Nos últimos anos o gene da leptina, vem sendo objeto de intensa investigação em bovinos pela sua associação com características econômicas, tais como, metabolismo energético, eficiência e consumo alimentar, deposição de gordura e características reprodutivas. Estudos anteriores apontam que esse gene possa influenciar o início da puberdade tanto em animais como em humanos. Tendo em vista a importância desse gene para a pecuária nacional, os objetivos do presente estudo foram determinar a relação entre expressão do gene da leptina e puberdade em novilhas Nelore; identificar polimorfismos no promotor e no gene da leptina; avaliar os efeitos desses polimorfismos com a puberdade, expressão do gene e diferença esperada na progênie (DEP) para probabilidade de prenhez de novilha aos 14 meses (PP14). Amostras de tecido adiposo subcutâneo foram coletadas de 28 novilhas Nelore com idade em torno de 25 meses, sendo 14 pré-púberes e 14 púberes. Análises foram feitas por RT-PCR quantitativa, utilizando cDNA sintetizado a partir de RNA total extraído das amostras de tecido adiposo. A expressão da leptina foi 2,1 vezes maior (P=0,0337) no tecido adiposo das novilhas púberes, sugerindo que esse gene possa estar influenciando o início da puberdade nestes animais. Amostras de DNA foram extraídas para identificar polimorfismos no gene e no promotor da leptina que poderiam estar associados com a puberdade e a expressão do gene no tecido adiposo subcutâneo. Foram identificados 37 polimorfismos, dos quais 20 não haviam sido reportados previamente. Nenhum dos 37 polimorfismos encontrados ou dos 10 haplótipos formados a partir dos polimorfismos, foram associados (P0,05) com a maior expressão do gene ou com a puberdade nestas novilhas. Aparte disso, o DNA de 96 fêmeas Nelore, sendo 48 com alta DEP para PP14 e 48 com baixa DEP para PP14 pertencentes a outro rebanho, foi extraído a partir de sangue periférico. Uma região de 715 pb do gene da leptina foi seqüenciada nestas 96 amostras. Nenhuns dos 11 polimorfismos identificados apresentaram associação (P0,05) com os valores de alta ou baixa DEP para PP14, entretanto a substituição do haplótipo 1, o mais freqüente, pelo haplótipo 2 revelou uma associação sugestiva (P=0,0923) com a característica, indicando que a substituição possa estar contribuindo para a variação da DEP para PP14. Fêmeas com o haplótipo 2 em média tiveram efeito de -9,51 a DEP para PP14 em relação aquelas com o haplótipo mais freqüente. Este estudo confirma a associação da expressão do gene da leptina com a puberdade, descreve novos polimorfismos identificados neste gene e apresenta resultados iniciais da associação dos polimorfismos com expressão e puberdade em Nelore. / In recent years, the leptin gene has been subject of intense research in cattle, possibly because of its association with economic characteristics, such as, energy metabolism, feed efficiency, feed intake, fat deposition and reproductive characteristics. Previous studies suggest that this gene might be influencing the onset of puberty in both animals and humans. Given the importance of this gene for the national livestock, the goals of this study was to determine the relationship between leptin gene expression and puberty in Nelore heifers; identified polymorphisms in the promoter and leptin gene; evaluate the effect of these polymorphisms on puberty, gene expression and expected progeny difference (EPD) for probability of pregnancy of heifers at 14 months (PP14). Samples of subcutaneous adipose tissue were collected from 28 heifers aged around 25 months, 14 prepubertal and 14 pubertal. Leptin gene expression was determined by quantitative RT-PCR using cDNA synthesized from total RNA extracted from adipose tissue samples. The expression of leptin was 2.1 times higher (P=0,0337) in subcutaneous adipose tissue of pubertal heifers, suggesting that this gene might be influencing the onset of puberty in these animals. DNA from these heifers were extracted to identify polymorphisms in the promoter and leptin gene that could be associated with puberty and gene expression in subcutaneous adipose tissue of these heifers. We identified a total of 37 polymorphisms, 20 of which have not been reported previously. None of the 37 polymorphisms found or the 10 haplotypes formed from the polymorphisms were associated (P0.05) with higher expression of the gene or with puberty in these heifers. Apart from this, DNA of 96 Nelore, being 48 with high EPD for PP14 and 48 with low EPD for PP14 belonging to another herd, was extracted from peripheral blood. A region of 715 bp in the leptin gene was sequenced in these 96 samples. None of the 11 polymorphisms identified were associated (P0.05) with high or low values of EPD for PP14, however replacing the haplotype 1, the most frequent, for haplotype 2 showed a suggestive association (P=0,0923) with the trait, indicating that the replacement can contribute to the variation of EPD for PP14. Females with haplotype 2 had an average effect of -9.51 on EPD for PP14 compared to those with the most frequent haplotype. This study confirms the association of leptin expression on puberty, describes new polymorphisms identified in this gene and presents initial results of the association of polymorphisms with expression and puberty in Nelore.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:usp.br/oai:teses.usp.br:tde-20102010-144728 |
| Date | 05 October 2010 |
| Creators | Savalio, Fernanda Regina Hora |
| Contributors | Coutinho, Luiz Lehmann |
| Publisher | Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP |
| Source Sets | Universidade de São Paulo |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | Dissertação de Mestrado |
| Format | application/pdf |
| Rights | Liberar o conteúdo para acesso público. |
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