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Previous issue date: 2009 / A malária humana é causada por protozoários do gênero Plasmodium.
Atualmente, mais de 2 bilhões de pessoas estão sob risco de contrair malária
sobretudo em áreas tropicais e subtropicais. No Brasil, a malária está concentrada na
região da Amazônia Legal, onde se registram mais de 99% dos casos, sendo cerca de
80% causados pelo Plasmodium vivax. Estratégias efetivas de combate ao parasito
são essenciais para o controle da doença, e estas dependem do entendimento de
diversos fatores como, por exemplo, a variabilidade genética e a estrutura
populacional do P. vivax. Desta maneira, os marcadores moleculares são importantes
ferramentas que podem auxiliar na elucidação destes aspectos biológicos do parasito.
Contudo, poucos marcadores moleculares estão disponíveis para estudos
populacionais de P. vivax, comparado ao P. falciparum, principalmente marcadores
neutros ou quase neutros, ideais para esse tipo de estudo. Portanto, o objetivo deste
trabalho foi identificar novos microssatélites em P. vivax e realizar análises de genética
de população em isolados de cinco áreas da Amazônia Brasileira utilizando esses
microssatélites e os cinco marcadores do tipo TR mais polimórficos descritos na
literatura. Deste modo, uma busca in silico foi realizada utilizando o rascunho do
genoma do parasito, e foram selecionados microssatélites com unidades repetitivas
variando de 2 a 4 pares de base. Cada locus foi amplificado utilizando iniciadores
específicos, incluindo os TRs cujos iniciadores foram baseados na literatura. O DNA
molde para a realização da amplificação foi extraído de pacientes com infecção aguda
de P. vivax. Os produtos amplificados foram analisados em seqüenciadores
automáticos de DNA utilizando programas de análise de tamanhos de fragmentos. As
análises de genética de população foram realizadas utilizando vários pacotes
computacionais. Ambos marcadores detectaram uma alta diversidade nas populações
estudadas. Porém, algumas diferenças foram identificadas nas análises com cada tipo
de marcador molecular, dentre elas: as populações geneticamentes próximas foram
diferentes juntamente com o padrão de desequilíbrio de ligação em cada população e
a taxa de multiplicidade de infecção também variou entre os tipos de marcadores.
Além disso, foi possível, utilizando os microssatélites, estruturar as populações, o que
não ocorreu utilizando os TRs. Por fim, foi possível perceber que os microssatélites se
mostraram mais polimórficos, mais bem distribuídos pelo genoma do parasito e ainda
assim, o seu mecanismo de manutenção de variabilidade é conhecido, logo, eles
aparentam ser mais aptos na utilização de estudos de genética de população de P.
vivax. / Human malaria is caused by a protozoan from genus Plasmodium. Currently,
more than 2 billion people are under risk to contract malaria mainly in tropical and
subtropical areas. In Brazil, malaria is concentrated in the Legal Amazon, where more
than 99% of the cases are registered, being around 80% caused by Plasmodium vivax.
Effective strategies of combating are essential to control the disease, and these ones
depend on understanding of many factors such as the genetic variability and population
structure of P. vivax. Hence, molecular markers are important tools that can help to
elucidate these biological aspects of the parasite. However, few molecular markers are
available for population studies of P. vivax, compared with P. falciparum, mainly neutral
or near neutral markers, which are indicated for this kind of study. Thus, the aim of this
work was to identify new polymorphic microsatellite loci in P. vivax and to perform
population genetic analyses with isolates from five areas of Brazilian Amazon using
these microsatellites and also the five most polymorphic tandem repeats markers
described in literature. For this, an in silico search was performed using the genome
draft of the parasite, and microsatellite with repeat units ranging from 2 to 4 base pairs
were selected. Each locus was amplified using specific primers, including the TRs
whose primers were previously described. The template DNA for amplification was
obtained from patient’s blood with acute P. vivax infection. The amplified products were
analyzed in automatic DNA sequencer using software to identify fragments size. The
genetic population analyses were performed with several computational packages.
Although, some differences were identified among the measured parameters with each
kind of molecular marker: the populations genetically close, linkage disequilibrium
pattern in each population and level of multiple infection were different. Besides, it was
possible, using the microsatellites, to detect structuring of the populations, what did not
happen using the TRs. In conclusion, it was possible to notice that the microsatellite
are more polymorphic, more spread across parasite genome, and its variability
maintenance mechanism is known; thus, they seem to be more useful in population
genetic studies of P. vivax field isolates.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/6264 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Rezende, Antônio Mauro de |
| Contributors | Brito, Cristiana Ferreira Alves de, Oliveira, Guilherme Corrêa de, Wunderlich, Gerhard, Caldeira, Roberta Lima, Brito, Cristiana Ferreira Alves de. |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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