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Previous issue date: 2013 / Objectives: to investigate separately the therapeutic potential of neuropeptide NAP and the intra-arterial (IA) transplantation of human umbilical cord blood (HUCB) mononuclear cells in an animal model of neonatal hypoxia-ischemia (HI).Methods: male Wistar rats at postnatal day 7 were subjected to an HI model by permanent occlusion of right common carotid artery and systemic hypoxia (8% O2 for 2 h). The animals were randomly assigned to groups receiving an intraperitoneal injection of NAP (3 μg/g) immediately (0 h) and 24 h after HI. Other animals received HUCB mononuclear cells (1 x 106 or 1 x 107 cells/50 μL) into the left common carotid artery 24 h after HI insult by using the microneedle technique. Only for NAP study, brain DNA damage, lipid peroxidation and reduced glutathione (GSH) content were determined 48 h post-HI insult. The spatial version of the Morris water maze learning task and the stereological volume assessment were performed in adult animals that received both therapies. The accelerated rotarod test and cerebral and body weight determination were applied only for cellular therapy study. The HUCB mononuclear cells migration was monitored through nested-PCR analysis in the brain and systemic organs of transplanted-HI rats. Results: we observed that NAP prevented the acute HI-induced DNA and lipid membrane damage and also recovered the GSH levels in the injured hemisphere of the HI rat pups. Further, NAP was able to hinder impairments in learning and long-term spatial memory and to significantly reduce brain damage in adult animals previously subjected to neonatal HI. The IA transplantation in neonatal HI rat seemed to be a feasible and safe delivery route for HUCB mononuclear cells. The intra-arterially delivered cells hindered dose-dependently the learning and spatial memory impairments without brain damage recovery in adult rats. Additionally we further showed that HI insult or IA cell transplantation had no long-term impact in the body weight and motor function in rodents. The HUCB mononuclear cells could be promptly identified in the ischemic brain after IA transplantation and also in some peripheral organs until at least 30 days later. Conclusions: the viability and long-lasting beneficial effects of neuropeptide NAP and IA transplantation of HUCB mononuclear cells support its translational characteristic for neonatal HI management. Therefore, NAP and intracarotid delivery of cells became promising candidates for the treatment of HI-induced brain damage and life-long disabilities. / Objetivos: investigar, separadamente, o potencial terapêutico do neuropeptídeo NAP e do transplante intra-arterial de células mononucleares de sangue de cordão umbilical humano (CMSCUH) em um modelo experimental de hipóxia-isquemia (HI) neonatal.Métodos: ratos Wistar machos com 7 dias de vida foram submetidos ao modelo de HI neonatal através da oclusão permanente da artéria carótida comum direita e hipóxia sistêmica (8% O2 por 2 h). A administração do neuropeptídeo NAP (3 μg/g, i. p. ) ocorreu imediatamente (0 h) e 24 h após a aplicação do modelo. Já o transplante de CMSCUH (1 x 106 ou 1 x 107 células/50 μL) foi realizado 24 h pós-HI através de técnica de microagulha na artéria carótida comum esquerda. Somente no estudo do NAP, ensaio cometa alcalino, peroxidação lipídica e níveis de glutationa reduzida foram determinados no hipocampo e córtex cerebral 48 h pós-HI. Para ambas as terapias empregaram-se a versão espacial do labirinto aquático de Morris (LAM) e determinação estereológica da volumetria hemisférica cerebral na fase adulta destes animais. Utilizou-se o teste do rotarod acelerado e pesagem corporal e cerebral dos animais adultos apenas no estudo do transplante intra-arterial de CMSCUH. A migração das CMSCUH foi monitorada através da técnica de nested-PCR no cérebro e órgãos sistêmicos. Resultados: o tratamento com NAP restabeleceu a integridade hipocampal e cortical do DNA e membranas lipídicas, junto ao incremento do sistema glutationa. Além disso, o NAP impediu o desenvolvimento de déficits do aprendizado e da memória espacial juntamente à redução da atrofia cerebral em ratos adultos. O transplante intracarotídico de CMSCHU em ratos neonatos HI demonstrou-se factível e seguro. Este tratamento preveniu, de maneira dose-dependente, o desenvolvimento de prejuízo cognitivo de ratos adultos previamente expostos à HI neonatal, sem influência sobre a atrofia cerebral. A função motora e peso corporal de ratos adultos não sofreram influência da HI neonatal ou da administração intra-arterial de CMSCHU. As CMSCHU puderam ser detectadas tanto logo após o transplante como tardiamente (30 dias) no cérebro e órgãos sistêmicos dos animais transplantados. Conclusões: os efeitos benéficos e duradouros do neuropeptídeo NAP e do transplante intra-arterial de CMSCHU, assim como sua viabilidade, fornecem evidências de uma possível translacionalidade destas duas terapias inovadoras para o tratamento da HI neonatal. Desta forma, o neuropeptídeo NAP e a via intracarotídica para o transplante de CMSCHU tornam-se candidatos potenciais para a prevenção do dano HI cerebral e decorrentes sequelas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_PUC_RS:oai:meriva.pucrs.br:10923/4718 |
| Date | January 2013 |
| Creators | Greggio, Samuel |
| Contributors | Costa, Jaderson Costa da |
| Publisher | Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, Porto Alegre |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da PUC_RS, instname:Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul, instacron:PUC_RS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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