacarÃdeos
neutros ou carregados negativamente por grupos carboxilados/sulfatados. Em adiÃÃo,
alÃm de apresentar atividade inibitÃria contra os vÃrus HSV-1, HSV-2 e HMPV, podem
tambÃm apresentar efeito anti-hemorrÃgico e prÃcoagulante, propriedades essas,
importantes, visto que a complicaÃÃo de muitas viroses leva a quadros hemorrÃgicos.
AlÃm disso, os PT de A. barbadensis nÃo apresentaram toxicidade expressiva,
podendo ser utilizada como agente terapÃutico seguro e eficaz. / The aim of this study was to investigate the physicochemical and structural
parameters of polysaccharides obtained from Aloe barbadensis leaves and to
evaluate the antiviral and cytotoxic activities and procoagulant, anti-bleeding
effects. In addition, toxicological analysis was carried out. The pulp was submitted
to aqueous extraction (70 ÂC) and the total polysaccharides (PT) obtained by
ethanol precipitation, TCA was used to remove the protein contamination. The
fractionation of PT with DEAE-celulose resulted in two fractions (PI and PII). The
physicochemical characterization showed that PI fraction presents mannose
(78,4%), glucose (7,3%), galactose (2,1%), fucose (2,8%) and uronic acid (10,0%).
Sulfate esters were not detected in PI fraction. On the other hand, PII fraction
presents the monosaccharides mannose (39,2%), glucose (22,2%), galactose
(26,3%), arabinose (3,8%), xylose (1,1%), uronic acids (8,0%) and sulfate esters
groups (12,0%). The polysaccharidics of PII obtained by PAGE and agarose gel
electrophoresis were revealed with toluidine blue and stainsall dye showing the
presence of two different bands, one purple (indicative of sulfate) and another cyan
(indicative of carboxilated groups). Structural analysis of PI and PII fractions by IR
spectroscopy demonstrated that PI fraction is composed of residues of Ã-mannose
O-acetylated (812.2 and 960 cm-1) and uronic acids (1738 cm-1). In contrast, the PII
fraction is composed of mannose (1014.7 cm-1), galactose (1078.2 cm-1), negatively
charged uronic acids (1635 cm-1) and sulfate ester (1329.5 and 1260.9 cm-1).
These results corroborate with NMR analyses that suggest the presence of sulfate
groups in PII structure. The cytotoxicity evaluation showed that PT and the fractions
PI and PII did not show toxicity against most of tested cells and the same fractions
were not effective against non-enveloped virus (Ad 19 and Ad 41) inhibition.
However, the PT and PI fraction were able to inhibit the infection caused by HSV-1
and HSV-2. In addition, PII fraction presents antiviral activity against
metapneumovirus. Although the PT and the fractions PI and PII did not show
activity against dengue virus serotype 1 (DENV-1), PT could inhibit the bleeding
effects in rats, reducing the bleeding and prothrombin time. The PT showed no
toxicity in mice, but increased spleen size and number of blood platelets. In
conclusion, A. barbadensis leaves contain neutral or negatively charged
carboxylated/sulfated polysaccharides. In addition, besides having inhibitory activity
against HSV-1, HSV-2 and HMPV, they can also anti-bleeding and procoagulant
effect. Moreover, the PT of A. barbadensis showed no significant toxicity and can
be used as a safe and effective therapeutic agent.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:5970 |
| Date | 22 March 2012 |
| Creators | Ygor Raphael Gomes Eloy |
| Contributors | Norma Maria Barros Benevides, Ana de FÃtima Fontenele Urano Carvalho, Maria Izabel Florindo Guedes, Vitor Hugo Pomin, Maria Teresa Villela Romanos |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em BioquÃmica, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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