Nenhuma / O diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) é uma etapa importante do programa de controle da leishmaniose visceral no Brasil uma vez que o cão é o principal reservatório de Leishmania (Leishmania) infantum, agente etiológico da doença. O objetivo deste estudo foi avaliar o swab conjuntival (SC) como uma ferramenta de triagem em massa para o diagnóstico molecular da LVC em uma área endêmica classificada como prioritária para as ações de vigilância do Ministério da Saúde. Um total de 1.350 cães domiciliados foi envolvido neste estudo. Os animais foram avaliados por testes sorológicos (ELISA como triagem e IFI para confirmação) e moleculares. A PCR em tempo real, tendo como alvo os minicírculos do kDNA, foi o principal teste molecular utilizado para análise das amostras de SC. Dos 1.350 cães triados 369 (27,3%) foram positivos no SC-PCR em tempo real e 126 (9,3%) obtiveram resultado positivo por ELISA. Trinta e um por cento (39/126) dos cães positivos no teste de ELISA foram confirmados pelo IFI, enquanto que comparativamente 83,3% (105/126) obtiveram resultados positivos no método SC-PCR em tempo real. Entre os cães avaliados, um subgrupo de 484 animais foi adicionalmente submetido à avaliação clínica e diagnóstico molecular através do SC associado ao ITS-1 nested PCR. Neste subgrupo o número de animais positivos por SC-PCR em tempo real foi 156/484 (32,2%), por SC-ITS-1 nested PCR 44/484 (9,0%) e por ELISA 52/484 (10,7%). SC-PCR em tempo real foi capaz de detectar infecção em cães, independentemente do grau de sintomatologia (p> 0,05), enquanto ELISA foi mais sensível no grupo de cães que apresentavam três ou mais sinais clínicos relacionados à LVC (SII). Cães infectados com Leishmania (Viannia) braziliensis e L. (L.) amazonensis foram também identificados neste estudo através de RFLP (Restriction Fragment
Lenght Polymorphism) dos amplicons obtidos por ITS-1 nested PCR. Os resultados do presente estudo demonstraram que o SC-PCR em tempo real foi capaz de detectar um maior número de cães infectados que o ELISA e que a prevalência de infecções caninas tem sido subestimada pelos testes sorológicos. A utilização de métodos diagnósticos altamente sensíveis como SC-PCR em tempo real, principalmente em áreas endêmicas, poderia dar uma contribuição significativa para o controle da enfermidade. / The canine visceral leishmaniasis (CVL) diagnosis is an important step of visceral leishmaniais control program in Brazil once the dog is the main animal reservoir host of Leishmania (Leishmania) infantum, the etiologic agent of the disease. The aim of this study was to evaluate conjunctival swab (CS) as a mass-screening tool for CVL molecular diagnosis in an endemic area classified as priority for the Brazilian Ministry of Healthy for surveillance action. A total of 1,350 domiciled dogs were screened. The animals were evaluated by the serological tests (ELISA as screening and IFI for confirmation) and by CS associated to real-time PCR using kDNA minicircles as targets. Of the 1,350 dogs screened 369 (27.3%) were positive by CS real-time PCR and 126 (9.3%) tested positive by ELISA. Thirty one percent (39/126) of the ELISA positive dogs were confirmed by IFI, while 83.3% (105/126) tested positive in the CS real-time PCR assay. Among the dogs screened, a sub-group of 484 animals were also submitted to clinical evaluation and molecular diagnosis using CS associate to ITS-1 nested PCR. In this sub-group the number of animais positive by CS real-time PCR was 156/484 (32.2%), by CS ITS-1 nested PCR 44/484 (9.0%) and by ELISA 52/484 (10.7%). The CS real-time PCR was able to detect infection in dogs independently of the symptomatology degree (p > 0.05), while ELISA was more sensitive in the group of dogs that present three or more clinical signs related to CVL (SII). Dogs infected by L. (Viannia) braziliensis and L. (L.) amazonensis were also found in this study by means of RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) analysis of ITS-1 nested PCR amplicons. The results of present study demonstrated that CS real-time PCR was able to detected a higher number of infected dogs than ELISA and that the prevalence of canine infections has been
underestimated by the serological assays. The use of sensitive molecular diagnostic methods like CS real-time PCR, mainly in endemic areas, could greatly contribute to disease control.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:bdtd.cdtn.br:204 |
| Date | 29 January 2015 |
| Creators | Rodrigo Souza Leite |
| Contributors | Antero Silva Ribeiro de Andrade, Célia Maria Ferreira Gontijo, Nelder de Figueiredo Gontijo, Maria Norma de Melo, Cristiane Rodrigues Corrêa |
| Publisher | CNEN - Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear, Belo Horizonte, CTRA - Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia das Radiações, Minerais e Materiais, CDTN, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações do CDTN, instname:Centro de Desenvolvimento da Tecnologia Nuclear, instacron:CDTN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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