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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Desde sua associação com as doenças gastroduodenais como a úlcera péptica, a gastrite crônica e o câncer gástrico em 1982, a infecção por Helicobacter pylori, é reconhecida como uma das mais prevalentes, infectando cerca de 50% da população mundial. No entanto, devido a sua imensa variabilidade na prevalência, nos fatores de virulência e no desfecho da infecção, estudos regionais são sempre recomendados. Por ser uma bactéria fastidiosa, H. pylori tem no seu isolamento um método demorado, não possuindo um meio de cultivo ideal e por isso apresenta diferentes resultados com esta metodologia. A histologia, é o método mais utilizado na prática para a detecção deste microrganismo, permitindo também a avaliação da mucosa gástrica e do seu grau de inflamação. Técnicas moleculares como reação em cadeia da polimerase também são muito usadas em pesquisas para detecção da bactéria e de genes de virulência, a exemplo, do gene cagA. Estudos demonstram que a presença deste gene pode caracterizar as linhagens de acordo com a maior intensidade da inflamação deflagrada nas regiões gástricas. No presente estudo, coletamos biópsias do antro e corpo gástrico de 72 pacientes entre 19 e 77 anos, com lesões gastroduodenais evidenciadas na endoscopia digestiva alta. O isolamento da bactéria a partir de fragmento do antro, foi realizado em meio Brucella com albuMAXII ®. Em 64% (46/72) das amostras visualizamos colônias puntiformes que imediatamente foram positivas no teste da urease
O DNA destes isolados foram submetidos a PCRs para os genes glmM (codifica uma fosfoglucosamina mutase) e vacA (codifica a citotoxina vacuolizante VacA), obtendo-se amplificação em 91% (42/46) e em 82% (38/46) dos isolados, respectivamente. Para as amostras negativas em cultivo, procedemos à extração do DNA diretamente do tecido gástrico e posterior amplificação do gene glmM. Das 26 amostras testadas, o gene glmM foi amplificado em 4 (15%) amostras de tecido gástrico. Para caracterizar as linhagens, as amplificações também foram realizadas para o gene cagA, sendo este evidenciado em 65% (30/46) dos isolados. As análises histopatológicas a partir de biópsias do antro e corpo revelaram a bactéria em 77% (56/72) das amostras, além de avaliar o grau de inflamação nestas duas regiões. Estes achados foram então associados com as respectivas linhagens cagA+ e cagA-. Os resultados demonstraram atividade inflamatória moderada-acentuada no antro (54,1%-45,8%) e corpo (58,3%-37,5%) gástrico associados a linhagens cagA+, e também no antro associado a linhagens cagA- (46,1%-38,4%). No corpo gástrico, no entanto, resultados diferentes foram observados para as linhagens cagA- com amostras apresentando leve (46,1%) ou acentuado infiltrado inflamatório (38,4%). Esses dados podem representar a interação de outros fatores no desfecho da inflamação como polimorfismos nos genes relacionados a resposta inflamatória e ainda, a presença de outros genes de virulência nas linhagens estudadas / Since its association with gastroduodenal diseases such as peptic ulcer, chronic gastrites, and gastric cancer in 1982, Helicobacter pylori infection has been recognized as one of the most prevalent, infecting about 50% of the world population. However, due to its immense variability in prevalence, virulence factors and outcome of infection, regional studies are always recommended. Because it is a fastidious bacteria, H. pylori is a time-consuming in its isolation method, having no ideal culture medium and therefore presents different results with this methodology. Histology is the most common method in clinical practice for the detection of this microorganism, allowing the evaluation of the mucosa and the degree of inflammation. Molecular techniques such as polymerase chain reaction are also widely used in research to detect the bacteria and virulence genes, like cagA gene. Studies have shown that the presence of this gene may characterize the strains according to the greater intensity of inflammation triggered in gastric regions. In the present study, we collected biopsies of the gastric antrum and body of 72 patients, with ages between 19 and 77 years old, whose endoscopy showed gastroduodenal lesions. The isolation of the bacteria from an antral biopsy was accomplished in Brucella media with albuMAX II®. In 64% (46/72) of the samples, we visualized pinpoint colonies that were immediately positive in the urease test. We performed PCR assays on DNA from the isolates for the glmM (encodes for a phophoglucosamine mutase) and vacA (encodes the production of a vacuolating cytotoxin) genes, resulting in amplification of 91% (42/46) and 82% (38/46), respectively. For negative samples in culture, we proceed to DNA extraction directly from gastric tissue and subsequent amplification for the gene glmM. Of 26 samples tested, the glmM.gene was amplified in 4 (15%) of the gastric tissue samples. To characterize the strains, the amplifications were also performed for the cagA gene, which was evidenced in 65% (30/46) of the isolates. The histopathological analysis using samples of the gastric antrum and body, revealed the bacteria in 77% (56/72) of the samples besides evaluating the degree of inflammation in these two regions. These findings were then correlated with the respective cagA + and cagA- strains. The results showed moderate to severe inflammatory activity in the gastric antrum (54.1%-45.8%) and body (58.3%-37.5%) associated with cagA + strains and also in the antrum associated with cagA- strains (46.1%-38.4). In the gastric body, however, different results were observed for cagA- strains with samples presenting mild (46.1%) or severe (38.4%) inflammatory infiltrate. Such data may represent the interaction of other factors in the outcome of inflammation as polymorphisms in the genes related to inflammatory response, and the presence of other virulence genes in the studied strains. / 2017-02-01
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/13986 |
| Date | January 2015 |
| Creators | Reis, Letícia Vellozo dos |
| Contributors | Barroso, David Eduardo, Mangia, Adriana Hamond Regua, Alves, Carlos Roberto, Martins, Adriana Sotero, Calvet, Cláudia Magalhães, Pereira, Mirian Claudia de Souza |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Restricted Acess, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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