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Previous issue date: 2015-10-02 / A foliculogênese culmina com a ovulação sendo que, em espécies monovulares, apenas um folículo é selecionado, enquanto que os demais entram em processo de atresia. Uma vez que todos os folículos encontram-se sob o mesmo ambiente endócrino, fica evidente que fatores produzidos no ovário são reguladores do crescimento e da diferenciação. Neste contexto, destacam-se fatores pertencentes à superfamília dos fatores de crescimento transformantes beta (TGF-β) e seus receptores. Apesar da grande relevância, a real função dos TGF-β na fisiologia ovariana ainda não foi elucidada. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avançar no entendimento da função e regulação de fatores locais no ovário bovino, avaliando a função do fator de crescimento e diferenciação 9 (GDF9) no crescimento folicular final. Além disso, objetivou-se caracterizar a expressão de membros da família TGF-β, em especial as proteínas morfogenéticas ósseas (BMPs) e seus receptores, na luteinização e ovulação em bovinos. Em um primeiro experimento, a injeção intrafolicular de GDF9 em folículos dominantes (9±0,2 mm de diâmetro), nas concentrações finais de 100 ou 1000 ng/mL, não teve efeito sobre o crescimento folicular final, estro e ovulação (P>0,05). No segundo estudo, utilizando células da granulosa provenientes de folículos pré-ovulatórios (>12 mm), coletados in vivo em diferentes momentos (0, 3, 6, 12 e 24 h) após aplicação i.m de GnRH, a expressão de RNAm das BMPs 1 e 4 não foi regulada. Por outro lado, a expressão de BMP2 aumentou significativamente 3 e 6 h após GnRH (P<0,05). A expressão dos receptores BMPR2 e TGFBR1 aumentou significativamente 12 h após tratamento, enquanto que os receptores BMPR-1A e -1B foram mais expressos 0 e 12 h após GnRH. Os níveis de progesterona no fluído folicular decresceram linearmente com o aumento da expressão de BMPR-1A (R2=0,49) e -1B (R2=0,5). O aumento na expressão de TGFBR1 determinou uma diminuição quadrática nos níveis de progesterona (R2=0,45). O aumento na expressão de BMP2 (R2=0,4) e BMPR1A (R2=0,28) determinou um aumento na concentração de estradiol, apresentando efeito linear e quadrático, respectivamente. Por outro lado, os níveis de estrógeno decresceram linearmente com o aumento na expressão de BMPR2 (R2=0,31). Os dados sugerem que a elevação nos níveis de GDF9 em folículos diferenciados não altera o destino dos mesmos. A expressão da BMP2 está associada a maiores níveis de estradiol, enquanto que a expressão dos receptores de BMPs sugere uma inibição no processo de luteinização. A elucidação do papel dos fatores locais na fisiologia ovariana contribui com o entendimento de patologias reprodutivas e desenvolvimento de tecnologias com fins de contracepção ou aumento da taxa ovulatória. / Antral follicle development culminates with ovulation and, in monovulatory species, only one follicle is selected to grow whereas all the others undergo atresia. During these processes, all the follicles are under the same endocrine environment, indicating the participation of locally produced factors in the regulation of follicular growth and differentiation. In this context, the involvement of transforming growth factors-beta (TGF-β) family members and their receptors is highlighted. Despite their high relevance, the real functions of TGF-β proteins in ovarian physiology is still poorly understood. In this regard, the aim of this study was to gain insight into the function and regulation of ovarian factors, investigating the function of growth and differentiation factor 9 (GDF9) during dominant follicle growth. Furthermore, we tested the hypothesis that TGF-β members, especially bone morphogenetic proteins (BMPs) and their receptors are regulated during luteinization and ovulation processes in cattle. In a first experiment, the intrafollicular injection of GDF9 in dominant follicles (9±0.2 mm diameter) at final concentrations of 100 and 1000ng/mL did not affect follicular growth, estrus manifestation and ovulation (P>0.05). In a second study, using granulosa cells from preovulatory follicles (>12mm), collected in vivo at different time-points (0, 3, 6, 12 and 24 h) after GnRH treatment, mRNA expression of BMPs 1 and 4 was not regulated. By the other size, BMP2 expression was significantly upregulated at 3 and 6 h (P<0.05). The mRNA expression of BMPR2 and TGFBR1 increased 12 h after GnRH treatment (P<0.05), whereas the receptors BMPR-1A and -1B were more expressed at the moment (0 h) and 12 h after GnRH injection. Follicular fluid progesterone concentrations decreased linearly with increased BMPR-1A (R2=0.49) and -1B (R2=0.5) mRNA expression. The increase in TGFBR1 had a negative quadratic effect on progesterone concentration (R2=0.45). The increase in BMP2 (R2=0.4) and BMPR1A (R2=0.28) determined an increase in estradiol, having linear and quadratic effects, respectively. By the other side, follicular fluid estradiol concentrations decreased linearly with increased BMPR2 (R2=0.31) expression. Collectively, the results suggest that increasing the levels of GDF9 in differentiated follicles does not affect their fate. BMP2 expression is associates to high levels of estradiol in follicular fluid, whereas BMPRs expression suggests an inhibitory effect on luteinization. Elucidating the functions of local factors in ovarian physiology would allow to better understand pathological processes and the development of technologies for contraception or, paradoxally, to increase ovulation rates.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpel.edu.br:prefix/3380 |
| Date | 02 October 2015 |
| Creators | Haas, Cristina Sangoi |
| Contributors | 81866119087, http://lattes.cnpq.br/2925436755759308, Vieira, Arnaldo Diniz, Gasperin, Bernardo Garziera |
| Publisher | Universidade Federal de Pelotas, Programa de Pós-Graduação em Veterinária, UFPel, Brasil, Faculdade de Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPEL, instname:Universidade Federal de Pelotas, instacron:UFPEL |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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