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Previous issue date: 2015-06-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As lipocalinas constituem uma família de pequenas proteínas extracelulares com cerca de 200 resíduos de aminoácidos e massa molecular de 20 Kda possuem forte divergência em suas sequências de aminoácidos mas mantêm a sua estrutura tridimensional estritamente conservada. Sua diversidade funcional e reconhecimento molecular, contribuem para a utilização dessas proteínas como base para o desenvolvimento de alguns biofármacos. Os genes constitutivos participam de diversas funções do metabolismo celular e são utilizados como controle endógeno sendo fundamentais para validação dos resultados no estudo da expressão utilizando real time RTq-PCR. Em relação a esses genes, ainda não foram publicados trabalhos que identifiquem e validem genes constitutivos como genes de referência para a espécie Amblyomma sculptum (Complexo Amblyomma cajennense). Atualmente, transcriptomas de órgãos e tecidos de carrapatos do gênero Amblyomma têm sido publicados identificando uma variedade de transcritos de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina (SHBP). Neste trabalho, realizamos por predição in silico a identificação de nove lipocalinas com domínio de ligação a serotonina e histamina estabelecendo possíveis relações filogenéticas funcionais de transcritos de lipocalinas identificadas no transcriptoma de glândula salivar do A. sculptum. Realizamos o desenho e a validação de 3 primers de genes de lipocalinas identificadas, lip4, lip7 e lip24. Foram analisados e validados 3 primers de genes constitutivos (g6pdh, 3ohcoadh e gapdh) candidatos potenciais a genes de referência em glândulas salivares, intestinos e ovários do carrapato A. sculptum em situação de não infecção/infecção com R. amblyommii. Foram validados 3 modelos estruturais correspondentes às proteínas lipocalina 4, lipocalina 7 e lipocalina 24. E ainda, realizou-se a análise da expressão diferencial de lipocalinas e potenciais genes de referência em glândula salivar, intestino e ovário de A. sculptum. Os dados obtidos na análise de expressão gênica por real time RT-qPCR suportam a hipótese de que os três genes de lipocalinas interferem na interação microrganismo-vetor sendo necessários trabalhos adicionais para verificação da validade desta hipótese, uma vez que dentre as 121 lipocalinas preditas no transcriptoma de glândulas salivares, somente nove apresentam domínios SHBP sugerindo um papel especial na função destas nos tecidos estudados. / The lipocalin’s family compound a small extracellular protein of about 200 amino acid residues and a molecular mass of 20 kDa present strong divergence in their amino acid sequences but retain its strictly conserved three dimensional structure. Its functional diversity and molecular recognition, contributing to the use of these proteins as a basis for the development of some biopharmaceuticals. The reference genes involved in various cellular metabolism functions and are used, as endogenous control is necessary to validate the results in the study of the expression for real RTQ-PCR analisys. For these genes have not yet been published works to identify and validate constitutive genes as the reference genes for Amblyomma sculptum (Amblyomma cajennense complex) species. Currently, transcriptomes of organs and tissues of the genus Amblyomma ticks have been published identifying a variety of lipocalins transcripts with binding domain histamine and serotonine (SHBP). We carried out by prediction in silico identification of nine lipocalins with serotonine and histamine binding domain setting possible functional phylogenetic relationships of lipocalins transcripts identified in salivary gland transcriptome of A. sculptum. We carry out the design and validation of three primers identified lipocalin genes, lip4, lip7 and lip24. They were analyzed and validated three primers of constitutive genes (g6pdh, 3ohcoadh and gapdh) potential candidate reference genes in the salivary glands, ovaries and intestines A. sculptum tick for a situation of no infection / infection with R. amblyommii. Were validated three corresponding structural models to lipocalins 4, 7 and 24. Yet, there was the analysis of differential expression of lipocalins and potential reference genes in the salivary gland, gut and ovarian A. sculptum tick. The results of analysis in experiment of gene expression by real time RT-qPCR support the hypothesis that the three lipocalins genes interfere with the microorganism-vector interactions. Finaly it is necessary a further work to verify the validity of this hypothesis, since among the 121 lipocalins predicted in transcriptome salivary glands, only nine have SHBP domains suggesting a special role in the function of these tissues studied.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/7369 |
| Date | 26 June 2015 |
| Creators | Soares, Adriano Carlos |
| Contributors | Siqueira, Cláudio Lisias Mafra de |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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