Le Virus de Varicelle et du Zona (VZV) est un -herpesvirus responsable de deux maladies distinctes : la varicelle et le zona. Dans ce travail, nous nous sommes intéressés à la protéine Immediate Early 63 (IE63) du VZV. Cette protéine est essentielle pour la réplication virale et critique pour létablissement de la latence du virus dans les ganglions sensoriels. Lors du cycle lytique, elle présente une localisation majoritairement nucléaire, alors que durant la latence, cest dans le cytoplasme quelle se concentre pour finalement se répartir entre les deux compartiments une fois la réactivation du virus enclenchée. Ses propriétés régulatrices sont sujet à controverse depuis de nombreuses années.
Les phénomènes de phosphorylation sont connus pour jouer un rôle clé dans la régulation de lactivité de nombreuses protéines. Dans la première partie de ce travail, nous nous sommes penchés sur la phosphorylation dIE63 par deux types de kinases cellulaires importantes, la Protéine Kinase AMPc-dépendante (PKA) et les Cycline-dépendante Kinases (Cdks). Nous avons tenté de mettre en évidence limpact de cette modification post-traductionnelle sur la localisation cellulaire et les propriétés régulatrices dIE63. Nous avons pu montrer quIE63 est phosphorylée par la PKA. Il sest avéré que cette phosphorylation nétait pas essentielle pour la localisation cellulaire correcte de la protéine, mais bien pour ses propriétés régulatrices. Ensuite, nous avons pu démontrer quIE63 est phosphorylée in vitro par la Cdk1 et la Cdk5, et in vivo par la Cdk1. Cette phosphorylation est apparue comme cruciale pour la localisation cellulaire et lactivité régulatrices dIE63 en cellules Vero.
A lentame de la seconde partie de ce travail, une compréhension des fonctions globales dIE63 sur lexpression de lensemble des gènes cellulaires manquait toujours. Dans ce contexte, nous avons décidé dexaminer les effets dIE63 sur la transcription de lensemble du génome cellulaire par la technique de microarray. Nous avons pu montrer que : (i) en labsence dautres protéines virales, IE63 affecte lexpression dun nombre limité de gènes, incluant des gènes impliqués dans la transduction de signaux, la transcription, la réponse immunitaire et la signalisation des protéines « Heat-Shock ». (ii) Lexpression dIE63 provoque suivant les cas une diminution ou une stimulation de la liaison de la RNA polymérase II sur les promoteurs réprimés et activés par la protéine, respectivement. (iii) En cellules HeLa, la phosphorylation correcte dIE63 est cruciale pour ses propriétés régulatrices sur les promoteurs endogènes.
Des travaux antérieurs émanant de notre laboratoire ont montré quIE63 était capable dinhiber lexpression de certains gènes dépendants du NF-B comme lIL-8 et lIL-6. De plus, plusieurs études montrent que le VZV est capable déchapper au système immunitaire via notamment une répression des gènes dépendant du NF-B. De manière surprenante, lexpression basale de ces gènes nest pas affectée dans nos conditions, cela étant peut être du à un problème daccessibilité de leur promoteur lié à louverture de la chromatine. De manière à tester cette hypothèse, nous avons mesuré linfluence dIE63 sur lexpression de certains de ces gènes (IL-8, IL-6, ICAM-1 et IB) après un traitement des cellules au TNF, une cytokine proinflammatoire connue pour provoquer louverture de la chromatine au niveau du promoteur de nombreux gènes. Les résultats intéressants obtenus lors de ce travail sont : (i) dans des cellules stimulées au TNF, lexpression de certains gènes dépendant du NF-B est affectée par IE63 dune manière dépendante du promoteur étudié, (ii) le niveau de phosphorylation de la protéine influence ces propriétés régulatrices, (iii) leffet dIE63 est corrélé à une modification de louverture de la chromatine et enfin, (iv) IE63 est capable de modifier la liaison du NF-B sur les promoteurs testés.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:BICfB/oai:ETDULg:ULgetd-09132007-141842 |
| Date | 24 January 2007 |
| Creators | Habran, Lionel |
| Contributors | Vanderplasschen, Alain, Muller, Marc, Sadzot-Delvaux, Catherine, Merville, Marie-Paule, Piette, Jacques, Martial, Joseph, Dubuisson, Jean, Willems, Luc |
| Publisher | Universite de Liege |
| Source Sets | Bibliothèque interuniversitaire de la Communauté française de Belgique |
| Detected Language | French |
| Type | text |
| Format | application/msword |
| Source | http://bictel.ulg.ac.be/ETD-db/collection/available/ULgetd-09132007-141842/ |
| Rights | restricted, Le contrat BICTEL/e complété et signé a été remis au gestionnaire facultaire. |
Page generated in 0.0023 seconds