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Previous issue date: 2015-04-17 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Several studies have shown that adaptive processes are associated with genetic variability found in regions of repetitive DNAs, and this genomic portion may be largely responsible for the adaptability of amazonian fishes in several natural and anthropogenic aquatic environments. Hoplosternum littorale, known as tamoatá fish, is found in polluted and unpolluted environments as in rivers, streams and floodplains, which is showing its great adaptability. Thus, the main goal of this work has been mapped DNAs repetitive sequences in mitotic chromosomes and micronuclei as like as differential banding and to measure the possibility of genotoxic actions of these environments. Seventy-two individuals were collected for micronuclei analysis which were 16 from Catalão lake and 16 from Marchantaria lake; these environments were chosen because they presented a large parcel of water which contribute to not display detectable chemical pollutants. Still, 25 from Mindu stream and 15 from Quarenta stream were identified as most critical points of environmental pollution in Manaus, Amazonas. Were cytogenetically analyzed 40 individuals to the total, which five males and five females from each locality. Mitotic chromosomes were obtained from kidney cells, detection of heterochromatin by action of barium hydroxide and nucleolus organizer regions (NORs) by silver nitrate stain. Fluorescent in situ hybridization (FISH) was performed with 18S rDNA probes, 5S rDNA Rex 3 and telomeric sequences. Both individuals of polluted and unpolluted environments had diploid number as 2n= 60 chromosomes (4m + 4sm + 52a). Simple NORs were localized in the short arms of pair 5 which is in the same localization of 18 rDNA sites. However, 5S rDNA sites were localized in pericentromeric regions of the pairs 23 and 27 with a fifth additional mark in interstitial region of one of homologue pair 8 for individuals from unpolluted environments. Interstitial telomeric sites were not showed. As to as heterochromatin markings were found in the centromeric region, and pericentromeric terminal of the chromosomes with more conspicuous blocks in individuals from polluted environment. As for heterochromatin, markings were found in the centromeric region, and pericentromeric terminal of the chromosomes, with more conspicuous blocks in individuals of polluted environment. The retroelement Rex 3 showed dispersed up in the chromosomes of individuals from unpolluted environment and compartmentalized in individuals from polluted environment. The micronucleus test revealed no significant differences in comparisons pair-to-pair between environments and sampling locations. The mapping of repetitive DNA sequences revealed that the micronuclei have differential composition, intra and inter individuals. These data indicate that the environment
is promoting a differential genome organization, where different portions are lost in micronucleus formation and there is no single fragile region suffering breaks, although involving of repetitive DNA elements in this process. / Diversos estudos demonstram que processos adaptativos estão relacionados com a variabilidade genética encontrada em regiões de DNAs repetitivos, e que esta porção genômica seja a grande responsável pela adaptabilidade de peixes amazônicos nos diversos ambientes aquáticos, tanto naturais quanto antropizados. Hoplosternum littorale, conhecido como tamoatá é encontrado em rios, igarapés e áreas de inundação, tanto em ambiente poluído quanto não poluído, mostrando grande capacidade de adaptação. Assim, o objetivo do trabalho foi mapear sequências repetitivas de DNA em cromossomos mitóticos e em micronúcleos, bem como os bandeamentos diferenciais e a avaliar a possível ação genotóxica destes ambientes. Setenta e dois indivíduos foram coletados para análise de micronúcleos, sendo 16 do lago Catalão e 16 do lago da Marchantaria, sendo estes ambientes escolhidos por apresentar um grande volume de água, o que contribui para não apresentar poluentes químicos detectáveis. Ainda, 25 no igarapé do Mindu e 15 no igarapé do Quarenta apontados como pontos mais críticos de poluição ambiental em Manaus, AM. Foram analisados citogeneticamente 40 exemplares ao total, sendo amostrados cinco machos e cinco fêmeas de cada localidade. Os cromossomos mitóticos foram obtidos a partir de células renais, a detecção de heterocromatina pela ação do hidróxido de bário e as regiões organizadoras de nucléolo (RONs) por meio da impregnação com nitrato de prata. A técnica de hibridização in situ por fluorescência (FISH) foi efetuada utilizando sondas de DNAr 18S, DNAr 5S, Rex 3 e sequências teloméricas. Tanto para os exemplares de ambiente poluído quanto não poluído o número diploide foi de 2n = 60 cromossomos (4m + 4sm + 52a). RON simples foram localizadas nos braços curtos do par 5, coincidentes com sítios de DNAr 18S. Já os sítios de DNAr 5S foram localizados na região pericentromérica dos pares 23 e 27, com uma quinta marcação adicional evidenciada na região intersticial de um dos homólogos do par 8 para indivíduos de ambiente não poluído. Sítios teloméricos intersticiais não foram evidenciados. Quanto à heterocromatina, foram encontradas marcações na região centromérica, pericentromérica e terminal dos cromossomos, com blocos mais conspícuos em indivíduos do ambiente poluído. O retroelemento Rex 3 apresentou-se disperso nos cromossomos dos indivíduos de ambiente não poluído e compartimentalizado nos indivíduos de ambiente poluído. O teste do micronúcleo não revelou diferenças significativas nas comparações par a par entre os ambientes e entre os locais de coleta. O mapeamento de sequências repetitivas de DNA revelou que os micronúcleos possuem composição diferencial, intra e interindividualmente. Estes dados indicam que o ambiente está promovendo uma organização diferencial do genoma, onde diferentes porções são perdidas na formação de micronúcleos e não há uma única região frágil que sofre quebras, apesar de elementos repetitivos de DNA estarem envolvidos neste processo.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4084 |
| Date | 17 April 2015 |
| Creators | Silva, Francijara Araújo da |
| Contributors | Gross, Maria Claudia, Schneider, Carlos Henrique |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 3867939861266202433, 600 |
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