RABELO, Alana Fonteles Lima. Caracterização in vivo e in vitro da resposta inflamatória aguda induzida por uma fração proteica isolada do látex de Calotropis procera (Ait.) R. Br. 2014. 117 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-12-15T11:46:29Z
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Previous issue date: 2014 / Calotropis procera is a laticiferous plant belonging to the family Apocynaceae, found in Asia, Africa and South America. Its latex is comprised of a large number of bioactive molecules that show significant pharmacological properties including anti- and pro- inflammatory, antitumor, healing, antimicrobial, among others. The proteins extracted from this latex have multiple immunomodulatory effects, depending on the route of administration utilized. The objective of this study was to characterize the pro- inflammatory response of protein fraction PL latex Calotropis procera in models of peritonitis and subcutaneous air pouch; neutrophil chemotaxis (in vivo and in vitro); the role of resident cells and mediators involved. Swiss mice were used (25-30 g). It was found that PL induced neutrophil migration (MN) in a dose- and time - dependent in models of peritonitis and subcutaneous air pouch. An increase in vascular permeability induced by the administration of PL (1 mg / cav) in the peritoneal cavity in the Evans blue model was demonstrated. The increase in the population of resident macrophages after pre-treatment with thioglycolate intensified the MN induced by PL, with the similar result observed with the mast cell -depleted group by compound 48/80. Mast cells appear to exert an inhibitory modulatory role on neutrophil chemotaxis, whereas macrophages potentiate the MN, possibly through the release of mediators. For investigation of involved mediators, blocking drugs were used before administration of the PL. Pharmacological modulation Dexamethasone (0.5 mg/kg , s.c.), Pentoxifylline (100 mg/kg , s.c.), Thalidomide (50 mg/kg , s.c.), Indomethacin (3 mg/kg , s.c.) and Celecoxib (30 mg/kg , s.c.), but not with Meclizine (40 mg/kg , s.c.) and PCA (10 mg/kg, s.c.) inhibited the MN induced by PL. It was verified by ELISA, that levels of mediators IL-1 and IL-6 were elevated in the peritoneal fluid 4 hours after administration of PL (1 mg/cav, i.p.). The nitrite levels were also higher in the subcutaneous air pouch fluid, demonstrating the involvement of nitric oxide (NO) in the pro-inflammatory effects of LP. PL induced rolling and adhesion of leukocytes to the vascular endothelium of mesenteric mice and neutrophil chemotaxis in vitro. Furthermore, it can directly interact with neutrophils by inducing the synthesis of pro-inflammatory mediators TNF-α, IL- 1β, PGE2 and NO in neutrophil’s culture. In conclusion, PL induces an acute inflammatory response characterized by intense neutrophil migration and increase of vascular permeability. Promotes neutrophil chemotaxis indirectly, via resident macrophages and directly interacting with neutrophils, inducing rolling and adhesion to the endothelium and release of pro-inflammatory mediators. / Calotropis procera é uma planta laticífera pertencente à família Apocynaceae, encontrada na Ásia, África e América do Sul. Seu látex é constituído por um grande número de moléculas bioativas que apresentam relevantes propriedades farmacológicas que inclui anti- e pró-inflamatória, antitumoral, cicatrizante, antimicrobiana, entre outras. As proteínas extraídas deste látex possuem múltiplos efeitos imunomodulatórios, dependendo da via de administração utilizada. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a resposta pró-inflamatória da fração proteica (PL) do látex de Calotropis procera nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutânea; investigando a quimiotaxia de neutrófilos (in vivo e in vitro); o papel das células residentes e os mediadores envolvidos. Foram utilizados camundongos Swiss (25-30 g). Verificou-se que PL induziu migração de neutrófilos (MN) de forma dose-e-tempo dependente nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutânea. Foi demonstrado um aumento na permeabilidade vascular induzido pela administração da PL (1 mg/cav) na cavidade peritoneal no modelo de Azul de Evans. O aumento na população de macrófagos residentes pelo pré-tratamento com tioglicolato, intensificou a MN induzida por PL, sendo observado um resultado semelhante com o grupo depletado de mastócitos pelo composto 48/80. Os mastócitos parecem exercer um papel modulador inibitório sobre a quimiotaxia de neutrófilos, enquanto os macrófagos potencializam a MN, possivelmente por meio da liberação de mediadores. Para investigação dos mediadores envolvidos foram utilizados fármacos bloqueadores específicos antes da administração da PL. A modulação farmacológica com Dexametasona (0,5 mg/kg, s.c.), Pentoxifilina (100 mg/kg, s.c.), Talidomida (50 mg/kg, s.c.), Indometacina (3 mg/kg, s.c.) e Celecoxib (30 mg/kg, s.c.), mas não com Meclizina (40 mg/kg, s.c.) e PCA (10 mg/kg; s.c.), inibiram a MN induzida por PL. Foi verificado por ELISA que os níveis dos mediadores IL-1 e IL-6 estavam aumentados no fluido peritoneal 4 h após a administração de PL (1 mg/cav, i.p.). Os níveis de nitrito também estavam aumentados no fluido da bolsa de ar subcutânea, demonstrando um envolvimento do óxido nítrico (NO) no efeito pró-inflamatório da PL. A PL induziu rolamento e adesão de leucócitos ao endotélio vascular do mesentério de camundongos, bem como quimiotaxia de neutrófilos in vitro. Além disso, foi capaz de interagir diretamente com neutrófilos, induzindo a síntese dos mediadores pró-inflamatórios TNF-α, IL-1β, PGE2 e NO em cultura de neutrófilos. Em conclusão, PL induz uma resposta inflamatória aguda, caracterizada pela intensa migração de neutrófilos e aumento da permeabilidade vascular. Promove quimiotaxia para neutrófilos de forma indireta, via macrófagos residentes, e de forma direta, interagindo com neutrófilos, induzindo rolamento e adesão no endotélio e liberação de mediadores pró-inflamatórios.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/10264 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Rabelo, Alana Fonteles Lima |
| Contributors | Alencar, Nylane Maria Nunes de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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