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Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os tripomastigotas metacíclicos de Trypanosoma cruz; expressam as glicoproteínas de superfícies GP82 e GP90 de maneira estágio-específica, as quais estão implicadas na invasão da célula hospedeira. Embora as proteínas não sejam expressam e os RNAm GP82 e GP90 fracamente detectáveis em epimastigotas, ensaios de transcrição em núcleos isolados mostraram que eles são transcritos constitutivamente nos dois estágios. Este resultado indica que o acúmulo de transcritos nas formas metacíclicas não é devido a um aumento na transcrição dos genes GP82 e GP90. Para investigar se a estabilidade dos RNAm seria a responsável pelas diferenças nos níveis destes RNAm, parasitas foram tratados com actinomicina D ou cicloheximida. Quando tratados com actinomicina D, as meia-vidas dos transcritos GP82 e GP90 foram maiores que 8 h em tripomastigotas metacíclicos e menor que 0,5 h e 2 h em epimastigotas, respectivamente. Na presença de cicloheximida, os níveis de RNAm GP82 e GP90 caíram levemente, enquanto que em epimastigotas os níveis destes RNAm aumentaram após 8 h de tratamento. Este efeito sugere um mecanismo de estabilização atuando em tripomastigotas metacíclicos e de desestabilização em epimastigotas, os quais parecem ser mediados por elementos presentes na 3' -UTR destes transcritos. Nós mostramos que a 3'-UTR da GP82 gera uma expressão maior do gene repórter GFP em tripomastigotas metacíclicos do que em epimastigotas. Consistente com este achado, análises de "northern blot" mostram que os RNAm GP82 e GP90 são mobilizados para os polissomas e conseqüentemente traduzidos apenas em tripomastigotas metacíclicos. Estes resultados sugerem que a estabilidade destes RNAm envolve interações com elementos regulatórios positivos e negativos na 3' -UTR. Estudos para melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na estabilidade dos RNAm GP82 e GP90 estão em progresso em nosso laboratório. / Trypanosoma cruzi metacyclic trypomastigotes express the developmentally
regulated GP82 and GP90 glycoproteins, which are implicated in host cell invasion.
Although GP82 and GP90 mRNAs and proteins are not present and the mRNAs barely
detectable in epimastigotes, nuclear run-on analysis showed that they are transcribed in
both stages. This result indicates that accumulation of transcripts in metacyclic forms is
not due to increased transcription of the GP82 and GP90 genes. To investigate whether
mRNA stability may be responsible for the differences in the steady-state levels of these
mRNAs, parasites were treated with actinomycin D or cycloheximide. When treated with
actinomycin D, the half-lives estimated for GP82 and GP90 transcripts were longer than
8 h in metacyclic trypomastigotes and less than 0.5 h and 2 hours in epimastigotes,
respectively. In the presence of cycloheximide, the levels of GP90 and GP82 mRNA
decayed slightly after 8 h in metacyclic trypomastigotes, whereas in epimastigotes the
levels of these mRNAs increased. This effect suggests a stabilizing mechanism acting
in metacyclic trypomastigotes and a destabilizing mechanism in epimastigotes which
could be mediated by an element present in the 3’-UTR of the transcripts. We show that
the 3’-UTR of GP82 causes higher expression of the green fluorescent protein reporter
gene in metacyclic trypomastigotes than in epimastigotes. Consistent with this finding,
northern blot analysis showed that GP82 and GP90 mRNAs were mobilized to
polysomes and consequently translated, but only in metacyclic trypomastigotes. These
results suggest that the stability of these mRNAs involves interactions between positive
and negative regulatory elements in the 3’-UTR. Work is ongoing to better
understanding the mechanisms involved in changes in GP82 and GP90 mRNA stability. / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/23862 |
| Date | January 2008 |
| Creators | Gentil, Luciana Girotto [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Silveira, Jose Franco da [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 175 f. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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