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Previous issue date: 2013-08-09 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Antisense oligonucleotides have great potential for use as therapeutic agents. The DNAzymes
10-23 are antisense molecules with improved chemical stability and catalytic efficiency. This
work developed a system for DNAzymes expression regulated by two promoters built within
a phagemid, which was called pDESCP. The expression of MoMuLV-RT enzyme occurs in a
constitutively way through the pA1 promoter. The second cassette, regulated by the lac
promoter, expresses an RNA transcript that will give origin at DNAzyme. MoMuLV-RT will
act on the RNA substrate, and then DNAzymes are produced by reverse transcription. The
DNAzyme ftsZ, used to validate this system, was efficiently expressed and able to change the
morphology of Escherichia coli, which went from bacillary to filamentous form. When
properly packaged by M13 phage, pDESCP was used to transfect different strains of E. coli
F+. In vitro kinetic assays involving DNAzymes with target on transcripts of alanine
racemase genes of E. coli, alr e dadX, showed no conclusive results. This made it impossible
for these were tested on the phagemid. The forwarding of pDESCP for E. coli F+ and the
possibility of inserting new DNAzymes in its structure make this phagemid an important
prototype for phage therapy. Provided that lethal DNAzymes are developed against E. coli,
these can be inserted into pDESCP and turn it into a powerful tool able to prevent the
transmission of pathogenic genes from bacteria that transfer by conjugation / Os oligonucleotídeos antissenso apresentam grande potencial para serem utilizados como
agentes terapêuticos. As DNAzimas 10-23 são as moléculas antissenso com maior
estabilidade química e eficiência catalítica. Neste trabalho foi desenvolvido um sistema para
a expressão de DNAzimas regulado por dois promotores, construído dentro de um fagomídeo
que foi denominado pDESCP. A expressão da enzima MoMuLV-RT ocorre de forma
constitutiva, por meio do promotor pA1. O segundo cassete, regulado pelo promotor lac,
expressa um transcrito de RNA que originará a DNAzima. MoMuLV-RT atuará sobre o
substrato de RNA, produzindo DNAzimas por meio da transcrição reversa. A DNAzima ftsZ,
utilizada para validar esse sistema, foi eficientemente expressa e capaz de alterar a
morfologia de Escherichia coli, que passou da forma bacilar para a filamentosa. Quando
devidamente encapsidado pelo fago M13, pDESCP foi utilizado para transfectar diferentes
linhagens E. coli F+. Ensaios cinéticos in vitro envolvendo DNAzimas com alvo sobre os
transcritos dos genes de alanina racemase de E. coli, alr e dadX, não demonstraram
resultados conclusivos. Isto impossibilitou que estas fossem testadas no fagomídeo. A
veiculação de pDESCP para E. coli F+ e a possibilidade de inserção de novas DNAzimas em
sua estrutura transformam este fagomídeo em um importante protótipo para a fagotarapia. Na
condição de que DNAzimas letais sejam desenvolvidas contra E. coli, estas podem ser
inseridas em pDESCP e transformá-lo em uma poderosa ferramenta capaz de impedir a
transmissão de genes de patogenicidade, a partir de bactérias conjugativas.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/4921 |
| Date | 09 August 2013 |
| Creators | Oliveira, Hugo Valério Corrêa de |
| Contributors | Andrade, Edmar Vaz de |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 600, 1984485651082134923 |
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