FIGUEIREDO, Ingrid Samantha Tavares de. Modulação do processo cicatricial de feridas cutâneas experimentais por uma biomembrana de proteínas do látex de Calotropis procera (AIT.) R.Br. 2011. 138 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-29T12:50:41Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_istfigueiredo.pdf: 7404727 bytes, checksum: 88977245350f79a27c739e0c01c24d67 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:55:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_istfigueiredo.pdf: 7404727 bytes, checksum: 88977245350f79a27c739e0c01c24d67 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_istfigueiredo.pdf: 7404727 bytes, checksum: 88977245350f79a27c739e0c01c24d67 (MD5) Previous issue date: 2011 / The latex of the medicinal plant Calotropis procera (Apocynaceae) is a complex chemical, consisting of a variety of molecules and has been widely used in folk medicine on skin diseases. The potential of the latex proteins fraction (LP) in induce cell damage was assessed by MTT and LDH tests. Moreover, LP was used to prepare a biomembrana associated with poly (vinyl alcohol) (BioMem PVA/PL 0,2% and 1%).The physical-chemical properties of control (PVA 1%) and test (BioMem PVA/PL 1%) were assessed by infrared spectroscopy (FTIR) and thermogravimetric (TGA) analysis. The effect of laticifers proteins at healing was investigated after induction of incision or excision wounds on the back of mices, followed by implantation of BioMem PVA/PL 0,2% or 1%. Healing process was evaluated by the parameters: macroscopic analyses (induction of tissue neoformation of incisional wounds and edema, hyperemia, area reduction and re-epithelialization of excision wounds); microscopic (mast cell degranulation, edema, leucocyte infiltrate, number of fibroblasts and collagenesis). Inflammatory markers and mediators (MPO, nitrite, IL-1β e TNF-α) were evaluated in incision and excision wounds. Microvessel density was evaluated in incision wounds. The possible effect of soluble protein fraction (LP) to directly stimulate macrophages was investigated in a cell culture. PL shows no cytotoxicity in vitro in human neutrophils, since the low activity of LDH and high vibility of neutrophils by MTT test. The physico-chemical analysis showed that no strong interaction with PVA and LP occurred, since was not observed the formation of new bands or the displacement of these. Futhermore, the solubility of these compounds became the BioMem PVA/PL more thermally stable. At experimental healing models, macroscopic analyses showed that BioMem PVA/PL 0,2% e 1% leads tissue neoformation in incisional wounds at the 2, 7 and 14 days after membrane implantation. However, no effect on the microvascular density to neoformed tisse of incisional wounds were seen. At excisional wounds, BioMem PVA/PL 0,2% induce increase of edema, but not hyperemia at inflammatory phase. Moreover, accelerated the reduction in the wound area and an improved re-epithelialization at proliferative phase of wound healing. Microscopic analysis of incisional and excisional wounds showed that BioMem PVA/PL 0,2% or 1% lead a stimulus to mast cell degranulation, edema, leucocyte migration at inflammatory phase of the cicatricial process. At the proliferative phase, was evidenced an increase in the population of fibroblasts and collagenesis. Re-epithelialization of excisional wounds showed an increased thickness of the newly formed epithelium. BioMem PVA/PL 0,2% implantation increased the levels of markers and mediators of the inflammatory response, such as MPO, nitrite, IL-1β and TNF-α. Culture mouse macrophages stimulated with PL were induced to release of TNF- e IL-1β. Integrated analysis of all results suggest that PL act significantly in the inflammatory phase of healing, which seems to directly influence the subsequent phases of the healing process. / O látex da planta medicinal Calotropis procera (Apocynaceae) é um produto químico complexo, constituído de uma diversidade de moléculas e tem sido amplamente utilizado na medicina popular sobre enfermidades dermatológicas. O potencial da fração de proteínas do látex (PL) em induzir danos celulares foi avaliado pelos testes de MTT e LDH. Além disso, PL foi utilizada no preparo de uma biomembrana associada ao poli (álcool vinílico) (BioMem PVA/PL 0,2% e 1%). As propriedades físico-química das membranas controle (PVA 1%) e teste (BioMem PVA/PL 1%) foram avaliadas através da espectroscopia de absorção na região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e análise termogravimétrica (TGA). O efeito das proteínas do látex na cicatrização foi investigado após indução de feridas incisionais ou excisionais no dorso de camundongos, seguido da implantação da BioMem PVA/PL 0,2% ou 1%. O processo cicatricial foi avaliado de acordo com os parâmetros: análise macroscópica (indução da neoformação tecidual em feridas incisionais e edema, hiperemia, redução da área e reepitelização em feridas excisionais); microscópica (degranulação de mastócitos, edema, infiltrado de leucócitos, número de fibroblastos e colagênese). Marcadores e mediadores da fase inflamatória (MPO, nitrito, IL-1β e TNF-α) foram avaliados em feridas incisionais e excisionais. O efeito da BioMem PVA/PL sobre a densidade microvascular foi avaliado em feridas incisionais. O possível efeito de PL em estimular diretamente macrófagos foi investigado em uma cultura de células. PL não apresentou in vitro citotoxicidade sobre neutrófilos humanos, visto pela baixa atividade de LDH e a alta viabilidade dos neutrófilos pelo teste do MTT. A análises físico-químicas demonstraram que não ocorreram interações fortes do PVA com PL, já que não foi observada a formação de novas bandas ou o deslocamento destas. Além disso, a solubilização destes compostos tornou a BioMem PVA/PL termicamente mais estável. Nos modelos experimentais de cicatrização, as análises macroscópicas demonstraram que BioMem PVA/PL 0,2% e 1% induziram a neoformação tecidual em feridas incisionais nos dias 2, 7 e 14 após a implantação das membranas. Entretanto, não interferiu na densidade da microvascularização ao tecido neoformado. Em feridas excisionais, BioMem PVA/PL 0,2% induziu aumento do edema, mas não interferiu na hiperemia na fase inflamatória. Na fase proliferativa da cicatrização, acelerou a redução da área das feridas e favoreceu a reepitelização. A análise microscópica de feridas incisionais e excisionais evidenciou que BioMem PVA/PL 0,2% ou 1% conferiu um estímulo à degranulação de mastócitos, edema e migração de leucócitos na fase inflamatória do processo cicatricial. Na fase proliferativa foi evidenciado aumento na população de fibroblastos e colagênese. A análise da reepitelização de feridas excisionais evidenciou um aumento da espessura do epitélio neoformado. A implantação da BioMem PVA/PL 0,2% aumentou os níveis de marcadores e mediadores da resposta inflamatória, tais como MPO, nitrito, IL-1β e TNF-α. Macrófagos cultivados de camundongos e estimulados com PL foram induzidos a liberação de TNF- e IL-1β. A análise integrada de todos os resultados sugerem que as proteínas do látex (PL) atuam significativamente na fase inflamatória da cicatrização, o que parece influenciar diretamente as fases subseqüentes do processo cicatricial.

FREITAS, A. P. F. Efeito de subtrações da proteína do látex da Calotropis procera na mucosite oral induzida por 5-fluorouracil. 2016. 116 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-20T17:03:19Z No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-06-21T11:21:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-21T11:21:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_tese_apffreitas.pdf: 3403371 bytes, checksum: 6a7649e4a7b9d1373aa22ffd5a268f2e (MD5) Previous issue date: 2016-12-20 / Oral mucositis is one of the most common collateral effects in patients undergoing treatment with 5-fluorouracil (5-FU). In this context, It has been previously shown that with only two doses of the protein from the latex fraction of Calotropis procera it was possible to prevent damage caused by 5-FU in the oral mucosa. Thus, the aim of this study was investigate the effect of subfractions of the latex protein (PL) of Calotropis procera in the prevention of oral mucositis induced by 5-FU in hamsters. At first, the subfractions (PI, PII and PIII) of the PL of Calotropis procera were identified by chromatography. Hamsters received 0.9% saline, i.p., (Control) or Mechanical Trauma (TM) or 5-FU (60mg / kg and 40mg / kg, i.p., respectively, on the 1st and 2nd day of the experimental protocol). 24h and 72h after of the last dose of the chemotherapeutic, PL 5mg / kg (PL + 5-FU) or its subfractions were administered: PI 5mg / kg (PI + 5-FU); PII 5mg / kg (PII + 5-FU); PIII 5mg / kg (PIII + 5-FU) and PII IAA 5mg / kg (PII IAA + 5-FU). On the 4th day, all experimental groups, except the control, were submitted to TM. The animals were observed daily until the tenth day of the experimental protocol to evaluate survival and weight loss. Then, the animals were anesthetized and their jugal mucosas were exposed for the mascroscopic analysis. Hamsters were euthanized and their jugal mucosa were collected to evaluate the following parameters: histopathological analysis, neutrophil recruitment (myeloperoxidase dosage, MPO), oxidative stress (GSH and MDA levels), inflammation (levels of TNFα and IL- ELISA, including protein expression of IL-1β, ICAM-1 and Iba-1 by immunohistochemistry) and integrity of collagen fibers (PicroSirius Red staining). From the PL fraction of Calotropis procera, the subfractions PI, PII and PIII were identified and showed to be quite distinct. In addition, PII and PIII showed intense proteolytic activity. The proteolytic activity of PII was inhibited with iodoacetamide, leading to PII IAA. 5-FU reduced survival, caused intense weight loss, caused extensive ulcer formation, development of abscesses, marked erythema, haemorrhage and edema. In addition, it also promoted formation of ulcers, characterized by loss of integrity of the jugal epithelium and intense infiltration of inflammatory cells. In addition, 5-FU increased the levels of MPO, MDA, IL-1β and TNF-α, including the expression of ICAM-1 and Iba-1, as well as decreased GSH levels and reduced collagen fibers in the oral mucosa compared to the control group. Whereas only PL or IAA PII were able to prevent these 5-FU promoted alterations. It is concluded that PII with its proteolytic activity inhibited by IAA is the subfraction responsible for the previously observed beneficial effects of PL on oral mucositis induced by 5-FU. Therefore, PII IAA attenuates 5-FU induced oral mucositis by reducing oxidative stress, inflammation (by decreasing the expression of adhesion molecules, neutrophil recruitment and macrophage activation with consequent decrease of IL-1β and TNF- Α). Thus, it prevents degradation of collagen fibers, including weight loss and increased survival in animals submitted to experimental oral mucositis. / A mucosite oral é um dos efeitos colaterais mais comuns em pacientes submetidos ao tratamento com 5-fluorouracil (5-FU). Nesse contexto, foi demonstrado que a fração Proteica do Látex (PL) da Calotropis procera, com apenas duas doses, preveniu os danos causados pelo 5-FU na mucosa oral. Devido a isso, o objetivo deste estudo foi investigar o efeito de subfrações da proteína do látex (PL) da Calotropis procera na prevenção da mucosite oral induzida por 5-FU em hamsters. As subfrações (PI, PII e PIII) da PL da Calostropis Procera foram obtidas por cromatografia. Hamsters receberam salina 0,9%, i.p., (Controle ou Trauma Mecânico, TM) ou 5-FU (60mg/kg e 40mg/kg, i.p., respectivamente) no 1º e 2º dia do protocolo experimental. Após 24h e 72h da última dose do quimioterápico, administrou-se PL 5mg/kg (PL+5-FU) ou suas subfrações: PI 5mg/kg (PI+ 5-FU); PII 5mg/kg (PII + 5-FU); PIII 5mg/kg (PIII +5-FU) e PII IAA 5mg/kg (PII IAA+ 5-FU). No 4º dia, todos os grupos, exceto o grupo controle, foram submetidos ao TM. Os animais foram observados diariamente até o 10º dia do protocolo experimental para avaliar a sobrevida e a perda ponderal. Após a última análise, os animais foram anestesiados e suas mucosas jugais foram expostas para a análise macroscópica e em seguida, foram eutanasiados e suas mucosas jugais foram coletadas para avaliar os seguintes parâmetros: análise histopatológica, recrutamento de neutrófilos (dosagem de mieloperoxidase, MPO), estresse oxidativo (níveis de GSH e MDA), inflamação (níveis de TNFα e IL-1β por ELISA, incluindo expressão proteica de IL-1β, ICAM-1 e Iba-1 por imunohistoquímica) e integridade das fibras colágenas (coloração de PicroSirius Red). A partir da fração PL da Calotropis procera, foram identificadas 3 subfrações PI, PII e PIII bem distintas. Foi realizado um Zimograma e as frações PII e PIII demonstraram intensa atividade proteolítica. Devido a porcentagem de sobrevida, a atividade proteolítica de PII foi inibida com iodoacetamida, originando PII IAA. 5-FU reduziu a sobrevida, causou intensa perda ponderal, ocasionou formação de úlceras extensas, desenvolvimento de abscessos, de eritema acentuado, de hemorragia e de edema. Além disso, também promoveu formação de úlceras, caracterizado pela perda da integridade do epitélio da mucosa jugal e intenso infiltrado de células inflamatórias. Adicionalmente, 5-FU aumentou os níveis de MPO, MDA, IL-1β e TNF-α, incluindo a expressão de ICAM-1 e Iba-1, bem como, diminuiu os níveis de GSH e reduziu as fibras colágenas nas mucosas jugais comparado ao grupo controle. Por outro lado, apenas PL ou PII IAA foram capazes de prevenir essas alterações promovidas por 5-FU. Conclui-se que PII com sua atividade proteolítica inibida pelo IAA é a subfração responsável pelos efeitos benéficos observados anteriormente da PL na mucosite oral induzida por 5-FU. Adicionalmente, PII IAA atenua a mucosite oral induzida por 5-FU por reduzir o estresse oxidativo, a inflamação (por diminuir a expressão de moléculas de adesão, o recrutamento de neutrófilos e a ativação de macrófagos com consequente diminuição de IL-1β e TNF-α). Além disso, a subfração PII IAA possui efeito antioxidante e anti-inflamatório, previne a degradação das fibras colágenas, incluindo a perda de peso, e aumento da sobrevida em animais submetidos à mucosite oral experimental.

LUZ, Patrícia Bastos. Fração proteica isolada do látex de Calotropis procera (AIT.) R.Br reduz hipernocicepção inflamatória mecânica em camundongos : mecanismos e mediadores envolvidos. 2012. 87 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-25T13:55:10Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_pbluz.pdf: 803076 bytes, checksum: 095ce0bb59da741a7baabdc3b28fc2ea (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-08-06T11:54:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_pbluz.pdf: 803076 bytes, checksum: 095ce0bb59da741a7baabdc3b28fc2ea (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-06T11:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_pbluz.pdf: 803076 bytes, checksum: 095ce0bb59da741a7baabdc3b28fc2ea (MD5) Previous issue date: 2012 / Calotropis procera é uma planta laticífera encontrada na Ásia, África e América do Sul. Este vegetal tem sido bastante utilizado na medicina tradicional para diversas patologias. Seu látex é rico em proteínas que apresentam relevantes atividades farmacológicas. O objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade das proteínas do látex de Calotropis procera (LP) em modelos de dor aguda induzida por carragenina (Cg), por prostaglandina E2 (PGE2), epinefrina e dor persistente induzida por adjuvante completo de Freud (CFA) pelo método Von Frey eletrônico. Foram utilizados camundongos Swiss (n=5-8, 25-30g). Na hipernocicepção mecânica (HM), os animais foram pré-tratados com LP (0,5; 5 e 50 mg/Kg e.v.), 30 min antes da aplicação de Cg (300μg/pata) e avaliados 1, 3 e 5h após Cg. Após 3 h da injeção de Cg, tecido subplantar foi coletado para quantificação do envolvimento de neutrófilos (MPO), citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1β), PGE2 e KC. Na HM induzida por PGE2 (100ng/pata), os animais receberam LP (5 e 50 mg/Kg e.v.) e avaliados 3h após PGE2. Para avaliar a participação de NO e canais de K+ATP os animais foram pré-tratados com L-NAME (30 mg/kg i.p.) ou Glibenclamida (5 mg/kg i.p.). Na HM induzida por epinefrina (100ng/pata) os animais receberam LP (5 mg/Kg e.v.) e avaliados 2h após a injeção de epinefrina. Em modelo de dor persistente induzida por CFA foram avaliados HM e edema de pata durante 7 dias. Animais foram tratados com salina (controle, e.v.); LP (5mg/kg, e.v.), dexametasona (2mg/kg, s.c.) diariamente e, enquanto que o CFA (20 μL/pata, i.pl) foi injetado apenas no primeiro dia. No 8º dia a atividade motora dos animais foi avaliada através do teste rota rod (4RPM/min) e após este procedimento o tecido subplantar foi coletado para quantificação de MPO. LP (5 mg/kg) reduziu (p<0,05) a HM em 25%, 55% e 46% e LP 50 mg/kg em 39%, 64% e 60% na 1ª, 3ª e 5ª hora, respectivamente, quando comparadas ao grupo Cg. As doses 5 e 50mg/kg de LP diminuíram a concentração de MPO em 80% e 94%, respectivamente, quando comparadas ao grupo Cg. A dose 5mg/kg de LP reduziu a concentração de TNF-α, IL-1β, PGE2 e KC em 71%, 81%, 72% e 72% respectivamente, quando comparada ao grupo Cg. Em modelo de HM induzida por PGE2, as doses de 5 e 50mg/kg de LP reduziram (p<0,05) a HM em 40% e 42%, respectivamente, quando comparadas ao grupo PGE2. Este efeito antinociceptivo do LP foi revertido com L-NAME (inibidor inespecífico da NO sintase) e glibenclamida (bloqueador dos canais de K+ATP). A HM induzida por epinefrina foi reduzida pela LP. Na dor persistente, LP também reduziu HM e edema de pata em 42% e 59%, respectivamente, quando comparado ao grupo CFA. Nenhum grupo apresentou comprometimento do sistema motor. LP reduziu (p<0,05) MPO em 45% comparado ao grupo CFA. A partir destes dados podemos sugerir que o efeito antinociceptivo do LP estar intimamente relacionado com a diminuição de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1β), PGE2, KC e da migração de neutrófilos, além do envolvimento de NO, canais de K+ATP sensíveis a glibenclamida.

FREITAS, Ana Paula Fragoso de. Fração protéica do látex da Calotropis procera protege contra a mucosite oral induzida por 5-Fluorouracil em hamsters através da inibição de mediadores pró-inflamatórios. 2011. 10 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-12-06T12:33:20Z No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2013-12-06T12:36:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-06T12:36:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_dis_apffreitas.pdf: 879655 bytes, checksum: 599c6f7fffbb9297d2c7f3d5d7bc62df (MD5) Previous issue date: 2011 / Mucosite oral (MO) induzida por drogas antineoplásicas é um importante fator limitante da dose e efeitos colaterais da terapia do câncer. Calotropis procera é uma planta que produz látex constitutivamente abundante que é relatado possuir propriedades antiinflamatórias, bactericidas, inseticidas, analgésicas. O presente trabalho teve como objetivo descrever o efeito das proteínas do látex da Calotropis procera (LP) na expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α e IL-1) e enzimas induzíveis, como, ciclooxigenase-2 (COX-2) e óxido nítrico sintase induzível (NOSi) no modelo de MO em hamsters. A mucosite oral foi induzida por duas administrações intraperitoneal (i.p) de 5-fluorouracil (5-FU) no 1 º e 2º dias nas doses de 60 e 40 mg/kg, respectivamente nos animais (n = 5). As LP (0,25; 1; 5 E 25 mg/kg) foi injetado via i.p. 24h antes e 24h após o trauma mecânico da mucosa jugal. O grupo controle recebeu apenas solução salina. No 10º dia, os animais foram sacrificados e os tecidos da mucosa jugal foram colhidos. Foram realizadas no tecido mucosa jugal as análises macroscópicas e histopatológicas (infiltração de células inflamatórias, edema, hemorragia e à formação de ulcerações e abscessos), bem como a imunohistoquímica para TNF-α, IL-1β, NOSi e COX-2. Foram utilizados Kruskal Wallis / Dunn como testes estatísticos, onde P <0,05 foi aceito. O estudo foi submetido ao Comitê de Ética sob o protocolo 036/10. Observou-se que a LP inibiu significativamente parâmetros macroscópicos e histopatológicos, quando comparado ao grupo controle, com efeito máximo nos escores macroscópicos atingindo 75% e 66% do efeito máximo na avaliação histopatológica. A atividade de Mieloperoxidase (MPO) também foi significativamente inibida por LP em 91% com a mesma dose (p <0,001) quando comparado ao grupo controle e também inibiu a perda de peso em animais submetidos a mucosite oral e tratados com LP. A mucosa jugal dos animais submetidos a MO mostrou imunomarcação para TNF-α, IL-1β, NOSi e COX-2 na conjuntiva inflamada (Cj) e tecido epitelial (Ep) em comparação com o tecido jugal do grupo normal. LP causou redução considerável na imunomarcação para TNF-α (62%, Cj, 70%, Ep), IL-1β (87%, Cj, 80%, Ep), NOSi (82% Cj; Ep 52%) e COX -2 (70%, Cj, 100%, Ep) no tecido jugal quando comparado com o grupo de animais submetidos à mucosite experimental que receberam salina, em vez de LP. Esses achados demonstram efeitos anti-inflamatórios de LP em MO induzida por 5-FU. O efeito protetor poderia ser suportado pela redução da expressão das citocinas pró-inflamatórias, como TNF-α e IL-1β e na expressão de enzimas COX-2 e NOSi. O mecanismo de proteção parece envolver a expressão inibitória da NOSi, COX-2, TNF-α e IL-1β. / Oral mucositis (OM) induced by antineoplasic drugs is an important, dose-limiting, and costly side effect of cancer therapy. Calotropis procera is a plant plant constitutively produces abundant latex that is reported to possess anti-inflammatory, bacteriolytic, insecticidal, analgesic properties. The present work aimed to describe the effect of laticifer proteins of Calotropis procera (LP) in the expression of pro-inflammatory cytokines and inducible enzymes, such as, cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) in the model of OM in Hamsters. OM was induced by two intraperitoneal (i.p.) administrations of 5-Fluorouracil (5-FU) on the 1st and 2nd days (60 and 40 mg/kg, respectively) in hamsters (n=5). LP (0,25; 1; 5 E 25 mg / kg) was injected i.p. 24h before and 24h after mechanical trauma of the cheek pouches. Control group received only saline. On the 10th day, the animals were sacrificed and tissues from the cheek pouches were harvested. Macroscopical and histopathological (inflammatory cell infiltration, edema, hemorrhage and the formation of ulcerations and abscess) analysis as well as immunohistochemistry for TNF-, IL-1β, iNOS and COX-2 was performed in the cheek pouch tissue. Kruskal Wallis/Dunn was used as statistical tests. P<0.05 was accepted. Ethics Committee 036/10. The LP significantly inhibited macroscopical and histopathological parameters when compared to control group with maximum effect in macroscopic scores reaching 75% and 66% of maximum effect at the histopathological evaluation. The MPO activity was also significantly inhibited by LP in 91% at the same dose (p<0,001) and also inhibited the lost weight of 5- FU induced-oral mucositis. The cheek pouches of hamsters submitted to OM showed marked immunostaining for TNF-, IL-1β, iNOS and COX-2 on inflamed conjunctive (Cj) and epithelial (Ep) tissue compared with the cheek pouches of the normal control group. LP caused considerable reduction in the immunostaining for TNF- (62%,Cj; 70%,Ep), IL-1β (87%,Cj; 80%,Ep), iNOS (82%Cj; 52%Ep) and COX-2 (70%,Cj; 100%,Ep) in the check pouches tissue when compared with the group of animals subjected to experimental mucositis that received saline instead of LP. These findings show anti-inflammatory effects of LP in 5-FU-induced OM. The protective effect could be supported by the reduction of the expression of pro-inflammatory cytokines, such as TNF- and IL-1β and the enzymes iNOS and COX-2. The protective mechanism appears to involve inhibition of the expression of iNOS, COX-2, TNF-, and IL- 1β.

RABELO, Alana Fonteles Lima. Caracterização in vivo e in vitro da resposta inflamatória aguda induzida por uma fração proteica isolada do látex de Calotropis procera (Ait.) R. Br. 2014. 117 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-12-15T11:46:29Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_aflrabelo.pdf: 1019084 bytes, checksum: 67992b254190eddc21a2c38443f21e3a (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-12-15T11:46:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_aflrabelo.pdf: 1019084 bytes, checksum: 67992b254190eddc21a2c38443f21e3a (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-15T11:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_aflrabelo.pdf: 1019084 bytes, checksum: 67992b254190eddc21a2c38443f21e3a (MD5) Previous issue date: 2014 / Calotropis procera is a laticiferous plant belonging to the family Apocynaceae, found in Asia, Africa and South America. Its latex is comprised of a large number of bioactive molecules that show significant pharmacological properties including anti- and pro- inflammatory, antitumor, healing, antimicrobial, among others. The proteins extracted from this latex have multiple immunomodulatory effects, depending on the route of administration utilized. The objective of this study was to characterize the pro- inflammatory response of protein fraction PL latex Calotropis procera in models of peritonitis and subcutaneous air pouch; neutrophil chemotaxis (in vivo and in vitro); the role of resident cells and mediators involved. Swiss mice were used (25-30 g). It was found that PL induced neutrophil migration (MN) in a dose- and time - dependent in models of peritonitis and subcutaneous air pouch. An increase in vascular permeability induced by the administration of PL (1 mg / cav) in the peritoneal cavity in the Evans blue model was demonstrated. The increase in the population of resident macrophages after pre-treatment with thioglycolate intensified the MN induced by PL, with the similar result observed with the mast cell -depleted group by compound 48/80. Mast cells appear to exert an inhibitory modulatory role on neutrophil chemotaxis, whereas macrophages potentiate the MN, possibly through the release of mediators. For investigation of involved mediators, blocking drugs were used before administration of the PL. Pharmacological modulation Dexamethasone (0.5 mg/kg , s.c.), Pentoxifylline (100 mg/kg , s.c.), Thalidomide (50 mg/kg , s.c.), Indomethacin (3 mg/kg , s.c.) and Celecoxib (30 mg/kg , s.c.), but not with Meclizine (40 mg/kg , s.c.) and PCA (10 mg/kg, s.c.) inhibited the MN induced by PL. It was verified by ELISA, that levels of mediators IL-1 and IL-6 were elevated in the peritoneal fluid 4 hours after administration of PL (1 mg/cav, i.p.). The nitrite levels were also higher in the subcutaneous air pouch fluid, demonstrating the involvement of nitric oxide (NO) in the pro-inflammatory effects of LP. PL induced rolling and adhesion of leukocytes to the vascular endothelium of mesenteric mice and neutrophil chemotaxis in vitro. Furthermore, it can directly interact with neutrophils by inducing the synthesis of pro-inflammatory mediators TNF-α, IL- 1β, PGE2 and NO in neutrophil’s culture. In conclusion, PL induces an acute inflammatory response characterized by intense neutrophil migration and increase of vascular permeability. Promotes neutrophil chemotaxis indirectly, via resident macrophages and directly interacting with neutrophils, inducing rolling and adhesion to the endothelium and release of pro-inflammatory mediators. / Calotropis procera é uma planta laticífera pertencente à família Apocynaceae, encontrada na Ásia, África e América do Sul. Seu látex é constituído por um grande número de moléculas bioativas que apresentam relevantes propriedades farmacológicas que inclui anti- e pró-inflamatória, antitumoral, cicatrizante, antimicrobiana, entre outras. As proteínas extraídas deste látex possuem múltiplos efeitos imunomodulatórios, dependendo da via de administração utilizada. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a resposta pró-inflamatória da fração proteica (PL) do látex de Calotropis procera nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutânea; investigando a quimiotaxia de neutrófilos (in vivo e in vitro); o papel das células residentes e os mediadores envolvidos. Foram utilizados camundongos Swiss (25-30 g). Verificou-se que PL induziu migração de neutrófilos (MN) de forma dose-e-tempo dependente nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutânea. Foi demonstrado um aumento na permeabilidade vascular induzido pela administração da PL (1 mg/cav) na cavidade peritoneal no modelo de Azul de Evans. O aumento na população de macrófagos residentes pelo pré-tratamento com tioglicolato, intensificou a MN induzida por PL, sendo observado um resultado semelhante com o grupo depletado de mastócitos pelo composto 48/80. Os mastócitos parecem exercer um papel modulador inibitório sobre a quimiotaxia de neutrófilos, enquanto os macrófagos potencializam a MN, possivelmente por meio da liberação de mediadores. Para investigação dos mediadores envolvidos foram utilizados fármacos bloqueadores específicos antes da administração da PL. A modulação farmacológica com Dexametasona (0,5 mg/kg, s.c.), Pentoxifilina (100 mg/kg, s.c.), Talidomida (50 mg/kg, s.c.), Indometacina (3 mg/kg, s.c.) e Celecoxib (30 mg/kg, s.c.), mas não com Meclizina (40 mg/kg, s.c.) e PCA (10 mg/kg; s.c.), inibiram a MN induzida por PL. Foi verificado por ELISA que os níveis dos mediadores IL-1 e IL-6 estavam aumentados no fluido peritoneal 4 h após a administração de PL (1 mg/cav, i.p.). Os níveis de nitrito também estavam aumentados no fluido da bolsa de ar subcutânea, demonstrando um envolvimento do óxido nítrico (NO) no efeito pró-inflamatório da PL. A PL induziu rolamento e adesão de leucócitos ao endotélio vascular do mesentério de camundongos, bem como quimiotaxia de neutrófilos in vitro. Além disso, foi capaz de interagir diretamente com neutrófilos, induzindo a síntese dos mediadores pró-inflamatórios TNF-α, IL-1β, PGE2 e NO em cultura de neutrófilos. Em conclusão, PL induz uma resposta inflamatória aguda, caracterizada pela intensa migração de neutrófilos e aumento da permeabilidade vascular. Promove quimiotaxia para neutrófilos de forma indireta, via macrófagos residentes, e de forma direta, interagindo com neutrófilos, induzindo rolamento e adesão no endotélio e liberação de mediadores pró-inflamatórios.

MOURA, E. S Potencial antitumoral da Calotroipis procera Ait. in vivo E in vitro. 2005 79 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2005. / Submitted by Luciene Oliveira (luciene@ufc.br) on 2017-08-07T18:46:50Z No. of bitstreams: 1 2006_dis_esm.pdf: 2710827 bytes, checksum: 4a1b81d833be1b9594cdef154b6d45aa (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-08T13:21:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_dis_esm.pdf: 2710827 bytes, checksum: 4a1b81d833be1b9594cdef154b6d45aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T13:21:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_dis_esm.pdf: 2710827 bytes, checksum: 4a1b81d833be1b9594cdef154b6d45aa (MD5) Previous issue date: 2005-12-20 / This study initially evaluated the cytotoxicity of hydroalcoholic extracts from the aerial sections of Calatropis procera Ait f., with hexane fractions, dichloromethane and Nbutanol, tested in five lineages of tumor cells (HL-60, CEM, MCF-7, HCT-8 and B-16) via the MTT method and the antimitotic action in sea urchin eggs with positive control of doxirrubicina. The action of the ethanolic extract on the stalk was also studied with the fractions, hexane, dichlomethane, ethyl acetate, acetone and methanol, using the MTT method in four lineages of cells (HL-60, CEM, HCT-8 and B-16). The antimitotic action was evaluated with sea urchin eggs using three extracts, ethyl acetate, acetate and methanol with positive control of doxirrubicana. The hemolytic test was carried out with five fractions, using mice red blood cells. The in vivo evaluation was performed with hexane fractions, dichloromethane, ethyl acetate, acetone and methanol, by intraperitoneal means in the 180 sarcoma and the methanol fraction was used via oral means on Ehrlic’s tumor. Hydroalcoholic and ethanolic fractions showed cytotoxic activity. The hexane fraction presented less activity than 1.8 μg/mL. N-butanol had a result lower than 1.0 μg/mL, except for the B-16 lineage, which did not present any action. In the ethanolic extract the ethyl acetate presented action lower than 2.5 μg/mL and acetone lower than 4.4 μg/mL and methanol lower 10.5 and did not present any action in the B-16 lineage. Inhibition of embryonic development in sea urchin eggs in the hydroalcoholic extract in the first division of dichloromethane presented the best action, with 42.80 μg/mL, in the third division and blastula N-butanol 23.40 and 24.0 μg/mL respectively. The ethanolic extract presented an important antimitotic action, showing inhibition in all phases of embryonic development with action lower than 4.8 μg/mL, and the ethyl acetate was the most active in all phases of division. In the hemolytic test the ethyl acetate fractions 80.51 μg/mL, acetone 133.4 μg/mL and methanol 132.1 μg/mL presented action in erythrocytic membrane. In the in vivo study of the 180 sarcoma tumoral inhibition was evaluated with the positive and negative control group, weighing and histological study of the organs: liver, spleen and kidney and tumor. The organic fraction ethyl acetate presented inhibition in tumoral growth by 64.3%. As for the methanolic fraction 500 mg/kg (orally) presented inhibition by 43.18%. / Este trabalho avaliou inicialmente a citotoxicidade dos extratos hidroalcoólico de partes aéreas da Calotropis procera Ait.f., com as frações hexano, diclorometano e N-butanol, testadas em cinco linhagens de células tumorais (HL-60, CEM, MCF-7, HCT-8 e B-16) através do método MTT e a ação antimitótica em ovos do ouriço do mar com controle positivo da doxirrubicina. Também foi estudada a ação do extrato etanólico do caule com as frações: hexano, diclometano, acetato de etila, acetona e metanol, usando o método MTT em quatro linhagens de células (HL-60, CEM, HCT-8 e B-16). A ação antimitótica foi avaliada com ovos do ouriço do mar usando três extratos: acetato de etila, acetato e metanol com controle positivo da doxorrubicina.O teste hemolítico foi realizado com as cinco frações, usando hemácias de camundongo. A avaliação in vivo foi feita com as frações hexano, diclorometano, acetato de etila, acetona e metanol, por via intra-peritonial no sarcoma 180 e a fração metanol foi usada por via oral no tumor de Ehrlich. As frações do extrato hidroálcólico e etanólico demonstraram atividade citotóxica. A fração hexano apresentou atividade menor que 1,8 μg/mL. O N-butanol teve resultado menor que 1,0 μg/mL, exceto para linhagem B-16, que não apresentou ação. No extrato etanólico o acetato de etila apresentou a ação menor que 2,5 μg/mL e a acetona menor que 4,4 μg/mL e o metanol menor que 10,5 e não apresentou ação na linhagem B-16. A inibição do desenvolvimento embrionário em ovos do ouriço do mar no extrato hidroalcoólico na 1ª divisão o diclorometano apresentou a melhor ação, com 42,80 μg/mL, na 3ª divisão e blástula o N-butanol 23,40 e 24,0 μg/mL respectivamente. O extrato etanólico apresentou importante ação antimitótica, mostrando inibição em todas as fases do desenvolvimento embrionário com ação menor que 4,8 μg/mL, e o acetato de etila foi o extrato mais ativo em todas as fases da divisão. No teste hemolítico as frações acetato de etila 80,51 μg/mL, acetona 133,4 μg/mL e o metanol 132,1 μg/mL apresentaram ação na membrana dos eritrócitos. No estudo in vivo do sarcoma 180 foi avaliado a inibição tumoral com grupo controle positivo e negativo, pesagem e estudo histológico dos órgãos: fígado, baço e rim e tumor. A fração orgânica acetato de etila apresentou inibição do crescimento tumoral de 64,3%. Em quanto à fração metanólica 500 mg/kg (via oral) apresentou inibição de 43,18%.

PEREIRA, D. A. Aspectos bioquímicos da herbivoria de Danaus plexippus (L.) em folhas de Calotropis procera (Ait.) R. Br. 2010. 82 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2010. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-25T17:37:00Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_dapereira.pdf: 3103515 bytes, checksum: 058f87cb1a6e5a889c29b2143f22ca2c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-15T18:14:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_dapereira.pdf: 3103515 bytes, checksum: 058f87cb1a6e5a889c29b2143f22ca2c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-15T18:14:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_dapereira.pdf: 3103515 bytes, checksum: 058f87cb1a6e5a889c29b2143f22ca2c (MD5) Previous issue date: 2010 / Evidence has been accumulated supporting the role of latex in protecting plants against different aggressors; however it is known that milkweeds are heavily attacked by monarch butterfly, including Calotropis procera. The present study describes the proteolytic activity related to the herbivory of 5th instars of the monarch butterfly, Dannaus plexippus L. (Lepidoptera: Danaidae) fed on diets containing latex proteins, and the proteolytic activity of larvae gut extract on latex proteins. Gut extracts of monarch digested azocasein, BANA and BApNA. The proteolytic activity on azocasein was inhibited by cysteine protease inhibitors such as E-64 and iodoacetamide but it was stronger inhibited by PMSF and leupeptin, serine proteases inhibitors. Gut extracts of monarch digested latex proteins promptly. However, gut extracts did not digest latex proteins from Cryptostegia grandiflora and only barely digested laticifer proteins from Plumeria rubra, two species free of monarch herbivory. Larvae fed on artificial diets containing latex proteins were not affected and growth rate was slightly better compared to control. The protein profile of latex proteins extracted of healthy and attacked plants exhibited visible differences with increasing detection of a protein identified as glycoside hydrolase in latex of attacked plants. The proteolytic, chitinolytc, inhibition protease and anti-oxidative activities not were altered in attacked or injured plants. Results present here give interesting information on resistance of monarch fed on Calotropis procera and suggest that the ability of monarch proteolytic enzymes to promptly digest latex proteins can at least in part explain how the insect overcomes defensive proteins of latex. / Evidências foram acumuladas sustentando o papel de látex em proteger as plantas contra diferentes agressores, porém é sabido que plantas laticíferas são fortemente atacados pela lagarta monarca, incluindo Calotropis procera. O presente estudo descreve a atividade proteolítica relacionada com a herbivoria do quinto estágio da monarca, Dannaus plexippus L. (Lepidoptera: Danaidae). Extratos intestinais da monarca digeriram azocaseína, BANA e BApNA. A atividade proteolítica sobre azocaseína foi inibida pro E-64 e IAA, mas foi fortemente inibida por PMSF e Leupeptina inibidores de proteases serínicas. Extrato intestinal digeriu rapidamente as proteínas do látex C. procera. No entanto, não digeriu proteínas do látex de Cryptostegia grandiflora e apenas uma banda protéica do látex de Plumeria rubra foi digerida, duas espécies livres de herbivoria monarca. Larvas alimentadas com dieta artificial contendo proteínas do látex de C. procera não foram afetadas e a taxa de crescimento foi ligeiramente melhor em relação ao controle. Os perfis protéicos dos fluidos laticíferos extraídos de plantas saudáveis e atacadas apresentaram diferenças visíveis, com o aumento da detecção de uma proteína identificada como glicosídeo hidrolase. Danos mecânicos nas plantas não foram suficientes para causar esta resposta. As atividades proteolítica, quitinolítica, de inibição de protease e de enzimas antioxidantes não foram alteradas em plantas atacadas pela monarca ou submetidas a danos mecânicos. Resultados obtidos neste trabalho fornecem informações interessantes sobre a resistência de monarca alimentadas com Calotropis procera e sugerem que a capacidade enzimas proteolíticas da monarca de prontamente digerir proteínas do látex pode, pelo menos em parte, explicar como os insetos superam as proteínas de defesa do látex.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O lÃtex da planta medicinal Calotropis procera (Apocynaceae) à um produto quÃmico complexo, constituÃdo de uma diversidade de molÃculas e tem sido amplamente utilizado na medicina popular sobre enfermidades dermatolÃgicas. O potencial da fraÃÃo de proteÃnas do lÃtex (PL) em induzir danos celulares foi avaliado pelos testes de MTT e LDH. AlÃm disso, PL foi utilizada no preparo de uma biomembrana associada ao poli (Ãlcool vinÃlico) (BioMem PVA/PL 0,2% e 1%). As propriedades fÃsico-quÃmica das membranas controle (PVA 1%) e teste (BioMem PVA/PL 1%) foram avaliadas atravÃs da espectroscopia de absorÃÃo na regiÃo do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e anÃlise termogravimÃtrica (TGA). O efeito das proteÃnas do lÃtex na cicatrizaÃÃo foi investigado apÃs induÃÃo de feridas incisionais ou excisionais no dorso de camundongos, seguido da implantaÃÃo da BioMem PVA/PL 0,2% ou 1%. O processo cicatricial foi avaliado de acordo com os parÃmetros: anÃlise macroscÃpica (induÃÃo da neoformaÃÃo tecidual em feridas incisionais e edema, hiperemia, reduÃÃo da Ãrea e reepitelizaÃÃo em feridas excisionais); microscÃpica (degranulaÃÃo de mastÃcitos, edema, infiltrado de leucÃcitos, nÃmero de fibroblastos e colagÃnese). Marcadores e mediadores da fase inflamatÃria (MPO, nitrito, IL-1&#946; e TNF-&#945;) foram avaliados em feridas incisionais e excisionais. O efeito da BioMem PVA/PL sobre a densidade microvascular foi avaliado em feridas incisionais. O possÃvel efeito de PL em estimular diretamente macrÃfagos foi investigado em uma cultura de cÃlulas. PL nÃo apresentou in vitro citotoxicidade sobre neutrÃfilos humanos, visto pela baixa atividade de LDH e a alta viabilidade dos neutrÃfilos pelo teste do MTT. A anÃlises fÃsico-quÃmicas demonstraram que nÃo ocorreram interaÃÃes fortes do PVA com PL, jà que nÃo foi observada a formaÃÃo de novas bandas ou o deslocamento destas. AlÃm disso, a solubilizaÃÃo destes compostos tornou a BioMem PVA/PL termicamente mais estÃvel. Nos modelos experimentais de cicatrizaÃÃo, as anÃlises macroscÃpicas demonstraram que BioMem PVA/PL 0,2% e 1% induziram a neoformaÃÃo tecidual em feridas incisionais nos dias 2, 7 e 14 apÃs a implantaÃÃo das membranas. Entretanto, nÃo interferiu na densidade da microvascularizaÃÃo ao tecido neoformado. Em feridas excisionais, BioMem PVA/PL 0,2% induziu aumento do edema, mas nÃo interferiu na hiperemia na fase inflamatÃria. Na fase proliferativa da cicatrizaÃÃo, acelerou a reduÃÃo da Ãrea das feridas e favoreceu a reepitelizaÃÃo. A anÃlise microscÃpica de feridas incisionais e excisionais evidenciou que BioMem PVA/PL 0,2% ou 1% conferiu um estÃmulo à degranulaÃÃo de mastÃcitos, edema e migraÃÃo de leucÃcitos na fase inflamatÃria do processo cicatricial. Na fase proliferativa foi evidenciado aumento na populaÃÃo de fibroblastos e colagÃnese. A anÃlise da reepitelizaÃÃo de feridas excisionais evidenciou um aumento da espessura do epitÃlio neoformado. A implantaÃÃo da BioMem PVA/PL 0,2% aumentou os nÃveis de marcadores e mediadores da resposta inflamatÃria, tais como MPO, nitrito, IL-1&#946; e TNF-&#945;. MacrÃfagos cultivados de camundongos e estimulados com PL foram induzidos a liberaÃÃo de TNF-&#61537; e IL-1&#946;. A anÃlise integrada de todos os resultados sugerem que as proteÃnas do lÃtex (PL) atuam significativamente na fase inflamatÃria da cicatrizaÃÃo, o que parece influenciar diretamente as fases subseqÃentes do processo cicatricial. / The latex of the medicinal plant Calotropis procera (Apocynaceae) is a complex chemical, consisting of a variety of molecules and has been widely used in folk medicine on skin diseases. The potential of the latex proteins fraction (LP) in induce cell damage was assessed by MTT and LDH tests. Moreover, LP was used to prepare a biomembrana associated with poly (vinyl alcohol) (BioMem PVA/PL 0,2% and 1%).The physical-chemical properties of control (PVA 1%) and test (BioMem PVA/PL 1%) were assessed by infrared spectroscopy (FTIR) and thermogravimetric (TGA) analysis. The effect of laticifers proteins at healing was investigated after induction of incision or excision wounds on the back of mices, followed by implantation of BioMem PVA/PL 0,2% or 1%. Healing process was evaluated by the parameters: macroscopic analyses (induction of tissue neoformation of incisional wounds and edema, hyperemia, area reduction and re-epithelialization of excision wounds); microscopic (mast cell degranulation, edema, leucocyte infiltrate, number of fibroblasts and collagenesis). Inflammatory markers and mediators (MPO, nitrite, IL-1&#946; e TNF-&#945;) were evaluated in incision and excision wounds. Microvessel density was evaluated in incision wounds. The possible effect of soluble protein fraction (LP) to directly stimulate macrophages was investigated in a cell culture. PL shows no cytotoxicity in vitro in human neutrophils, since the low activity of LDH and high vibility of neutrophils by MTT test. The physico-chemical analysis showed that no strong interaction with PVA and LP occurred, since was not observed the formation of new bands or the displacement of these. Futhermore, the solubility of these compounds became the BioMem PVA/PL more thermally stable. At experimental healing models, macroscopic analyses showed that BioMem PVA/PL 0,2% e 1% leads tissue neoformation in incisional wounds at the 2, 7 and 14 days after membrane implantation. However, no effect on the microvascular density to neoformed tisse of incisional wounds were seen. At excisional wounds, BioMem PVA/PL 0,2% induce increase of edema, but not hyperemia at inflammatory phase. Moreover, accelerated the reduction in the wound area and an improved re-epithelialization at proliferative phase of wound healing. Microscopic analysis of incisional and excisional wounds showed that BioMem PVA/PL 0,2% or 1% lead a stimulus to mast cell degranulation, edema, leucocyte migration at inflammatory phase of the cicatricial process. At the proliferative phase, was evidenced an increase in the population of fibroblasts and collagenesis. Re-epithelialization of excisional wounds showed an increased thickness of the newly formed epithelium. BioMem PVA/PL 0,2% implantation increased the levels of markers and mediators of the inflammatory response, such as MPO, nitrite, IL-1&#946; and TNF-&#945;. Culture mouse macrophages stimulated with PL were induced to release of TNF-&#61537; e IL-1&#946;. Integrated analysis of all results suggest that PL act significantly in the inflammatory phase of healing, which seems to directly influence the subsequent phases of the healing process.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Calotropis procera à uma planta laticÃfera pertencente à famÃlia Apocynaceae, encontrada na Ãsia, Ãfrica e AmÃrica do Sul. Seu lÃtex à constituÃdo por um grande nÃmero de molÃculas bioativas que apresentam relevantes propriedades farmacolÃgicas que inclui anti- e prÃ-inflamatÃria, antitumoral, cicatrizante, antimicrobiana, entre outras. As proteÃnas extraÃdas deste lÃtex possuem mÃltiplos efeitos imunomodulatÃrios, dependendo da via de administraÃÃo utilizada. Assim, o objetivo deste trabalho foi caracterizar a resposta prÃ-inflamatÃria da fraÃÃo proteica (PL) do lÃtex de Calotropis procera nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutÃnea; investigando a quimiotaxia de neutrÃfilos (in vivo e in vitro); o papel das cÃlulas residentes e os mediadores envolvidos. Foram utilizados camundongos Swiss (25-30 g). Verificou-se que PL induziu migraÃÃo de neutrÃfilos (MN) de forma dose-e-tempo dependente nos modelos de peritonite e bolsa de ar subcutÃnea. Foi demonstrado um aumento na permeabilidade vascular induzido pela administraÃÃo da PL (1 mg/cav) na cavidade peritoneal no modelo de Azul de Evans. O aumento na populaÃÃo de macrÃfagos residentes pelo prÃ-tratamento com tioglicolato, intensificou a MN induzida por PL, sendo observado um resultado semelhante com o grupo depletado de mastÃcitos pelo composto 48/80. Os mastÃcitos parecem exercer um papel modulador inibitÃrio sobre a quimiotaxia de neutrÃfilos, enquanto os macrÃfagos potencializam a MN, possivelmente por meio da liberaÃÃo de mediadores. Para investigaÃÃo dos mediadores envolvidos foram utilizados fÃrmacos bloqueadores especÃficos antes da administraÃÃo da PL. A modulaÃÃo farmacolÃgica com Dexametasona (0,5 mg/kg, s.c.), Pentoxifilina (100 mg/kg, s.c.), Talidomida (50 mg/kg, s.c.), Indometacina (3 mg/kg, s.c.) e Celecoxib (30 mg/kg, s.c.), mas nÃo com Meclizina (40 mg/kg, s.c.) e PCA (10 mg/kg; s.c.), inibiram a MN induzida por PL. Foi verificado por ELISA que os nÃveis dos mediadores IL-1 e IL-6 estavam aumentados no fluido peritoneal 4 h apÃs a administraÃÃo de PL (1 mg/cav, i.p.). Os nÃveis de nitrito tambÃm estavam aumentados no fluido da bolsa de ar subcutÃnea, demonstrando um envolvimento do Ãxido nÃtrico (NO) no efeito prÃ-inflamatÃrio da PL. A PL induziu rolamento e adesÃo de leucÃcitos ao endotÃlio vascular do mesentÃrio de camundongos, bem como quimiotaxia de neutrÃfilos in vitro. AlÃm disso, foi capaz de interagir diretamente com neutrÃfilos, induzindo a sÃntese dos mediadores prÃ-inflamatÃrios TNF-&#945;, IL-1&#946;, PGE2 e NO em cultura de neutrÃfilos. Em conclusÃo, PL induz uma resposta inflamatÃria aguda, caracterizada pela intensa migraÃÃo de neutrÃfilos e aumento da permeabilidade vascular. Promove quimiotaxia para neutrÃfilos de forma indireta, via macrÃfagos residentes, e de forma direta, interagindo com neutrÃfilos, induzindo rolamento e adesÃo no endotÃlio e liberaÃÃo de mediadores prÃ-inflamatÃrios. / Calotropis procera is a laticiferous plant belonging to the family Apocynaceae, found in Asia, Africa and South America. Its latex is comprised of a large number of bioactive molecules that show significant pharmacological properties including anti- and pro- inflammatory, antitumor, healing, antimicrobial, among others. The proteins extracted from this latex have multiple immunomodulatory effects, depending on the route of administration utilized. The objective of this study was to characterize the pro- inflammatory response of protein fraction PL latex Calotropis procera in models of peritonitis and subcutaneous air pouch; neutrophil chemotaxis (in vivo and in vitro); the role of resident cells and mediators involved. Swiss mice were used (25-30 g). It was found that PL induced neutrophil migration (MN) in a dose- and time - dependent in models of peritonitis and subcutaneous air pouch. An increase in vascular permeability induced by the administration of PL (1 mg / cav) in the peritoneal cavity in the Evans blue model was demonstrated. The increase in the population of resident macrophages after pre-treatment with thioglycolate intensified the MN induced by PL, with the similar result observed with the mast cell -depleted group by compound 48/80. Mast cells appear to exert an inhibitory modulatory role on neutrophil chemotaxis, whereas macrophages potentiate the MN, possibly through the release of mediators. For investigation of involved mediators, blocking drugs were used before administration of the PL. Pharmacological modulation Dexamethasone (0.5 mg/kg , s.c.), Pentoxifylline (100 mg/kg , s.c.), Thalidomide (50 mg/kg , s.c.), Indomethacin (3 mg/kg , s.c.) and Celecoxib (30 mg/kg , s.c.), but not with Meclizine (40 mg/kg , s.c.) and PCA (10 mg/kg, s.c.) inhibited the MN induced by PL. It was verified by ELISA, that levels of mediators IL-1 and IL-6 were elevated in the peritoneal fluid 4 hours after administration of PL (1 mg/cav, i.p.). The nitrite levels were also higher in the subcutaneous air pouch fluid, demonstrating the involvement of nitric oxide (NO) in the pro-inflammatory effects of LP. PL induced rolling and adhesion of leukocytes to the vascular endothelium of mesenteric mice and neutrophil chemotaxis in vitro. Furthermore, it can directly interact with neutrophils by inducing the synthesis of pro-inflammatory mediators TNF-&#945;, IL- 1&#946;, PGE2 and NO in neutrophilâs culture. In conclusion, PL induces an acute inflammatory response characterized by intense neutrophil migration and increase of vascular permeability. Promotes neutrophil chemotaxis indirectly, via resident macrophages and directly interacting with neutrophils, inducing rolling and adhesion to the endothelium and release of pro-inflammatory mediators.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:32:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8501_1.pdf: 601697 bytes, checksum: 7ee6721021fee939e3e94dba413acf94 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Calotropis procera (Aiton) W. T. Aiton (Apocynaceae) conhecida popularmente como algodão-deseda é um arbusto selvagem de origem africana rico em substâncias bioativas que determinam o potencial medicinal dessa espécie. Visto que o Diabetes mellitus é uma doença que atinge cerca de dez por cento da população mundial.e que o látex de C. procera já demonstou ser eficaz contra esta doença. Este trabalho buscou avaliar a atividade hipoglicemiante do extrato hidroalcoólico das folhas de Calotropis procera de ocorrência no litoral de Pernambuco - Brasil. Foram usados cinco grupos (n=6/grupo) de ratos Wistar machos para indução do diabetes com estreptozotocina (50 mg/kg, i.p). Em seguida, os animais foram tratados por via oral durante 4 semanas consecutivas com extrato liofilizado das folhas de Calotropis procera (300 e 600 mg/kg), metformina (500 mg/kg), insulina (6U, s.c.) e controle (água). Ao final do período de tratamento foram determinados a variação de massa corporal, o consumo de água e ração e indicadores bioquímicos (glicose, uréia, ácido úrico, creatinina, aminotransferases, colesterol total e triglicerídeos). Também foi conduzido o teste de tolerância oral à glicose (2 g/kg). Os resultados mostraram que o extrato de Calotropis procera (300 e 600 mg/kg) reduziu significativamente o nível de glicemia dos animais diabético durante o período integral de avaliação e melhorou o estado metabólico dos animais. Em adição, no teste de tolerância oral a glicose o extrato produziu diminuição estatisticamente significativa na glicemia aos 30 e 60 minutos. A triagem fitoquímica revelou e quantificou a presença de fenóis totais e flavonóides em 29,1 e 2,9% em unidades de ácido gálico e rutina, respectivamente. Desta forma conclui-se que o extrato das folhas de Calotropis procera possui atividade antihiperglicemiante possivelmente relacionado à presença de fenóis totais e flavonóides