Resumo: O protozoario Trypanosoma cruzi controla sua expressao genica principalmente por mecanismos pos-transcricionais como, por exemplo, a estabilidade de mRNAs. Em trabalho anterior, foram realizados experimentos de microarranjos, para avaliar o decaimento de mRNA de epimastigotas de T. cruzi Dm28c, tratados por 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180 e 240 minutos com 10 ƒÊg/mL e 50 ƒÊg/mL de actinomicina D (pontos em replicata, totalizando 40 amostras). Comparando-se os pontos temporais extremos, observou-se de 2 a 3 mil genes diferencialmente expressos para estabilidade de mRNA. Devido as limitacoes inerentes a tecnica de microarranjos, e a possibilidade de se utilizar sequenciamento de DNA como abordagem, a qual possui diversas vantagens em relacao aos microarranjos, foi idealizado o presente trabalho, que foi replanejado de acordo com as informacoes colhidas no trabalho citado acima. Foram analisados pontos temporais de decaimento menores (0, 5, 10, 15, 20 e 25 minutos) com a tecnica de sequenciamento RNA-Seq WT. As vantagens em relacao aos microarranjos sao: medida absoluta (quantitativa), maiores alcance dinamico, resolucao e cobertura genomica, sem hibridizacao cruzada e com pouco ruido de fundo. A dose efetiva do inibidor actinomicina foi fixada em 10 ƒÊg / mL / 107 celulas e foi acrescido sinefungina a 1 ƒÊg / mL / 107 celulas para as analises de decaimento dos mRNAs de T. cruzi. Em conjunto, nossos dados mostram que uma pequena parte da regulacao da expressao genica desse parasito durante o seu ciclo de vida pode ser explicada pela estabilidade de suas moleculas de mRNA. Ja que, foi possivel relacionar a velocidade de decaimento dos transcritos maduros com grupos funcionais envolvidos com montagem e manutencao do citoesqueleto, de ribossomos e de utros tipos de complexos ribonucleoproteicos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:dspace.c3sl.ufpr.br:1884/27156 |
| Date | 11 April 2012 |
| Creators | Francisco, Eduardo Lemons |
| Contributors | Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Biologia Celular e Molecular, Probst, Christian Macagnan |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPR, instname:Universidade Federal do Paraná, instacron:UFPR |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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