Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1
282615.pdf: 1949422 bytes, checksum: 590c4d341ae6a1774c58a4fb5020771a (MD5) / A mielofibrose primária (MP) é uma desordem mieloproliferativa crônica caracterizada pela hiperplasia e fibrose medular. A fibrose característica dessa desordem está relacionada à liberação de fatores de crescimento hematopoiéticos, dentre eles o fator derivado de plaquetas, que estimula a proliferação de fibroblastos, com conseqüente depósito de fibras colágenas e reticulínicas. O desenvolvimento de fibras de colágeno no lugar do tecido hematopoiético normal é o responsável pela maioria dos sintomas da doença. O exame histopatológico revela o aumento da reticulina fibrilar, do colágeno e dos fibroblastos na medula óssea (MO). O tratamento da doença é paliativo, visando amenizar os sintomas e melhorar a qualidade de vida do paciente. Atualmente não existe nenhuma terapia capaz de inibir o processo fibrótico. O objetivo desse trabalho é verificar o efeito do fármaco imatinibe em linhagens de células provenientes do estroma da MO de camundongos e linhagem celular fibroblástica S17 sob estímulo do PDGF in vitro na busca de uma terapia eficaz para a MP. Este fármaco foi desenvolvido para o tratamento da leucemia mielóide crônica e atualmente tem sido alvo de estudo para outras doenças. A partir da realização de cultura primária da medula óssea de camundongos (CP) e cultura das células S17 foi avaliada: a viabilidade celular do estroma medular e das células hematopoéticas pelo método de azul de tripan e 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, a yellow tetrazole (MTT), a viabilidade celular/apoptose das células S17 pelo método de laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE) e o ciclo celular pelo iodeto de propídio (IP) das células S17. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em CP a partir da concentração de 2,5 ?M em células do estroma e em células hematopoéticas e sob o estímulo do PDGF o efeito inibitório foi a partir de 2,5 ?M e 1,0 ?M respectivamente. O tipo celular predominantemente afetado pelo imatinibe nas CP foi os fibroblastos. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em células fibroblásticas S17 a partir da concentração de 2,5 ?M sem estímulo e 1,0 ?M com estímulo de PDGF. As IC50 calculada para as CP sem estímulo foi 14,2 ?M e com estímulo 13,5 ?M; para as células S17 sem estímulo foi 9,1 ?M e com estímulo 8,8 ?M. Na concentração de 7,5 ?M, o efeito inibitório foi de 48% e 55% para células S17 com e sem estimulo de PDGF, respectivamente. Com auxílio da técnica LA/BE confirmou-se os resultados anteriores de viabilidade da célula S17 sob ação do Imatinibe e mostrou que, em 5,0 ?M não houve processo de apoptose, porém em 7,5 ?M induziu apoptose.O imatinibe exerceu bloqueio do ciclo celular das células S17 nas fases G0/G1 e G2/M sem estímulo e com estímulo do PDGF. Com estímulo de PDGF houve aumento de células na fase S, sugerindo que o PDGF estimula as células S17 e que o fármaco atua principalmente nos fibroblastos em proliferação. / The antineoplastic agents affect cells that are in the process of cell division, thus rapid rate of cell renewal and differentiation of bone marrow (BM) makes the hematopoietic system a susceptible target toxicity by these agents. The BM is formed by a stroma composed of many cell types (fibroblasts, macrophages, endothelial cells and adipocytes) and an extracellular matrix that together form an ideal microenvironment favoring the modulation of quiescence, self-renewal and commitment of mesenchymal stem cells (MSCs), as well as proliferation, maturation and apoptosis of hematopoietic cells. In this context, the objective this work was to evaluate the effects of Imatinib Mesylate (IM), a drug inhibitor of tyrosine kinase proteins and receptors as c-Kit, platelet derived growth factor (PDGF), stem cell factor (SCF), c-Abl, BCR-ABL, involved in different signaling pathways of hematopoietic progenitor cells (CFU-GM) and stromal cells from BM of healthy mice. By clonogenic assays in semisolid medium and culture of adherent stromal cells from the BM, we evaluated the potential myelosuppressive of IM through the test cell viability MTT and Acridine Orange/Ethidium Bromide (AO/EB), cytochemistry to identify of adipocytes, cell cycle, cell proliferation by incorporation of BrdU and expression of alpha-smooth muscle actin (a-SMA). As for hematopoietic cells, the results showed that the MI gradually reduced the growth of colonies of granulocytes/macrophages (CFU-GM), the IC50 obtained was 26.5µM and total inhibition occurred at 60µM. The stromal cells in 4 and 8 days of culture, no significant difference in the percentage of proliferation measured by BrdU incorporation, and in 10µM there was a tendency to increase proliferation. In 14 days the proliferation decreased gradually and at 7.5 µM proliferation was reduced to about 5%. The percentage of viable cells by MTT was similar at 7 and 14 days, rising to 10µM and then reducing to reach 0% at 25µM. The morphology of most cells untreated and cells treated with low concentrations of IM (2.5µM) was typically fibroblastic, and in more elevated concentrations of IM (mainly from 10µM), the predominant cells were rounded morphology of type macrophages, which were inhibited only at high concentrations (20-25µM). Fluorescence with AO/EB showed the same results seen in the MTT and revealed the presence of apoptotic bodies, especially in 20µM, confirming the drug effect on cell viability. The cell cycle of stromal cells from the BM on day 14 of culture indicates the occurrence of blockage of cells in G0/G1 phase (66.3% in control to 91.5% in 15µM) and decreased the percentage of cells in S phase and G2/M. At 2.5µM, the expression of a-SMA decreased to 45.74% and was almost completely inhibited from 10µM. The presence of adipocytes stained with Oil Red was observed only in the control group. These results together suggest a myelossupressive effect of IM on healthy cells of the BM, which is undesirable since the majority of patients of will be exposed for a long time with this drug.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufsc.br:123456789/94653 |
| Date | 25 October 2012 |
| Creators | Christofoletti, Larissa Duarte |
| Contributors | Universidade Federal de Santa Catarina, Vituri, Cidônia de Lourdes |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 107 p.| il., grafs., tabs. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFSC, instname:Universidade Federal de Santa Catarina, instacron:UFSC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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