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Previous issue date: 2014-01-01 / The identification of filamentous fungiis traditionally based on morphological and biochemical criteria which are time demanding and for which results can be inaccurate. This fact motivated the evaluation of matrix-assisted laser desorption ionization ??? time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometry for the identification of 36 brazilian isolates of Aspergillus terreus. The species is important worldwide due to its ability to produce lovastatin, a drug extremely successful in decreasing plasmatic cholesterol and consequently decreasing the risk of cardiovascular disease, main cause of death worldwide. Prior to MS analysis, the sequencing of internal transcribed spacer (ITS) allowed the identity confirmation of 94% of samples when compared GenBank database. First of all with the aim to compare the molecular biological technique with identification for MALDI-TOF was evaluated the influence of important factors in the quality of mass spectrums and then selected those more suitable to the identification of the specie. This enabled to characterize the proteic profile 30 of the 36 isolates. Nevertheless only 20% of brazilian isolates were identified as A. terreus when compared at the almost 4000 organisms of Biotyper database which may be attributed to the low representation of the specie. The results show that there are strong evidences that the technique is suitable which corroborates with this is: the similar pattern in the dendograms generated for each methodology, the ability to distinguish of the isolates comparatively higher by MALDI-TOF and the proven effectiveness of the technique evaluated by dark tests from the construction of a personal library. For these reasons the use of MALDI-TOF in the identification of isolates of A. terreus in replacing the conventional techniques is promising nevertheless requires optimizations regarding standardizing the processing of samples and inclusion of more reference spectra in the specie in database. / A identifica????o de fungos filamentosos ?? tradicionalmente baseada em crit??rios morfol??gicos e bioqu??micos que demandam tempo e cujos resultados podem ser imprecisos. Isso motivou a avalia????o do uso da t??cnica alternativa de espectrometria de massa por ioniza????o e dessor????o a laser assistida por matriz (MALDI-TOF) para a identifica????o de 36 isolados brasileiros de Aspergillus terreus. A esp??cie ?? importante mundialmente, dentre outros motivos, devido ?? habilidade de produzir lovastatina, uma droga bem sucedida na redu????o do colesterol plasm??tico com consequente redu????o do risco de doen??as cardiovasculares, principal causa mundial de ??bitos. Antes das an??lises por MALDI-TOF, o sequenciamento do espa??ador interno transcrito (ITS) permitiu a confirma????o da identidade de 94% (34/36) dos isolados quando comparado ?? base de dados GenBank. Inicialmente de forma a comparar a t??cnica de biologia molecular com a identifica????o por MALDI-TOF foi avaliado a influ??ncia de importantes fatores na qualidade dos dados e selecionado aqueles que mais se adequavam a identifica????o da esp??cie. Isso permitiu caracterizar quanto ao perfil proteico 30 dos 36 isolados. Contudo, somente 20% dos isolados brasileiros foram identificados como A. terreus quando comparado aos quase 4000 organismos da base de dados Biotyper o que pode ser atribu??do ?? baixa representatividade da esp??cie. Segundo os resultados existem fortes evid??ncias de que a t??cnica ?? adequada o que corrobora com isso ?? o padr??o semelhante observado nos dendrogramas gerados por cada uma das metodologias, a capacidade de distin????o dos isolados comparativamente maior por MALDI e a comprovada efic??cia da t??cnica avaliada pelo teste ??s escuras a partir da constru????o de uma biblioteca pr??pria. Por essas raz??es o emprego de MALDI-TOF na identifica????o de isolados de A. terreus em substitui????o as t??cnicas tradicionais ?? promissora, por??m requer otimiza????es no que diz respeito ?? padroniza????o quanto ao processamento das amostras e o incremento de mais espectros de refer??ncia da esp??cie no banco de dados.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:bdtd.ucb.br:tede/2257 |
| Date | 01 January 2014 |
| Creators | Motta, Dielle de Oliveira |
| Contributors | Magalh??es, Beatriz Simas, Parachin, N??dia Skorupa |
| Publisher | Universidade Cat??lica de Bras??lia, Programa Strictu Sensu em Ci??ncias Gen??micas e Biotecnologia, UCB, Brasil, Escola de Sa??de e Medicina |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UCB, instname:Universidade Católica de Brasília, instacron:UCB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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