Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CHAPTER I -
The aqueous extract prepared from Schizolobium parahyba (Sp) leaves, a native
plant from Mata Atlantica forest (Brazil), was tested to analyze its ability to inhibit
some biological and enzymatic activities induced by Bothrops alternatus and
Bothrops moojeni snake venoms. Sp chromatography in Sephadex LH 20 resulted in
3 fractions: F1 (methanolic fraction); F2 (methanol:water fraction, 1:1 v/v); and F3
(aqueous fraction). These fractions were analyzed in terms of its capacity of inhibit
the venoms fibrinogenolytic activity. Sp inhibited 100% of lethality, blood
incoagulability, hemorrhagic and indirect hemolytic activities for a 1:10 ratio
(venom/extract, w/w), and coagulant activity in a 1:5 ratio (venom/extract, w/w)
induced by venoms. Venoms fibrinogenolytic activity were also neutralized by Sp in a
1:10 ratio, resulting in total protection of Bβ chain and partial protection for the
fibrinogen Aα chain. However, larger ratios of extract/proteins have caused a
complete vanishing of all fibrinogen chains possibly caused by Sp precipitation.
Interaction tests have demonstrated that for certain extract/proteins ratios Sp
precipitates proteins non-specifically suggesting the presence of tannins, which are
very likely responsible for the excellent inhibiting effects of the analyzed ophidian
activities. Therefore, the fractioning of Sp was carried out aiming at separating these
compounds that mask the obtained results. F1 inhibited 100% the venom
fibrinogenolytic activity without presenting protein precipitation effect; F2 demonstrated
only partial inhibition of these venoms activities. Finally, F3 did not inhibit fibrinogen
proteolysis, but presented strong protein precipitating action. We conclude that Sp,
together with tannins, also contains other compounds which can present specific toxin
inhibition action of snake venoms.
CHAPTER II -
Do extrato aquoso liofilizado das folhas de Schizolobium parahyba foram isolados
quatro compostos ativos, isoquercitrina, miricetina-3-O-glicosídeo, catequina e
galocatequina, por cromatografia em Sephadex LH 20 seguido de HPLC semipreparativo
em coluna C-18 e identificados por RMN do 1H e 13C. Essa é a primeira
vez que estas substâncias são relatadas nesta espécie assim como suas atividades
antiofídicas. Após isolamento foram todas testadas frente a atividade hemorrágica e
fibrinogenolítica da peçonha de Bothrops alternatus (Bal). Na proporção 1:30
(Peçonha/fração, m/m) a isoquercitrina inibiu parcialmente a atividade hemorrágica; a
miricetina-3-O-glicosideo e a catequina não foram capazes de inibir a hemorragia
induzida pela Bal e a galocatequina, por sua vez, apresentou uma eficiente
neutralização desta atividade da peçonha. Na proporção de 1:100 (Peçonha/fração,
m/m) ficou evidenciado o efeito de inibição total da ação fibrinogenolítica da peçonha
pela miricetina-3-O-glicosideo; a isoquercitrina não protegeu a proteólise da cadeia
Aα do fibrinogênio e inibiu parcialmente a degradação da cadeia Bβ enquanto a
catequina e a galocatequina inibiram parcialmente a degradação da cadeia Aα e
totalmente a da cadeia Bβ. Dessa forma concluímos que a galocatequina e a
miricetina-3-O-glicosideo são excelentes inibidores de toxinas hemorrágicas e
fibrinogenolíticas respectivamente. Estudos vindouros como o de modelagem
molecular e cristalização de raio-X usando toxinas isoladas e estas substâncias
poderão ser de grande importância para o desenho de novas drogas auxiliares do
tratamento com soro antiofídico ou para melhor elucidação da relação estruturafunção
das toxinas destes venenos. / CAPÍTULO I -
O extrato aquoso preparado das folhas de Schizolobium parahyba (Sp), uma planta
nativa da Mata Atlântica (Brasil), foi testado para avaliar sua habilidade de inibir
algumas atividades biológicas e enzimáticas induzidas pelas peçonhas brutas de
Bothrops alternatus e Bothrops moojeni. Cromatografia de Sp em coluna de
Sephadex LH 20 resultou em 3 frações: F1 (fração metanólica); F2 (fração metanol :
água, 1:1 v/v) e F3 (fração aquosa). Estas frações foram analisadas quanto a
capacidade de inibir a atividade Fibrinogenolítica das peçonhas. Sp inibiu em 100% a
letalidade, a incoagulabilidade sanguínea, a atividade hemorrágica e hemolítica
indireta na proporção de 1:10 (peçonha/extrato, m/m) e atividade coagulante na
proporção de 1:5 (peçonha/extrato, m/m) induzidas pelas peçonhas. A atividade
fibrinogenolítica das peçonhas também foi neutralizada por Sp na proporção de 1:10,
resultando em proteção total da cadeia Bβ e parcial da Aα do fibrinogênio. No
entanto, proporções maiores de peçonha/extrato mostraram desaparecimento de
todas as cadeias do fibrinogênio numa possível precipitação causada por Sp. Os
testes de interação extrato/proteínas demonstraram que em determinadas
proporções de extrato/proteínas Sp precipita proteínas inespecificamente, sugerindo
a presença de taninos, os quais muito provavelmente são os responsáveis pelo
excelente efeito inibidor das atividades ofídicas analisadas. Assim, com o intuito de
separar estes componentes que mascaram os resultados obtidos, foi realizado o
fracionamento de Sp. F1 inibiu em 100% a atividade fibrinogenolítica das peçonhas e
não apresentou efeito de precipitação de proteínas; F2 demonstrou inibição parcial
desta atividade das peçonhas e F3 não inibiu a proteólise do fibrinogênio, mas
apresentou forte ação precipitante de proteínas. Concluímos, assim que Sp, além de
taninos, também contém outros compostos e que estes podem apresentar ação
específica de inibição de toxinas de peçonhas de serpentes.
CAPÍTULO II -
Do extrato aquoso liofilizado das folhas de Schizolobium parahyba foram isolados
quatro compostos ativos, isoquercitrina, miricetina-3-O-glicosídeo, catequina e
galocatequina, por cromatografia em Sephadex LH 20 seguido de HPLC semipreparativo
em coluna C-18 e identificados por RMN do 1H e 13C. Essa é a primeira
vez que estas substâncias são relatadas nesta espécie assim como suas atividades
antiofídicas. Após isolamento foram todas testadas frente a atividade hemorrágica e
fibrinogenolítica da peçonha de Bothrops alternatus (Bal). Na proporção 1:30
(Peçonha/fração, m/m) a isoquercitrina inibiu parcialmente a atividade hemorrágica; a
miricetina-3-O-glicosideo e a catequina não foram capazes de inibir a hemorragia
induzida pela Bal e a galocatequina, por sua vez, apresentou uma eficiente
neutralização desta atividade da peçonha. Na proporção de 1:100 (Peçonha/fração,
m/m) ficou evidenciado o efeito de inibição total da ação fibrinogenolítica da peçonha
pela miricetina-3-O-glicosideo; a isoquercitrina não protegeu a proteólise da cadeia
Aα do fibrinogênio e inibiu parcialmente a degradação da cadeia Bβ enquanto a
catequina e a galocatequina inibiram parcialmente a degradação da cadeia Aα e
totalmente a da cadeia Bβ. Dessa forma concluímos que a galocatequina e a
miricetina-3-O-glicosideo são excelentes inibidores de toxinas hemorrágicas e
fibrinogenolíticas respectivamente. Estudos vindouros como o de modelagem
molecular e cristalização de raio-X usando toxinas isoladas e estas substâncias
poderão ser de grande importância para o desenho de novas drogas auxiliares do
tratamento com soro antiofídico ou para melhor elucidação da relação estruturafunção
das toxinas destes venenos. / Mestre em Genética e Bioquímica
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/urn:repox.ist.utl.pt:RI_UFU:oai:repositorio.ufu.br:123456789/15897 |
| Date | 10 May 2007 |
| Creators | Vale, Luis Henrique Ferreira do |
| Contributors | Brandeburgo, Maria Inês Homsi |
| Publisher | Universidade Federal de Uberlândia, Programa de Pós-graduação em Genética e Bioquímica, UFU, BR, Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFU, instname:Universidade Federal de Uberlândia, instacron:UFU |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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