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Previous issue date: 2012-01-27 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / In the northern Brazil, especially in the states of Amazonas and Pará, there is a high
incidence of gastric cancer which available treatments are ineffective in most cases.
The biflorin, a prenylated ortanaftoquinona obtained from the roots of Capraria biflora L.,
showed, in previous studies, an inhibition of the tumor growth in vivo and in vitro in
several cell lines, without inducing mutagenicity. The ACP02, main cell line used in this
work, was established from a primary diffuse gastric adenocarcinoma, removed from
the stomach cardia region of a 66-year-old pacient born in Pará. Among the main
karyotypes and genetic changes of this lineage are the trisomy of chromosome 8, with
amplification of the MYC oncogene, and the deletion of the chromosome 17’s short
arm, where the tumor suppressor gene TP53 is located. These characteristics observed
in the established line correspond to those observed in the original tumor, what
indicates that this line is a good alternative to the study of the human gastric cancer
pathophysiology and the drug screening. Considering biflorin’s promising potencial and
the necessity to regionalize the study of new anticancer drugs to answer genotype
particularities of each group of patients, we evaluated the activity of biflorin on ACP02
through the morphological cell analysis, the cell viability assays, the clonogenic assay,
scratch assay, the cell differentiation test by NBT, the evaluation of the MYC status and
telomere length by FISH, in 0, 1.0, 2.5 and 5.0 M concentrations, after 24 and 72 hours
of treatment. The morphological changes indicate cell death by necrosis, and suggest
the occurrence of the differentiation process, due to change in the format of the
attached cell. The biflorin showed a cytotoxic activity (IC50 1.92 M) and cytostatic,
anticlonogenic and antimotility activities, statistically significant (p<0,05) since 1 M.
There was a significant reduction in MYC amplification rate in cells treated with 2.5 e 5
M of the drug (p<0,05), which can explain the occurrence of cellular differentiation
process, in view of the physiological role of this gene. This differentiation was confirmed
by the results obtained during the NBT test, in which the cells showed the ability to
metabolize salt from a treatment of 1.0 M. The telomere length was reduced in cells
treated with 5.0 M of biflorina (p<0,05). These results showed that biflorin acts on
important targets of anticancer therapy, when used on the gastric line ACP02, at
concentrations around 2.5 M, which makes it a promising substance for the treatment
of this tumor type. / No norte do Brasil, sobretudo nos Estados do Amazonas e Pará, há alta incidência de
câncer gástrico, cujos tratamentos disponíveis são ineficazes, na maioria dos casos. A
biflorina, uma ortonaftoquinona prenilada obtida das raízes de Capraria biflora L.,
demonstrou, em trabalhos prévios, inibir o crescimento tumoral in vivo e in vitro de
várias linhagens celulares, sem induzir mutagenicidade. A ACP02, principal linhagem
celular utilizada nesse trabalho, foi estabelecida a partir de um adenocarcinoma
gástrico difuso primário, retirado da região cárdia estomacal de um paciente de 66 anos
oriundo do Pará. Entre as principais alterações cariotípicas e genéticas dessa linhagem
estão a trissomia do cromossomo 8, com amplificação do oncogene MYC, e a deleção
do braço curto do cromossomo 17, onde estaria localizado o gene supressor de tumor
TP53. Essas características observadas na linhagem estabelecida correspondem
àquelas observadas no tumor que a deu origem, evidenciando que tal linhagem é uma
boa alternativa para o estudo da fisiopatologia do câncer gástrico humano e triagem de
drogas. Tendo em vista o potencial promissor da biflorina e a necessidade de
regionalizar o estudo de novas drogas anticâncer para atender as particularidades
genotípicas de cada grupo de pacientes, avaliamos a atividade da biflorina sobre
ACP02 através da análise morfológica das células, dos ensaios de viabilidade celular,
do ensaio clonogênico, do teste de motilidade, do teste de diferenciação celular pelo
NBT e da avaliação do status de MYC e comprimento dos telômeros por FISH, nas
concentrações de 0, 1,0, 2,5 e 5 M, após 24 e 72h de tratamento. As alterações
morfológicas indicaram morte celular por necrose, além de sugerirem a ocorrência de
processo de diferenciação, devido à alteração no formato da célula aderida. A biflorina
apresentou atividade citotóxica (CI50 1,92 M) e atividades citostática, anticlonogênica
e inibidora da motilidade in vitro, estatisticamente significativas (p<0,05) desde a
concentração de 1 M. Houve redução significativa da taxa de amplificação de MYC,
nas células tratadas com 2,5 e 5,0 M da droga (p<0,05), o que pode justificar a
ocorrência de processo de diferenciação celular, tendo em vista o papel fisiológico
desse gene. Essa diferenciação foi confirmada pelos resultados obtidos durante o teste
do NBT, no qual as células apresentaram capacidade de metabolizar o sal a partir do
tratamento de 1,0 M. O comprimento do telômero foi reduzido nas células tratadas
com 5,0 M de biflorina (p<0,05). Esses resultados demonstram que a biflorina atua
sobre importantes alvos da terapia anticâncer, quando utilizada sobre a linhagem
gástrica ACP02 em concentrações em torno de 2,5 M, o que a torna uma substância
promissora para o tratamento desse tipo de tumor.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4773 |
| Date | 27 January 2012 |
| Creators | Barbosa, Gleyce dos Santos |
| Contributors | Vasconcellos, Marne Carvalho de, Montenegro, Raquel Carvalho |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-graduação em Ciências Farmacêuticas, UFAM, Brasil, Faculdade de Ciências Farmacêuticas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -1934352539977273668, 600 |
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