Os fungos endofíticos têm sido cada vez mais pesquisados como fonte de moléculas bioativas. Neste trabalho, foram isolados fungos endofíticos de uma árvore produtora de compostos medicinais, Handroanthus impetiginosus, com o objetivo de verificar se produziam metabólitos com atividade biológica e de identificar as espécies fornecedoras de princípios bioativos. Todas as 148 cepas isoladas foram triadas segundo a atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 e Escherichia coli ATCC 25922 pelo método do ágar em bloco. Dentre essas, cinco fungos foram submetidos a fermentação em pequena escala, em caldo Czapek, durante 15 dias, a 28°C, tanto sob agitação quanto em modo estático. Ao final desse período, as culturas foram filtradas e submetidas a extração líquido-líquido. Os extratos obtidos foram avaliados quanto à capacidade de inibir o crescimento dos micro-organismos patogênicos citados anteriormente, por teste de difusão em ágar e determinação da concentração inibitória mínima (CIM). As menores faixas de CIM observadas foram 125-250 μg.mL-¹, de Alternaria alternata, e 250-500 μg.mL-¹, de Lasiodiplodia sp. Também avaliou-se o efeito sobre a viabilidade de linhagens celulares derivadas de câncer humano de mama (MCF-7), fígado (HepG2) e pulmão (A549). Os extratos de A. alternata e de Lasiodiplodia sp. reduziram a menos que 10% a viabilidade das células tumorais MCF-7 e HepG2. O primeiro também reduziu a menos que 5% a viabilidade de células A549. Por isso, tais fungos endofíticos foram submetidos a fermentação submersa em maior escala. O extrato de Alternaria alternata e algumas de suas frações reduziram expressivamente a viabilidade das três linhagens celulares testadas. Dentre tais frações, a F3 se destacou por apresentar menores valores de IC50 para MCF-7 e HepG2 (10,28±5,22 e 9,75±1,31 μg.mL-¹, respectivamente) do que o fármaco cisplatina (21,12±1,56 e 27,15±1,73 μg.ml-¹, respectivamente). O fracionamento dos extratos por cromatografia em coluna e cromatografia líquida de alta eficiência permitiram o isolamento de dois compostos, provenientes de A. alternata, e de um produzido por Lasiodiplodia sp. Tais amostras foram analisadas por ressonância magnética nuclear, e foi identificado o composto 4-hidróxi-benzaldeído no extrato de A. alternata. Ficou comprovado que os extratos de fermentação de fungos endofíticos isolados de H. impetiginosus exerceram importante atividade biológica, reduzindo a viabilidade de células derivadas de câncer de mama, fígado e pulmão. / Endophytic fungi have been prospected as source of active metabolites. In this work, endophytic fungi had been isolated from a tree that produces medicinal compounds, Handroanthus impetiginosus, in order to check if they produce biological active metabolites and to identify the biologically active species. All the 148 strains isolated were screened by agar piece method to investigate their antibiotic activity against Staphylococcus aureus ATCC 6538, Candida albicans ATCC 10231 e Escherichia coli ATCC 25922 . Among them, five endophytic fungi were fermented on small scale. The fermentation was performed in a Czapek broth, for 15 days, 28oC, under either stirring or static conditions. After this period, the cultures were filtered and subjected to liquid-liquid extraction. The obtained extracts were tested against the microorganisms mentioned above and the cancer cells MCF-7, HepG2 and A549. The lowest minimum inhibitory concentrations (MIC) exhibited were 125-250 μg.mL-¹ (from Alternaria alternata) and 250-500 μg.mL-¹ (from Lasiodiplodia sp.) both against S. aureus . Two extracts appreciably reduced tumor cells viability and, therefore, these endophytic fungi were fermented on large scale. The extract from A. alternata significantly reduced the viability of all three cell lines tested to less than 10% and its chemical study was biomonitored. One of its fractions, F3, exhibited lower IC50 against MCF-7 and HepG2 (10.28±5.22 and 9.75±1.31 μg.mL-¹, respectively) than cisplatin, a pharmaceutical compound commercially available (21.12±1.56 and 27.15±1.73 μg.mL-¹, respectively). The extract from Lasiodiplodia sp. diminished the viability of MCF-7 and HepG2 cells to less than 10%. The partitioning of the extracts by column chromatography and high performance liquid chromatography provided two isolated compounds from A. alternata and one from Lasiodiplodia sp. The samples were analyzed by nuclear magnetic resonance technique and the compound 4-hydroxybenzaldehyde was identified for A. alternata extract. The fermentation extracts of endophytic fungi from H. impetiginosus exhibited relevant biologic activity reducing the viability of cells derived from breast, liver and lung cancer. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:10.254.254.39:tede/980 |
| Date | 26 February 2016 |
| Creators | AGOSTINI, Sandra Barbosa Neder |
| Contributors | LUIZ, Jaine Honorata Hortolan, http://lattes.cnpq.br/3433047807065363, MENDES, Adriano Aguiar, LAGO, João Henrique Ghilard |
| Publisher | Universidade Federal de Alfenas, Instituto de Ciências Exatas, Brasil, UNIFAL-MG, Programa de Pós-Graduação em Química |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UNIFAL, instname:Universidade Federal de Alfenas, instacron:UNIFAL |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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