Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-10-10Bitstream added on 2014-08-13T18:01:11Z : No. of bitstreams: 1 000736177_20181010.pdf: 393728 bytes, checksum: e7efdc1d70357c8accce55f226b8cee1 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-10-19T12:50:41Z: 000736177_20181010.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-10-19T12:51:40Z : No. of bitstreams: 1 000736177.pdf: 1699234 bytes, checksum: 7c74f9ca1ff900faa29c2fee3b7096f2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bolsa de estudos / Introdução: a integrina αvβ3 causa adesão celular à vitronectina e está expressa em diversos tumores humanos, mas está em níveis muito reduzidos nos tecidos normais, sendo mais notável em células derivadas da medula óssea. A desintegrina recombinante DisBa-01 se liga à integrina αvβ3, inibindo a adesão celular à vitronectina. Apresenta também uma capacidade antimetastática in vivo e antitrombótica in vitro. As micelas são sistemas de transporte que podem direcionar o fármaco ao tecido alvo de forma passiva, se acumulando onde a microvasculatura esteja mais permeável, como no caso do câncer. Objetivos: verificar a perda de adesão, a liberação de mediadores, a citotoxicidade e a anoikis gerados pela desintegrina DisBa-01, tanto em sua forma livre como incorporada em micelas, em linhagens celulares que expressem ou não a integrina αvβ3. Métodos: a desintegrina foi expressa em bactérias Escherichia coli a partir de um cDNA fusionado ao vetor pET28a, e então purificada por cromatografias e diálises. As micelas controle (M-C) ou contendo a desintegrina (M-DB) foram estruturadas com polissorbato 80 e fosfatidilcolina de soja, e foi observado o diâmetro médio e índice de polidispersidade por espalhamento dinâmico de luz, o potencial zeta por microeletroforese, a eficiência de encapsulação por dosagem protéica de Lowry, a avaliação estrutural da desintegrina encapsulada por espectroscopias de dicroísmo circular e de fluorescência e a estrutura das micelas pela curva de SAXS. As micelas e a proteína livre foram testadas em linhagens HUVEC e SC, contendo a integrina αvβ3, e K562, não contendo esta integrina. Foram avaliados a citotoxicidade pelo teste de MTT, a inibição de adesão celular ou descolamento a vitronectina e fibronectina por quantificação das células aderidas com cristal violeta, a anoikis por observação das células viáveis e em apoptose se aderidas ou não por MTT, Apo-Direct ... / Introduction: integrin αvβ3 sustain cellular adhesion to vitronectin and is expressed on a diversity of human tumors but is present at very low levels on normal tissues, with notable expression on bone marrow-derived cells. The recombinant disintegrin DisBa-01 binds to αvβ3 integrin, inhibiting cell adhesion to vitronectin. It also features an in vivo anti-metastatic ability and in vitro anti-thrombotic function. Micelles are a transport system that can direct a drug to the target tissue passively, accumulating where microvasculature is more permeable, which happens on cancer. Objectives: to verify adhesion loss, mediators production, citotoxicity and anoikis generated by disintegrin DisBa-01, both in its free form or incorporated into micelles, in cell lines expressing or not αvβ3 integrin. Methods: the disintegrin was expressed in Escherichia coli using a cDNA fused to vector pET28a, and then purified by chromatography and dialyses. Control micelles (M-C) or containing disintegrin (M-DB) were assembled using polysorbate 80 and soy phosphatidylcholine, and it was observed the average diameter and polydispersity index by dynamic light scattering, zeta potential by microelectrophoresis, the efficiency of encapsulation by protein determination using Lowry reagent, structural assessment of disintegrin encapsulated by circular dichroism spectroscopy and fluorescence spectroscopy and micelles’ structure by SAXS curve. The protein free or incorporated into micelles were tested in HUVEC and SC, containing integrin αvβ3, and in K562, not containing this integrin. Cytotoxicity was evaluated by MTT assay, inhibition of cell adhesion and detachment to vitronectin or fibronectin by quantifying the adherent cells with crystal violet, the anoikis by observation of viable cells and apoptosis, whether attached or not, by MTT, Apo-Direct and annexin V, and production of mediators VEGF-A, IL-8, TGF-β, TNF-α, IL-12 and ... / FAPESP: 10/05428-0 / FAPESP: 10/01568-2

Orientadora : Profa. Dra. Maria Aparecida Barbato Frazão Vital / Co-orientadora : Profª Drª Valdo José Dias da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba,17/09/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Farmacologia / Resumo: A Doença de Parkinson é uma doença neurodegenerativa caracterizada pela perda de neurônios dopaminérgicos na SNpc. O presente trabalho visou investigar em duas linhas distintas o papel do microambiente celular na neurodegeneração. Na primeira linha de investigação, os animais foram avaliados quanto ao efeito da pinealectomia sobre a neurodegeneração e estresse oxidativo induzido pela administração de MPTP e 6-OHDA. A administração dessas neurotoxinas resultou em comprometimento motor em ambos os grupos Sham e Px 24 h após a lesão no teste do campo aberto. Contudo, 7 e 14 dias após a cirurgia, os animais lesados pertencentes ao grupo Sham apresentavam recuperação motora, ao contrário dos grupos Px e lesados. No teste de natação forçada os animais lesados apresentavam menor tempo de natação em relação aos grupos controles, e ainda, os grupos Sham- 6-OHDA e Px-6-OHDA apresentaram maior tempo de imobilidade comparado aos controles. Corroborando com essas alterações, significativa degeneração dopaminérgica foi evidenciada nos animais lesados, e ainda, aumento na quantidade de células contendo ROS nesses grupos em relação aos grupos controles. Já no segundo estudo, o modelo do MPTP foi empregado para avaliar o efeito do transplante de BMMC ou BM-MSC em diferentes tempos, imediatamente e 24 h após a infusão da neurotoxina. A infusão de MPTP resultou em quebra da BHE e prejuízo motor 24 h após a infusão de MPTP, e o tratamento com BMMC imediatamente após a lesão aumentou significativamente a perda de células TH-ir nesses animais, ao contrário do tratamento com BM-MSCs. Por outro lado, o tratamento com BMMC 24 h após a infusão de MPTP resultou em similar perda de neurônios TH-ir comparado ao grupo MPTP-salina. No teste de natação forçada, o grupo MPTP-BMMC apresentou aumento no tempo de imobilidade comparado aos grupos Sham e MPTP, e ainda, aumento no número de células CD45+ e micróglia ativada nas secções estudadas. O presente estudo sugere que o transplante de BM-MSC em animais lesados com MPTP module positivamente o microambiente neuronal favorecendo a sobrevivência neuronal, enquanto que o transplante com BMMCs e a redução dos níveis fisiológicos de melatonina mostraram-se desfavorável ao microambiente neuronal. Palavras-chave: MPTP, 6-OHDA, BMMC, BM-MSC, pinealectomia e DP. / Abstract: Parkinson's disease (PD) is a neurodegenerative disease characterized by loss of dopaminergic neurons in the SNpc. This study aimed to investigate the role of cellular microenvironment on the neurodegenration in two distinct investigation lines. In the first line, the animals were evaluated for the effect of pinealectomy (Px) on neurodegeneration and oxidative stress induced by MPTP or 6-OHDA. The administration of these neurotoxins results in motor impairment in both sham and Px groups 24 h after injury in the open field test. However, 7 and 14th days after injury, the injured animals belonging to Sham group showed recovery of motor abnormalities, unlike injured animals of the Px-groups. In the forced swim test, the injured animals exhibited shorter swimming compared to control groups, and futher, Sham-6-OHDA and Px-6-OHDA groups showed a significant increase in immobility time compared to control groups. Supporting these alterations, significant dopaminergic loss in animals injured was observed in comparison to control groups, and futher, increased quantity of cellular ROS in these groups. In the second study, the MPTP model was used to evaluate the effect of BMMC and BM-MSCs at different times, immediately and 24 hours, after neurotoxins infusion. The MPTP infusion resulted in breakdown of bloodbrain barrier and motor impairment 24h after MPTP infusion, and the BMMC treatment immediately after lesion induced a significant increase loss of TH-ir neurons in these animals when compared to MPTP-saline group, in opposite to the BM-MSCs treatment. In the other hand, MPTP-lesioned rats treated with BMMCs 24 h after to neurotoxin infusion showed similar loss of dopaminergic neurons to MPTP-saline. In the forced swimming test, MPTP-BMMC treated group presented an increase in the immobility time compared to sham and MPTP-saline group, and futher increase in the number of CD45-labeled cells and activated microglial cells in the sections studied. This study suggests that the BM-MSCs transplantation in MPTP-lesioned rats positively modulate the microenvironment favoring neuronal neuronal survival, whereas transplantation BMMCs and the reduction of physiological levels of melatonin have proved unfavorable neuronal microenvironment. Keywords: MPTP, 6-OHDA, BMMC, BM-MSC, pinealectomy e PD.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-09Bitstream added on 2014-06-13T18:20:00Z : No. of bitstreams: 1 freitas_npp_me_botfmvz.pdf: 787656 bytes, checksum: 5f94a47897a0f664877ab4d198e94813 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A utilização de células-tronco adultas autólogas surgiu como uma alternativa terapêutica no tratamento de equinos, com resultados bastante promissores. Adicionalmente, a terapia com células alogênicas viabiliza a manutenção de um banco de células, proporcionando assim seu uso imediato. O objetivo deste trabalho foi avaliar, morfologicamente, a resposta inflamatória e detectar as células-tronco mesenquimais (CTMs) marcadas, autólogas e alogênicas, após a inoculação no músculo gluteus medius de equinos. Para tal, foram utilizados 15 equinos, divididos igualmente em três grupos de cinco animais, sendo o grupo 1 (controle), grupo 2 (células autólogas), grupo 3 (células alogênicas). Os animais foram submetidos à punção de medula óssea e após o cultivo, essas células foram caracterizadas fenotipicamente por citometria de fluxo e submetidas à diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, para caracterização da linhagem mesenquimal. Em seguida, as células autólogas e alogênicas foram marcadas com o nanocristal Qtracker 655® e inoculadas no músculo gluteus medius dos grupos 2 e 3, respectivamente. No grupo 1 foi inoculado PBS (solução salina tamponada com fosfato). Em cada grupo foi realizada uma biópsia 30 dias antes e outra 24h após o transplante das células e à inoculação do PBS. A análise dos resultados das biópsias demonstrou, por meio de colorações como Hematoxilina-Eosina, Gomori Modificado e NADH-tr, que a morfologia e o metabolismo das fibras foram mantidos tanto no grupo controle como nos grupos tratados. Além disso, foi possível detectar as CTMs marcadas no tecido muscular por meio de imunofluorescência. Portanto, concluiu-se que as CTMs autólogas e alogênicas transplantadas foram detectadas no tecido muscular de equinos e morfologicamente, não provocaram reação inflamatória 24h após o transplante / The use of autologous adult stem cells appeared as therapeutic alternative in treatment of horses with promising results. Allogeneic cell therapy enables maintenance a bank of cells, thereby providing immediate use. The aim of this study was to evaluate the inflammatory response and tracker autologous and allogeneic, mesenchymal stem cell (MSCs) after gluteus medius muscle horse injection. In this research, we used fifteen horses that were divided equally into three groups of five animals each, with Group 1 (control), Group 2 (autologous cells) and Group 3 (allogeneic cells). The animals undergo bone marrow aspiration for culture and isolation of mesenchymal cells. These cells, after culture were phenotypically characterized by flow cytometry and differentiation for characterization of the mesenchymal lineage. Upon such identification, autologous and allogeneic cells were marked with Qtracker 655® and inoculated in the gluteus medius muscle of groups 2 and 3, respectively. In group 1 was inoculated an equal volume of PBS (phosphate buffered saline). In each group a biopsy was done thirty days before and 24h after inoculation of the cells and PBS. Biopsies results showed through stains such as hematoxylin-eosin, modified Gomori and NADH-tr, that the tissue integrity and fiber metabolism was maintained in both, control and treated groups. Additionally, was possible to detect MSCs tracked in muscle tissue through immunofluorescence. Therefore, we conclude that autologous and allogeneic BM-MSCs could be detected in muscle tissue and through morphology analysis, caused no inflammatory reaction, 24 hours after transplantation

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-11Bitstream added on 2014-08-13T18:00:42Z : No. of bitstreams: 1 000755550_20151031.pdf: 220836 bytes, checksum: 87b354d7a24b15fa538662e0ef64bad7 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-11-03T14:39:17Z: 000755550_20151031.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-11-03T14:40:19Z : No. of bitstreams: 1 000755550.pdf: 553044 bytes, checksum: 424382ed9bb35c0860f257d171e5ed77 (MD5) / O trabalho teve por objetivo avaliar clínica e laboratorialmente a viabilidade e a segurança do transplante intratecal de células-tronco mesenquimais autólogas e alogênicas provenientes da medula óssea (CTM-MO) de cães. Foram utilizados 15 cães, sem raça definida, adultos, de ambos os sexos, clinicamente saudáveis, excetuando dois que apresentavam trauma medular crônico. Foram divididos em três grupos, contendo cinco animais cada. As CTM-MO foram obtidas pela punção da medula óssea, isoladas e cultivadas. O grupo A foi transplantado com CTM-MO autólogas por via intratecal através da cisterna magna, enquanto que o grupo B recebeu as CTM-MO alogênicas e o grupo C (controle) foi aplicado solução tampão fosfato-salina (PBS). O líquido cefalorraquidiano (LCR) foi obtido imediatamente antes do transplante das CTM-MO (momento 1) e no quinto dia após (momento 2), para avaliação físico-química, citológica e da concentração de metaloproteinases (MMP-2 e MMP-9). Todos os animais foram acompanhados por exame físico neurológico pré e pós-transplante. Pelas avaliações clínicas e laboratoriais, não se observaram alterações significativas após o transplante das CTM-MO autólogas e alogênicas por via intratecal, demonstrando ser uma via segura e viável para a utilização de terapia celular em cães / The study aimed to evaluate clinical and laboratory viability and safety of intrathecal transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC) autologous and allogeneic of dogs. A total of 15 dogs, mixed breed, adults of both sexes, clinically healthy, except two who had chronic spinal trauma. They were divided into three groups with five animals each. BM-MSC were obtained by puncture of the bone marrow, isolated and cultured. Group A was transplanted with autologous BM-MSC intrathecally via the cisterna magna, while group B received allogenic BM-MSC and group C (control) was administered phosphate buffered saline (PBS). Cerebrospinal fluid (CSF) was obtained immediately before transplantation of BM-MSC (moment 1) and the fifth day after (moment 2) for physico-chemical, cytological and the concentration of matrix metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9 .) All Animals were monitored by neurological examination before and after transplantation. By clinical and laboratory evaluations, no significant changes were observed after transplantation of BM-MSC autologous and allogeneic intrathecal, proving to be a safe and viable for the use of cell therapy in dogs

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-graduação em Farmácia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T14:09:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282615.pdf: 1949422 bytes, checksum: 590c4d341ae6a1774c58a4fb5020771a (MD5) / A mielofibrose primária (MP) é uma desordem mieloproliferativa crônica caracterizada pela hiperplasia e fibrose medular. A fibrose característica dessa desordem está relacionada à liberação de fatores de crescimento hematopoiéticos, dentre eles o fator derivado de plaquetas, que estimula a proliferação de fibroblastos, com conseqüente depósito de fibras colágenas e reticulínicas. O desenvolvimento de fibras de colágeno no lugar do tecido hematopoiético normal é o responsável pela maioria dos sintomas da doença. O exame histopatológico revela o aumento da reticulina fibrilar, do colágeno e dos fibroblastos na medula óssea (MO). O tratamento da doença é paliativo, visando amenizar os sintomas e melhorar a qualidade de vida do paciente. Atualmente não existe nenhuma terapia capaz de inibir o processo fibrótico. O objetivo desse trabalho é verificar o efeito do fármaco imatinibe em linhagens de células provenientes do estroma da MO de camundongos e linhagem celular fibroblástica S17 sob estímulo do PDGF in vitro na busca de uma terapia eficaz para a MP. Este fármaco foi desenvolvido para o tratamento da leucemia mielóide crônica e atualmente tem sido alvo de estudo para outras doenças. A partir da realização de cultura primária da medula óssea de camundongos (CP) e cultura das células S17 foi avaliada: a viabilidade celular do estroma medular e das células hematopoéticas pelo método de azul de tripan e 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, a yellow tetrazole (MTT), a viabilidade celular/apoptose das células S17 pelo método de laranja de acridina/brometo de etídio (LA/BE) e o ciclo celular pelo iodeto de propídio (IP) das células S17. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em CP a partir da concentração de 2,5 ?M em células do estroma e em células hematopoéticas e sob o estímulo do PDGF o efeito inibitório foi a partir de 2,5 ?M e 1,0 ?M respectivamente. O tipo celular predominantemente afetado pelo imatinibe nas CP foi os fibroblastos. O imatinibe exerceu um efeito inibitório sobre a viabilidade celular em células fibroblásticas S17 a partir da concentração de 2,5 ?M sem estímulo e 1,0 ?M com estímulo de PDGF. As IC50 calculada para as CP sem estímulo foi 14,2 ?M e com estímulo 13,5 ?M; para as células S17 sem estímulo foi 9,1 ?M e com estímulo 8,8 ?M. Na concentração de 7,5 ?M, o efeito inibitório foi de 48% e 55% para células S17 com e sem estimulo de PDGF, respectivamente. Com auxílio da técnica LA/BE confirmou-se os resultados anteriores de viabilidade da célula S17 sob ação do Imatinibe e mostrou que, em 5,0 ?M não houve processo de apoptose, porém em 7,5 ?M induziu apoptose.O imatinibe exerceu bloqueio do ciclo celular das células S17 nas fases G0/G1 e G2/M sem estímulo e com estímulo do PDGF. Com estímulo de PDGF houve aumento de células na fase S, sugerindo que o PDGF estimula as células S17 e que o fármaco atua principalmente nos fibroblastos em proliferação. / The antineoplastic agents affect cells that are in the process of cell division, thus rapid rate of cell renewal and differentiation of bone marrow (BM) makes the hematopoietic system a susceptible target toxicity by these agents. The BM is formed by a stroma composed of many cell types (fibroblasts, macrophages, endothelial cells and adipocytes) and an extracellular matrix that together form an ideal microenvironment favoring the modulation of quiescence, self-renewal and commitment of mesenchymal stem cells (MSCs), as well as proliferation, maturation and apoptosis of hematopoietic cells. In this context, the objective this work was to evaluate the effects of Imatinib Mesylate (IM), a drug inhibitor of tyrosine kinase proteins and receptors as c-Kit, platelet derived growth factor (PDGF), stem cell factor (SCF), c-Abl, BCR-ABL, involved in different signaling pathways of hematopoietic progenitor cells (CFU-GM) and stromal cells from BM of healthy mice. By clonogenic assays in semisolid medium and culture of adherent stromal cells from the BM, we evaluated the potential myelosuppressive of IM through the test cell viability MTT and Acridine Orange/Ethidium Bromide (AO/EB), cytochemistry to identify of adipocytes, cell cycle, cell proliferation by incorporation of BrdU and expression of alpha-smooth muscle actin (a-SMA). As for hematopoietic cells, the results showed that the MI gradually reduced the growth of colonies of granulocytes/macrophages (CFU-GM), the IC50 obtained was 26.5µM and total inhibition occurred at 60µM. The stromal cells in 4 and 8 days of culture, no significant difference in the percentage of proliferation measured by BrdU incorporation, and in 10µM there was a tendency to increase proliferation. In 14 days the proliferation decreased gradually and at 7.5 µM proliferation was reduced to about 5%. The percentage of viable cells by MTT was similar at 7 and 14 days, rising to 10µM and then reducing to reach 0% at 25µM. The morphology of most cells untreated and cells treated with low concentrations of IM (2.5µM) was typically fibroblastic, and in more elevated concentrations of IM (mainly from 10µM), the predominant cells were rounded morphology of type macrophages, which were inhibited only at high concentrations (20-25µM). Fluorescence with AO/EB showed the same results seen in the MTT and revealed the presence of apoptotic bodies, especially in 20µM, confirming the drug effect on cell viability. The cell cycle of stromal cells from the BM on day 14 of culture indicates the occurrence of blockage of cells in G0/G1 phase (66.3% in control to 91.5% in 15µM) and decreased the percentage of cells in S phase and G2/M. At 2.5µM, the expression of a-SMA decreased to 45.74% and was almost completely inhibited from 10µM. The presence of adipocytes stained with Oil Red was observed only in the control group. These results together suggest a myelossupressive effect of IM on healthy cells of the BM, which is undesirable since the majority of patients of will be exposed for a long time with this drug.

Orientadora : Profª Drª Valéria Maria Munhoz Sperandio Roxo / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 18/03/2011 / Inclui bibliografia / Resumo: O HLA-E é um gene do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) de classe I não clássico, o qual apresenta limitado polimorfismo e baixos níveis de expressão tecidual. Atualmente estão descritos na literatura nove alelos, sendo que somente três produtos protéicos com diferentes sequências de aminoácidos são codificados. Suas variantes polimórficas estão frequentemente associadas a vários eventos, como por exemplo, defesa do organismo contra infecções virais e bacterianas, abortamento recorrente, transplantes de células tronco-hematopoiéticas e órgãos sólidos. As moléculas de HLA-E podem interagir tanto com os receptores da imunidade inata quanto adaptativa, promovendo assim a inibição das células NK através de seus receptores CD94/NKG2A ou a ativação das células TCD8+. No presente estudo foram investigados pela técnica de sequenciamento de DNA os polimorfismos do gene HLA-E, bem como suas frequências alélicas, genotípicas, haplotípicas e desequilíbrio de ligação, em uma amostra composta de 152 (cento e cinquenta e dois) indivíduos afroparanaenses. Observou-se que o alelo com maior frequência na amostra analisada foi o E*01:01 (59.21%). Por sua vez o alelo E*01:04 apresentou frequência igual a zero. Sendo assim, não foi possível confirmar sua existência, corroborando a hipótese que este alelo possa ser um artefato de 34 sequenciamento e sua presença na lista de alelos conhecidos terá que ser questionado. As frequências genotípicas e alélicas estão em equilíbrio de Hardy-Weinberg e foram achados cinco haplótipos mais frequentes na população. Foram realizadas comparações da amostra analisada com diferentes populações mundiais. / Abstract: HLA-E is a gene of major histocompatibility complex (MHC) class I nonclassical, which has limited polymorphism and low levels of tissue expression. Currently are described in the literature nine alleles, only three products with different protein sequences of amino acids are codified. Its variants polymorphic are frequently associated with several disorders, such as for example, defense against viral and bacterial infections, miscarrying applicant, stem cell transplantation-hematopoietic and solid organ transplants. The molecules of HLA-E can interact with both receptors innate immunity as adaptive, thus promoting the inhibition of NK cells through its receptors CD94/NKG2A or the activation of cells TCD8+. In this study was investigated by the technique of DNA sequencing, the polymorphism of HLA-E gene, as well as their allelic frequencies, genotypic, haplotypes and imbalance of connection, a composite sample of individuals negroids paranaenses. Observed the allele with greater frequency in the sample analyzed E*01:01 (59.21 %). In turn the allele E*01:04 presented frequency equal to zero. Thus, it was not possible to confirm its existence, suggesting that this allele may be an artifact of sequencing and its predominance in the list of alleles known will have to be questioned. The genotypic frequencies are in Hardy-Weinberg and five haplostypes were found more likely in the population. Checke will the importance of this study from the data generated, which will give a better basis for the elucidation of the effect ov the polimorphism ov Hla-E in clinical practice.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-09-10Bitstream added on 2014-06-13T18:20:27Z : No. of bitstreams: 1 gasparotto_vpo_me_botfm.pdf: 823732 bytes, checksum: 72bbebb42d3239b78a28393a5aa3b0b7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O estudo avaliou a viabilidade in vitro do biomaterial “Selante de Fibrina derivado de veneno de serpente” (SF), como arcabouço para células tronco mesenquimais (CTMs) de ratos. O SF é um material caracterizado como adesivo biológico, e foi produzido e fornecido pelo Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, CEVAP, Brasil. As CTMs foram coletadas a partir da medula óssea de fêmures e tíbias de ratos e foram caracterizadas por meio de citometria de fluxo com auxilio de marcadores positivos: CD 44 e CD 90 (CTMs) e marcador negativo: CD 34 (células tronco hematopoiéticas). Cultivos foram induzidos para diferenciarem-se em linhagens específicas (osteogênico, condrogênico e adipogênico). Para avaliação do crescimento in vitro e a viabilidade celular em conjunto ao biomaterial foram utilizadas microscopia óptica de luz invertida, microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de varredura e transmissão. O SF em contato com as CTMs não induziu a diferenciação espontânea para as linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica. As diferentes técnicas de avaliação microscópica utilizadas mostraram que o SF foi capaz de realizar a captura e manutenção das CTMs e houve interação das células com o interior e superfície do biomaterial. Portanto, a coleta, o cultivo e a caracterização das CTMs de ratos foram possíveis. O SF mostrou-se eficiente como arcabouço biológico e interagiu com as células tronco mesenquimais mantendo-as viáveis, oferecendo-se como uma ferramenta de uso clínico-cirúrgico alternativa para processos regenerativos visando terapias mais eficientes / This study evaluated the in vitro viability of biomaterial Fibrin Sealant (FS) derived from snake venom as a scaffold for rat mesenchymal stem cells (MSCs). The FS is characterized as a biological adhesive material, and is produced and was supplied by the Center for the Study of Venoms and Venomous Animals, CEVAP, Brazil. MSCs were collected from the bone marrow of femurs and tibias of rat and were characterized using flow cytometry with CD 44 and CD 90 positive markers (MSC) and CD34 negative marker (mononuclear stem cells). Cultivations were induced to differentiate into specific cell lineage (osteogenic, chondrogenic and adipogenic). To evaluate the in vitro growth and cell viability with the biomaterial were used inverted light optical microscopy, fluorescence microscopy and scanning electron microscopy and transmission. The SF did not cause the spontaneous differentiation in contact with MSCs to osteogenic, chondrogenic and adipogenic lineage. Different microscopy techniques showed that the SF was able to accomplish the capture and maintenance of MSCs and there was interaction with the cell interior and surface of the biomaterial. Finally, the collection, cultivation and characterization of rat MSCs were possible. The SF was effective as a biological scaffold and interacted with the MSCs keeping them viable offering itself as a tool for clinical and surgical alternative providing clinical and surgical therapies more efficient for regenerative processes