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Previous issue date: 2016-11-18 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Shigella sp. is responsible for one of the leading causes of child morbidity and mortality,
especially in developing countries. Infection by this bacterium is known as shigellosis or
bacillary dysentery, a highly contagious inflammatory diarrhea. Antibiotic therapy against
shigellosis has become a challenge due to the increasing resistance to antibiotics presented by
clinical isolates. Thus, immunoprophylaxis directed towards the development of vaccines has
become a priority for the World Health Organization in the fight against shigellosis.
Considering the need to develop new vaccination strategies for the control of shigellosis and
the absence of a licensed and safe vaccine, the present work proposed to identify B cell
epitopes of the OmpA and FimH proteins of Shigella flexneri with immunogenic potential,
using in silico analyzes for the prediction, besides evaluating the humoral response of mice
immunized with synthetic peptides that mimic these epitopes. Through the IEDB program, 11
epitopes (5 for OmpA and 6 for FimH) were predicted and the corresponding peptides were
synthesized. The 3D structure of these antigens was also constructed to facilitate the
prediction of epitopes. Peptides that reacted to the anti-Shigella antiserum were selected for
immunization of immunocompetent mice. The anti-peptide antisera P1 (positive control), P2,
P3 and P4 were produced and tested against 13 wild isolates of Shigella flexneri, and showed
92.3% (12/13) of recognition by the corresponding epitope in the native protein present in the
strains Tested. The most immunodominant epitope was P2 with a statistically significant
result (P <0.0422), when the level of recognition of P2 was compared with P1, significant
differences were also observed (P <0.0155). The P4 epitope was the second immunodominant
epitope and is located in one of the loops on the surface of the OmpA, whereas the P2 epitope
which was the most immunodominant is located in the globular domain in the periplasmic
space. However, the antibodies produced against the P2 and P4 peptides were able to
recognize wild isolates of S. flexneri, this result makes it possible to infer that these peptides
have potential for a vaccine candidate. / Shigella sp. é responsável por uma das principais causas de morbidade e mortalidade infantil,
especialmente em países em desenvolvimento. A infecção por esta bactéria é conhecida como
shigelose ou disenteria bacilar, uma diarreia inflamatória altamente contagiosa. A
antibioticoterapia contra shigelose tem se tornado um desafio devido à crescente resistência
aos antibióticos apresentada pelos isolados clínicos. Dessa maneira, a imunoprofilaxia
direcionada para o desenvolvimento de vacinas tem se tornado prioridade pela Organização
Mundial de Saúde no combate a shigelose. Considerando a necessidade de desenvolver novas
estratégias de vacinação para o controle da shigelose, uma vez que ainda não existe uma
vacina licenciada segura e eficaz, o presente trabalho objetivou identificar epitopos de célula
B das proteínas OmpA e FimH de Shigella flexneri com potencial imunogênico, utilizando de
análises in silico para a predição, além de avaliar a resposta humoral de camundongos
imunizados com peptídeos sintéticos que imitam estes epitopos. Através do programa IEDB
foram preditas 11 epitopos (5 para OmpA e 6 para FimH) e os peptídeos correspondentes
foram sintetizados. A estrutura 3D desses antígenos também foi construída para facilitar a
predição dos epitopos. Os peptídeos que reagiram ao antissoro anti-Shigella, foram
selecionados para imunização de camundongos imunocompetentes. Os antissoros antipeptídeos
P1 (controle positivo), P2, P3 e P4 foram produzidos e testados contra 13 isolados
selvagens de Shigella flexneri, e apresentaram 92,3% (12/13) de reconhecimento pelo epitopo
correspondente na proteína nativa presente nas cepas testadas. O epitopo mais
imunodominante foi o P2 com resultado estatisticamente significativo (P<0,0422), quando o
nível de reconhecimento de P2 foi comparado com P1, diferenças significativas também
foram observadas (P<0,0155). O epitopo P4 foi o segundo epitopo imunodominante e está
localizado em uma das alças na superfície da OmpA, enquanto o epitopo P2 que foi o mais
imunodominante está localizado no domínio globular no espaço periplasmático. Entretanto, os
anticorpos produzidos contra os peptídeos P2 e P4 foram capazes de reconhecer os isolados
selvagens de S. flexneri, este resultado possibilita inferir que esses peptídeos possuem
potencial para um candidato a vacina.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:http://localhost:tede/5968 |
| Date | 18 November 2016 |
| Creators | Pardo, Mayana Cristina da Silva, 92-98238-7650 |
| Contributors | ppgbiotec@ufam.edu.br, Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi |
| Publisher | Universidade Federal do Amazonas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, UFAM, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFAM, instname:Universidade Federal do Amazonas, instacron:UFAM |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/embargoedAccess |
| Relation | 32215883775770440, 600, 500, 461231695918095045 |
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