Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-08T16:45:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1089558 bytes, checksum: 71f90b61d1b8e5726e713eaa43b87a19 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T16:45:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1089558 bytes, checksum: 71f90b61d1b8e5726e713eaa43b87a19 (MD5) Previous issue date: 2005-11-18 / Bovinos da raça holandesa entre 3-4 meses de idade receberam quatro imunizações subcutâneas com o peptídeo sintético SBbo23290 anti-Babesia bovis mais saponina, e foram desafiados com amostra virulenta de B. bovis, sendo avaliados quanto ao desenvolvimento da resposta imune celular. Para isso, foi determinado o perfil de linfócitos circulantes (CD4 + , CD8 + , CD21 + e WC1 + ) por citometria de fluxo e seguimento dos eventos microscópicos ocorridos em linfonodos através de técnicas diferenciais (Hematoxilina & Eosina e Verde Metil Pironina) e de imunohistoquímica (Peroxidase anti-peroxidase). Os estudos histológicos mostraram reatividade evidente de centros germinativos a partir do quinto dia após a primeira imunização. A hiperplasia dos cordões medulares foi mais evidente aos três dias após a terceira imunização. O antígeno SBbo23290 foi detectado em células SBbo23290 positivas durante todo o experimento, concomitantemente às alterações histológicas em órgãos linfóides. Quando foi determinada a composição fenotípica dos linfócitos de sangue periférico circulantes, observou-se no grupo peptídeo um aumento progressivo de linfócitos WC1+ até os sete dias após a segunda coleta, que decaiu ligeiramente após a terceira inoculação, aumentando novamente após o desafio com a amostra virulenta de B. bovis, o que não aconteceu com os demais grupos experimentais, havendo diferença estatística entre os grupos. Os linfócitos CD4 + e CD21 + decresceram após a primeira inoculação, aumentando após a segunda inoculação, e decaindo nas demais coletas, havendo diferença estatística entre os grupos. A porcentagem de linfócitos T totais no grupo peptídeo foi superior aos demais grupos durante quase todo o experimento, sendo que a maior porcentagem foi obtida após a segunda coleta, não havendo diferença estatística entre os grupos nas diferentes coletas. Sendo assim, pode-se concluir que o peptídeo sintético induz de maneira eficaz uma resposta imunológica antígeno- específica, na qual encontram-se envolvidos mecanismos celulares e humorais. / Tree-four month old bovines of the Holstein Freesan breed received four under–skin immunization of the synthetic peptideo 23290 anti-Babesia bovis plus saponina. They were challenged with an virulent sample of B. bovis and they were evaluated considering the development of the cellular immune answer through identification of CD4 + , CD8 + , CD21 + , and WC1 + T lymphocytes by flow citometry and microscopic evaluation of lymph nodes using the techniques H&E and Pironin Methil Green, such as PAP. The lymphonodes analysis demonstrated germinal centers reactivity at the 5 th day after the first immunization. Medullars cords hyperplasia was more evident three days after the third immunization. SBbo32290 antigen was detected in SBbo23290 positive cells during whole experiment, and simultaneous to the histology alterations in lymphonodes. Evaluating phenotypic composition of the peripheral blood lymphocytes, a progressive increase of WC1 + lymphocytes was detected, which decreased after third immunization, and an increment was observed again after the challenge. It was not observed in the another experimental groups. The CD4 + and CD21 + lymphocytes decreased after first immunization, increased after the second immunization, and decreased again in the following immunizations; the variation was statistically significant between the groups. The variation in total number of lymphocytes wasn’t statistically significant, although an increment of this cells was observed in the peptide group xvalmost whole experiment, comparing with the another groups. We can conclude that the syntetic peptideo induct an effective immunological specific-antigen answer, in with cellular and humoral mechanisms were involved.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T15:48:16Z No. of bitstreams: 3 Dissertação Parcial - Mayana Cristina S. Pardo.pdf: 2758393 bytes, checksum: 9b78b369931f18a430b77faca7be9c89 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-10-18T15:48:43Z (GMT) No. of bitstreams: 3 Dissertação Parcial - Mayana Cristina S. Pardo.pdf: 2758393 bytes, checksum: 9b78b369931f18a430b77faca7be9c89 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-18T15:48:43Z (GMT). No. of bitstreams: 3 Dissertação Parcial - Mayana Cristina S. Pardo.pdf: 2758393 bytes, checksum: 9b78b369931f18a430b77faca7be9c89 (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Shigella sp. is responsible for one of the leading causes of child morbidity and mortality, especially in developing countries. Infection by this bacterium is known as shigellosis or bacillary dysentery, a highly contagious inflammatory diarrhea. Antibiotic therapy against shigellosis has become a challenge due to the increasing resistance to antibiotics presented by clinical isolates. Thus, immunoprophylaxis directed towards the development of vaccines has become a priority for the World Health Organization in the fight against shigellosis. Considering the need to develop new vaccination strategies for the control of shigellosis and the absence of a licensed and safe vaccine, the present work proposed to identify B cell epitopes of the OmpA and FimH proteins of Shigella flexneri with immunogenic potential, using in silico analyzes for the prediction, besides evaluating the humoral response of mice immunized with synthetic peptides that mimic these epitopes. Through the IEDB program, 11 epitopes (5 for OmpA and 6 for FimH) were predicted and the corresponding peptides were synthesized. The 3D structure of these antigens was also constructed to facilitate the prediction of epitopes. Peptides that reacted to the anti-Shigella antiserum were selected for immunization of immunocompetent mice. The anti-peptide antisera P1 (positive control), P2, P3 and P4 were produced and tested against 13 wild isolates of Shigella flexneri, and showed 92.3% (12/13) of recognition by the corresponding epitope in the native protein present in the strains Tested. The most immunodominant epitope was P2 with a statistically significant result (P <0.0422), when the level of recognition of P2 was compared with P1, significant differences were also observed (P <0.0155). The P4 epitope was the second immunodominant epitope and is located in one of the loops on the surface of the OmpA, whereas the P2 epitope which was the most immunodominant is located in the globular domain in the periplasmic space. However, the antibodies produced against the P2 and P4 peptides were able to recognize wild isolates of S. flexneri, this result makes it possible to infer that these peptides have potential for a vaccine candidate. / Shigella sp. é responsável por uma das principais causas de morbidade e mortalidade infantil, especialmente em países em desenvolvimento. A infecção por esta bactéria é conhecida como shigelose ou disenteria bacilar, uma diarreia inflamatória altamente contagiosa. A antibioticoterapia contra shigelose tem se tornado um desafio devido à crescente resistência aos antibióticos apresentada pelos isolados clínicos. Dessa maneira, a imunoprofilaxia direcionada para o desenvolvimento de vacinas tem se tornado prioridade pela Organização Mundial de Saúde no combate a shigelose. Considerando a necessidade de desenvolver novas estratégias de vacinação para o controle da shigelose, uma vez que ainda não existe uma vacina licenciada segura e eficaz, o presente trabalho objetivou identificar epitopos de célula B das proteínas OmpA e FimH de Shigella flexneri com potencial imunogênico, utilizando de análises in silico para a predição, além de avaliar a resposta humoral de camundongos imunizados com peptídeos sintéticos que imitam estes epitopos. Através do programa IEDB foram preditas 11 epitopos (5 para OmpA e 6 para FimH) e os peptídeos correspondentes foram sintetizados. A estrutura 3D desses antígenos também foi construída para facilitar a predição dos epitopos. Os peptídeos que reagiram ao antissoro anti-Shigella, foram selecionados para imunização de camundongos imunocompetentes. Os antissoros antipeptídeos P1 (controle positivo), P2, P3 e P4 foram produzidos e testados contra 13 isolados selvagens de Shigella flexneri, e apresentaram 92,3% (12/13) de reconhecimento pelo epitopo correspondente na proteína nativa presente nas cepas testadas. O epitopo mais imunodominante foi o P2 com resultado estatisticamente significativo (P<0,0422), quando o nível de reconhecimento de P2 foi comparado com P1, diferenças significativas também foram observadas (P<0,0155). O epitopo P4 foi o segundo epitopo imunodominante e está localizado em uma das alças na superfície da OmpA, enquanto o epitopo P2 que foi o mais imunodominante está localizado no domínio globular no espaço periplasmático. Entretanto, os anticorpos produzidos contra os peptídeos P2 e P4 foram capazes de reconhecer os isolados selvagens de S. flexneri, este resultado possibilita inferir que esses peptídeos possuem potencial para um candidato a vacina.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-17T12:18:04Z No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DissertaçãoParcial (Int.,Rev.,Just.) - Aline Souza - PPGBIOTEC.pdf: 996817 bytes, checksum: ab2d84012767909adcae12c010d3c2ea (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-17T12:18:29Z (GMT) No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DissertaçãoParcial (Int.,Rev.,Just.) - Aline Souza - PPGBIOTEC.pdf: 996817 bytes, checksum: ab2d84012767909adcae12c010d3c2ea (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-17T12:18:29Z (GMT). No. of bitstreams: 3 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DissertaçãoParcial (Int.,Rev.,Just.) - Aline Souza - PPGBIOTEC.pdf: 996817 bytes, checksum: ab2d84012767909adcae12c010d3c2ea (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2018-05-15 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Shigellosis is a diarrheal disease that mainly affects children under 5, caused by a Gram-negative and enteroinvasive bacterium called Shigella. Mice are among the most commonly used animal models for assessing the immune response of this pathogen, due to their similarity to intestinal responses when they are subjected to infection. As no shigellosis vaccine is available yet, synthetic peptide vaccines are proposed as an alternative, which are produced from amino acid sequences of bacterial proteins and are synthesized in the laboratory. Thus, this study aimed to immunize mice from the BALB/c line through the intraperitoneal route with synthetic peptides that were designed from immunodominant epitopes of the outer membrane surface proteins of Shigella spp., called OmpC, OmpA and FimH, and then subjected them to challenge infection with a lethal dose of a virulent bacterial strain - S. flexneri 5a M90T, to estimate the protective capacity of the peptides, thus simulating the idea of a vaccine. The production of anti-peptide antibodies was analyzed by means of the Indirect ELISA immunoenzymatic assay, and the evaluation of the recognition of these antibodies in the native proteins present in the Shigella species was performed by Flow Cytometry. After challenge infection, the mice were observed for weight and survival, and the post-challenge cytokine secretion pattern was assessed by CBA (Cytometric Bead Array). The results demonstrated that all groups of peptides tested showed to be immunogenic in the first step of immunization with them in mice, as well as recognition of the antibodies in S. flexneri, S. boydii and S. dysenteriae proteins before and after challenge with M90T. All mice belonging to the selected peptide groups survived after the challenging infection, but the mice in the Peptide 1 and Pool- groups did not recover the initial weight. The peptide 2 group stood out among the others in the evaluation of the post-challenge cytokines by the equilibrium observed among them, thus suggesting a regulation of the immune system of the mice. Thus, among all the peptides tested in this study, P2 is indicated as the most effective in the intraperitoneal route, because it has been shown to be both immunogenic and an effective protector in Shigella infection, which favors it being a good vaccine candidate for shigellosis. / Shigelose é uma doença diarreica que afeta principalmente crianças menores de 5 anos, causada por uma bactéria Gram-negativa e enteroinvasiva denominada Shigella. Os camundongos estão entre os modelos de animais utilizados mais comuns para avaliação da resposta imune desse patógeno, devido sua similaridade com as respostas intestinais quando são submetidos à infecção. Como não está disponível ainda nenhuma vacina contra shigelose, propõe-se como alternativa as vacinas de peptídeos sintéticos, que são produzidas a partir de sequências de aminoácidos de proteínas da bactéria e são sintetizadas em laboratório. Assim, este estudo objetivou imunizar camundongos da linhagem BALB/c pela via intraperitoneal com peptídeos sintéticos que foram desenhados a partir de epítopos imunodominantes das proteínas de superfície da membrana externa de Shigella spp., denominadas OmpC, OmpA e FimH, e posteriormente submetê-los a infecção desafio com uma dose letal de uma cepa virulenta da bactéria – a S. flexneri 5a M90T, para estimar a capacidade de proteção dos peptídeos, simulando assim a idéia de uma vacina. A produção de anticorpos anti-peptídeos foi analisada por meio do teste imunoenzimático ELISA Indireto, e a avaliação do reconhecimento desses anticorpos nas proteínas nativas presentes nas espécies de Shigella foi realizada por Citometria de Fluxo. Após a infecção desafio, os camundongos foram observados em relação ao peso e sobrevivência, e o padrão de secreção de citocinas pós-desafio foi avaliado por CBA (Cytometric Bead Array). Os resultados demonstraram que todos os grupos de peptídeos testados demonstraram ser imunogênicos na primeira etapa de imunização com eles nos camundongos, assim como houve reconhecimento dos anticorpos nas proteínas de S. flexneri, S. boydii e S. dysenteriae antes e após o desafio com a M90T. Todos os camundongos pertencentes aos grupos de peptídeos selecionados sobreviveram após a infecção desafio, porém os camundongos dos grupos do peptídeo 1 e do Pool- não conseguiram a recuperação do peso inicial. O grupo do peptídeo 2 se destacou entre os demais na avaliação das citocinas pós-desafio pelo equilíbrio observado entre elas, sugerindo assim uma regulação do sistema imune dos camundongos. Assim, entre todos os peptídeos testados neste trabalho, indica-se o P2 como o mais efetivo na via intraperitoneal, por ter demonstrado ser tanto imunogênico como um protetor eficaz na infecção por Shigella, o que favorece que ele seja um bom candidato vacinal para shigelose.

Baseado nos algoritmos de hidrofilicidade e flexibilidade obtidos pelo uso do \"software\" ProtScale, acessível no endereço http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, foram selecionados sete peptídeos, potencialmente antigênicos, das proteínas de Schistosoma mansoni, entre elas, catepsina B (Sm 31), \"heat shock protein\" de 70 kDa (HSPSm-70), \"cathodic circulating antigen\" (CCA), e uma seqüência da fase de leitura aberta do clone ET03. Estes peptídeos, produzidos por síntese química, foram denominados P1, P2, P3, P4, P5, P6 e P7. Em seguida, os peptídeos foram testados isoladamente contra \"pool\" de soros humanos positivos e negativos. Após vários testes, os peptídeos P1, P2, P3, P6 e P7, que apresentaram imunorreatividade quando ensaiados por método imunoenzimático, foram usados na padronização de um método imunoenzimático de ELISA, utilizando placas Costar 3590, que passou a ser denominado ELISA-Peptídeo (ELISA-Pp). Este método foi avaliado empregando-se 192 amostras de soro, divididas em quatro grupos: (A) 23 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Nordeste do Brasil, portadores de esquistossomose aguda, com ovos de S. mansoni nas fezes; (B) 30 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Norte do Brasil, portadores de esquistossomose crônica, com ovos de S. mansoni nas fezes; (C) 39 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes no Norte do Brasil, portadores de outras parasitoses, mas não esquistossomose; (D) 100 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes em Campinas-SP, negativos pelo exame coproparasitológico. Os resultados obtidos foram analisados comparativamente com os encontrados por outras metodologias imunodiagnósticas: reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos IgM contra tubo digestivo de verme (RIF-IgM), método imunoenzimático para detecção de anticorpos IgM contra antígenos polissacarídeos (ELISA-IgM) ou anticorpos IgG contra extrato total de vermes (ELISA-IgG). A sensibilidade do ELISA-Pp foi de 86,6%, quando avaliado frente a soros de pacientes que apresentaram ovos de S. mansoni nas fezes e de 79,3%, considerando como esquistossomótico aqueles pacientes com sorologia positiva pelos métodos de RIFI-IgM e ELISA-IgM. A especificidade do ELISA-Pp foi de 94,2% e 94,7%, respectivamente, considerando como grupo controle, não esquistossomótico, indivíduos com resultado de exame parasitológico de fezes negativo para ovos de S. mansoni ou indivíduos com sorologia negativa pelo ELISA-IgM e RIFI-IgM. O valor preditivo positivo apresentado pelo ELISA-Pp foi de 85,2% enquanto para os outros métodos sorológicos variou de 63,4% a 78,6%. O valor preditivo negativo do ELISA-Pp foi em média 3% inferior aos obtidos pelos outros métodos sorológicos. Comparando-se os resultados obtidos pelo ELISA-Pp com os dos outros métodos sorológicos, melhor concordância foi demonstrada com os resultados do ELISA-IgM (Índice Kappa=0,75). Os índices de reatividade para detecção de anticorpos IgG e IgM foram significantemente maiores (P < 0,05) nos pacientes com esquistossomose aguda (grupo A) do que crônica (grupo B). No presente estudo, ELISA-Pp demonstrou bom desempenho (eficácia diagnóstica = 81,0%), entretanto novos estudos são necessários para avaliação de sua aplicabilidade em inquéritos soroepidemiológicos. / Based on algorithms of hidrophilicity and flexibility, obtained by the use of the ProtScale software, disposable at the site http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, seven potentially antigenic peptides were selected from different Schistosoma mansoni proteins: cathepsin B (Sm31), heat shock protein (SmHSP-70), cathodic circulating antigen (CCA) and the polypeptidic sequence of the open reading frame (ORF) of the ET-03 clone. The peptides were produced by chemical synthesis and denominated as P1, P2, P3, P4, P5, P6 and P7. These were independently tested against two pools of human sera, one positive and one negative for schistosomiasis. The peptides P1, P2, P3, P6 and P7, that presented better reactivity when assayed by an immunoenzymatic method, were chosen to be used as antigen for the standardization of an ELISA method, by utilizing Costar 3590 micro plates, and it was called Peptide-ELISA (Pp-ELISA). This method was evaluated on 192 serum samples, divided in four groups: (A) 23 samples from patients with acute schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs in fecal examination, who were living in a Brazilian Northeast state; (B) 30 samples from patients with chronic schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs, who were living in a Brazilian North state; (C) 39 samples from individuals with other parasite infection, but no schistosomiasis, living in a Brazilian North state; (D) 100 samples from clinically healthy individuals who presented negative results for coproparasitologic method, living in Campinas, São Paulo State. The serological data obtained by Pp-ELISA were comparatively analyzed with the results obtained by other immunodiagnostic methods: immunofluorescence test for detection of IgM antibodies against gut associated antigens (IgM-IFT); ELISA for detection of IgM antibodies against gut associated polysaccharide antigens (IgM-ELISA) or for detection of IgG antibodies against worm crude antigens (IgG-ELISA). The sensitivity of Pp-ELISA was of 86,6%, considering as schistossomiasis patients only the ones who presented S. mansoni eggs in stool examination, and 79,3%, when a serological criterion was used for definition of schistosomiaisis patients, with positive results for both IgM-IFT and IgM-ELISA. The specificity of the Pp-ELISA was respectively 94,2% or 94,7%, considering as control group, without schistosomiasis, S. mansoni egg negative individuals in stool examination or serologically negative individuals by both tests, IgM-IFT and IgM-ELISA. The positive predictive value for Pp-ELISA was 85,2%, while for the other serologic methods varied from 63,4% to 78,6%. The negative predictive value for Pp-ELISA was as a rule 3% lower than the indices obtained for other serologic methods. When the results of Pp-ELISA were compared with the ones obtained by other serologic methods, better concordance was demonstrated with IgM-ELISA (Kappa indice = 0,75). The reactivity indices for detection of IgG and IgM antibodies were significantly higher (P < 0,05) in acute (group A) than chronic schistosomiasis patients (group B). In this study the Pp-ELISA presented a good performance (Diagnostic efficacy = 81,0%), however further studies must be necessary for evaluation of its applicability on seroepidemiologic surveys.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-19T13:55:20Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 430274 bytes, checksum: a912ed0418d9449f1aa8723bf53fc623 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-19T13:55:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 430274 bytes, checksum: a912ed0418d9449f1aa8723bf53fc623 (MD5) Previous issue date: 2002-02-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O peptídeo sintético SBm7462 foi avaliado como imunógeno para o controle do carrapato Boophilus microplus em teste misto (estábulo e campo). O estudo se realizou com as doses de 1,0mg e 2,0mg em 30 bovinos da raça holandesa com média de grau de sangue de 91,16% (H/Z), os quais foram mantidos sob o manejo rotineiro no Campo Experimental do Centro Nacional de Pesquisa em Gado de Leite-EMBRAPA/CNPGL em pastos altamente infestados com larvas dessa espécie de carrapato. Os animais foram separados em três grupos: vacinal 2,0mg, vacinal 1,0mg e controle, sendo os grupos vacinais imunizados nos dias 0, 30 e 60 a campo. Foram realizadas a contagem de carrapatos e a coleta de sangue semanalmente, a partir do dia 0. Duas semanas após a terceira inoculação, os animais foram levados para baias individuais e submetidos a uma infestação artificial com um total de 4.500 larvas/animal de B. microplus (amostra “Porto Alegre”). A partir do 19 o dia pós-infestação, foram coletadas as teleóginas desprendidas, contadas, pesadas, identificadas e incubadas em estufa B.O.D. por quinze dias, quando os respectivos ovos foram pesados. A análise da fertilidade desses ovos e a viabilidade das larvas provenientes foram também analisadas. A cinética da produção de anticorpos foi acompanhada através de ELISA, obtendo- se títulos maiores para os grupos vacinais, estatisticamente diferentes do grupo controle (p<0,01). Os parâmetros biológicos foram analisados levando-se em conta o número de teleóginas, peso dos ovos e fertilidade dos ovos. A eficácia foi de 15,8% para a dose de 1,0mg do peptídeo sintético SBm7462 e de 53,29% para 2,0mg, com diferenças estatísticas significativas entre os grupos 1,0mg, 2,0mg e controle (p<0,05). Quanto à avaliação do número de carrapatos a campo, não houve diferença estatística entre os grupos testados. Os resultados obtidos mostram que o peptídeo sintético SBm7462 é uma alternativa viável para o controle do carrapato comum dos bovinos, pela sua eficácia, segurança e baixo custo. / The synthetic peptide SBm7462 was evaluated as immunogen for the control of the tick Boophilus microplus in mixed test (stable and field). The study was done with the quantity of 1,0mg and 2,0mg of the peptide SBm7462 on 30 Holstein female cattles (91,16% H/Z), which were maintained under the routine handling in the experimental field of the Centro Nacional de Pesquisa em Gado de Leite- EMBRAPA/CNPGL on pastures highly infested with larvaes of that tick species. The animals were separate in three groups: vaccinated with 2,0mg, vaccinated with 1,0mg and control, being the vaccinated groups immunized on the days 0, 30 and 60 in field. The count of the adults females ticks and the blood collection were weekly done, starting from the day 0. Two weeks after the third inoculation, the animals were taken to individual stalls and submitted to an artificial infestation with 4.500 larvaes/animal of B. microplus (strain “Porto Alegre”). Starting on the 19 o . day post-infestation, the adult females ticks were collected, counted, identified, weighed and incubated in B.O.D. After 15 days, the respective eggs were weighed. The analysis of the eggs fertility and the viability of the larvaes were also analyzed. The kinetics of the production of antibodies was accompanied through of ELISA, being obtained larger titles for the vaccinated groups with statistic differences to the control group (p < 0,01). The biological parameters were analyzed through of the account the number of adult females ticks, eggs weight and eggs fertility. The efficacy was of 15,8% for the 1,0mg of the synthetic peptide SBm7462 and of 53,29% for the 2,0mg, of the same peptide, with significant statistical differences among the groups 1,0mg, 2,0mg and control (p < 0,05). When compared the number of ticks in field, there was not statistic difference among the tested groups. The obtained results show that the synthetic peptide SBm7462 is a viable alternative for the control of the cattle tick, regarding its efficacy, safety and low cost.

Baseado nos algoritmos de hidrofilicidade e flexibilidade obtidos pelo uso do \"software\" ProtScale, acessível no endereço http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, foram selecionados sete peptídeos, potencialmente antigênicos, das proteínas de Schistosoma mansoni, entre elas, catepsina B (Sm 31), \"heat shock protein\" de 70 kDa (HSPSm-70), \"cathodic circulating antigen\" (CCA), e uma seqüência da fase de leitura aberta do clone ET03. Estes peptídeos, produzidos por síntese química, foram denominados P1, P2, P3, P4, P5, P6 e P7. Em seguida, os peptídeos foram testados isoladamente contra \"pool\" de soros humanos positivos e negativos. Após vários testes, os peptídeos P1, P2, P3, P6 e P7, que apresentaram imunorreatividade quando ensaiados por método imunoenzimático, foram usados na padronização de um método imunoenzimático de ELISA, utilizando placas Costar 3590, que passou a ser denominado ELISA-Peptídeo (ELISA-Pp). Este método foi avaliado empregando-se 192 amostras de soro, divididas em quatro grupos: (A) 23 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Nordeste do Brasil, portadores de esquistossomose aguda, com ovos de S. mansoni nas fezes; (B) 30 amostras de soro, coletadas de pacientes residentes no Norte do Brasil, portadores de esquistossomose crônica, com ovos de S. mansoni nas fezes; (C) 39 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes no Norte do Brasil, portadores de outras parasitoses, mas não esquistossomose; (D) 100 amostras de soro, coletadas de indivíduos residentes em Campinas-SP, negativos pelo exame coproparasitológico. Os resultados obtidos foram analisados comparativamente com os encontrados por outras metodologias imunodiagnósticas: reação de imunofluorescência indireta para detecção de anticorpos IgM contra tubo digestivo de verme (RIF-IgM), método imunoenzimático para detecção de anticorpos IgM contra antígenos polissacarídeos (ELISA-IgM) ou anticorpos IgG contra extrato total de vermes (ELISA-IgG). A sensibilidade do ELISA-Pp foi de 86,6%, quando avaliado frente a soros de pacientes que apresentaram ovos de S. mansoni nas fezes e de 79,3%, considerando como esquistossomótico aqueles pacientes com sorologia positiva pelos métodos de RIFI-IgM e ELISA-IgM. A especificidade do ELISA-Pp foi de 94,2% e 94,7%, respectivamente, considerando como grupo controle, não esquistossomótico, indivíduos com resultado de exame parasitológico de fezes negativo para ovos de S. mansoni ou indivíduos com sorologia negativa pelo ELISA-IgM e RIFI-IgM. O valor preditivo positivo apresentado pelo ELISA-Pp foi de 85,2% enquanto para os outros métodos sorológicos variou de 63,4% a 78,6%. O valor preditivo negativo do ELISA-Pp foi em média 3% inferior aos obtidos pelos outros métodos sorológicos. Comparando-se os resultados obtidos pelo ELISA-Pp com os dos outros métodos sorológicos, melhor concordância foi demonstrada com os resultados do ELISA-IgM (Índice Kappa=0,75). Os índices de reatividade para detecção de anticorpos IgG e IgM foram significantemente maiores (P < 0,05) nos pacientes com esquistossomose aguda (grupo A) do que crônica (grupo B). No presente estudo, ELISA-Pp demonstrou bom desempenho (eficácia diagnóstica = 81,0%), entretanto novos estudos são necessários para avaliação de sua aplicabilidade em inquéritos soroepidemiológicos. / Based on algorithms of hidrophilicity and flexibility, obtained by the use of the ProtScale software, disposable at the site http://au.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl, seven potentially antigenic peptides were selected from different Schistosoma mansoni proteins: cathepsin B (Sm31), heat shock protein (SmHSP-70), cathodic circulating antigen (CCA) and the polypeptidic sequence of the open reading frame (ORF) of the ET-03 clone. The peptides were produced by chemical synthesis and denominated as P1, P2, P3, P4, P5, P6 and P7. These were independently tested against two pools of human sera, one positive and one negative for schistosomiasis. The peptides P1, P2, P3, P6 and P7, that presented better reactivity when assayed by an immunoenzymatic method, were chosen to be used as antigen for the standardization of an ELISA method, by utilizing Costar 3590 micro plates, and it was called Peptide-ELISA (Pp-ELISA). This method was evaluated on 192 serum samples, divided in four groups: (A) 23 samples from patients with acute schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs in fecal examination, who were living in a Brazilian Northeast state; (B) 30 samples from patients with chronic schistosomiasis and positive for S. mansoni eggs, who were living in a Brazilian North state; (C) 39 samples from individuals with other parasite infection, but no schistosomiasis, living in a Brazilian North state; (D) 100 samples from clinically healthy individuals who presented negative results for coproparasitologic method, living in Campinas, São Paulo State. The serological data obtained by Pp-ELISA were comparatively analyzed with the results obtained by other immunodiagnostic methods: immunofluorescence test for detection of IgM antibodies against gut associated antigens (IgM-IFT); ELISA for detection of IgM antibodies against gut associated polysaccharide antigens (IgM-ELISA) or for detection of IgG antibodies against worm crude antigens (IgG-ELISA). The sensitivity of Pp-ELISA was of 86,6%, considering as schistossomiasis patients only the ones who presented S. mansoni eggs in stool examination, and 79,3%, when a serological criterion was used for definition of schistosomiaisis patients, with positive results for both IgM-IFT and IgM-ELISA. The specificity of the Pp-ELISA was respectively 94,2% or 94,7%, considering as control group, without schistosomiasis, S. mansoni egg negative individuals in stool examination or serologically negative individuals by both tests, IgM-IFT and IgM-ELISA. The positive predictive value for Pp-ELISA was 85,2%, while for the other serologic methods varied from 63,4% to 78,6%. The negative predictive value for Pp-ELISA was as a rule 3% lower than the indices obtained for other serologic methods. When the results of Pp-ELISA were compared with the ones obtained by other serologic methods, better concordance was demonstrated with IgM-ELISA (Kappa indice = 0,75). The reactivity indices for detection of IgG and IgM antibodies were significantly higher (P < 0,05) in acute (group A) than chronic schistosomiasis patients (group B). In this study the Pp-ELISA presented a good performance (Diagnostic efficacy = 81,0%), however further studies must be necessary for evaluation of its applicability on seroepidemiologic surveys.

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Silva.pdf: 1665108 bytes, checksum: 8a2eda0da827e922952dbcfec94773cd (MD5) Previous issue date: 2016-11-21 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Escherichia coli (EPEC) was frequent cause of many cases of diarrhea in Brazil and around the world, and one of the main agents responsible for high mortality rates among children aged 0-5 years. EPEC is known to cause histological damage to the microvilli of enterocytes, characterized by the formation of a shaped support ultrastructure. One of the factors responsible for pathogenicity is complex BFP (bundle forming pili). The presence of genes BfpA promotes adhesion and consequently the injury of EPEC strains characterized as typical. Differently, some EPEC strains lack EAF (EPECBfpA-) causing lesions shaped as pedestal, but more slowly, called atypical EPEC. BfpA is known as immunogenic and recently the incidence of atypical (EPECBfpA-) is increasing, it is believed that these bacteria injury occurs through other means making it important to develop strategies for identifying. In this study several predicted peptide sequences were synthesized, to produce polyclonal antibodies and anti-EPEC -BfpA in BALB / c antibodies that are used to target specific identification of typical and atypical EPEC. To achieve the objectives of bioinformatics tools and prediction of protein epitopes immuneepitope B were used for antigenic regions specific mapping for the EPEC two phenotypes. Synthetic peptides were purchased to immunize Balb / C mice, so the antisera are evaluated for specificity EPEC. As results, it was possible to construct and synthetize six linear BfpA peptides (P1-P6). P6 peptide was selected as the product of this study due to its ability to induce the antibodies production against this protein and this serum recognize the native protein in typical EPEC strains. We believe that the functional characterization of these antibodies by developing new tools will help in the diagnosis of these two specific strains of EPEC and will contribute to studies involving these bacteria. / A Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) tem sido causa frequente de muitos casos de diarreia no Brasil e no mundo, além de ser um dos principais agentes responsáveis pelas taxas de mortalidade entre as crianças de 0 a 5 anos de idade. A EPEC causa uma lesão histológica nas microvilosidades dos enterócitos caracterizada pela formação de uma ultraestrutura em forma de pedestal. Um dos fatores de patogenicidade responsável é o complexo BfpA (bundle forming pili). A BfpA promove a adesão das cepas de EPEC denominadas como típicas. Diferentemente, algumas cepas de EPEC são desprovidas do Fator de Aderência de Escherichia coli -EAF (EPECBfpA-) e tendem a provocar as lesões típicas de pedestal com mais lentidão e por isso são denominadas EPEC atípicas. Como a BfpA é uma proteína imunogênica e recentemente a incidência de EPECBfpA- atípicas vem aumentando, acredita-se que a lesão por estas bactérias ocorra por outras vias tornando importante o desenvolvimento de estratégias para sua identificação. Neste estudo várias sequências antigenicamente preditas foram usadas para sintetizar peptídeos a fim de produzir anticorpos policlonais anti-BfpA em camundongos BALB/c visando a identificação específica da EPEC típica. Para alcançar os objetivos, inicialmente ferramentas de bioinformática de proteínas e de predição de epítopos B foram utilizadas para mapeamento de regiões antigênicas específicas para EPEC. Peptídeos sintéticos foram adquiridos para a imunização de camundongos Balb/c, afim de que antissoros fossem avaliados quanto a especificidade à EPEC. Como resultados foi possível a construção e síntese de seis peptídeos lineares de BfpA (P1-P6). O peptídeo P6 foi selecionado como produto deste estudo devido a habilidade de induzir a produção de anticorpos contra esta proteína e este soro reconhecer a proteína nativa em cepas de EPEC típica. Acredita-se que a caracterização funcional destes anticorpos permita o desenvolvimento de ferramentas para o diagnóstico específico das duas linhagens de EPEC visando a contribuição para estudos futuros sobre o controle do processo fisiopatológico no intestino.

A paracoccidioidomicose (PCM), doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica na América Latina e atinge principalmente indivíduos do sexo masculino com atividades econômica ligada a agricultura. Os pacientes com PCM exigem tratamento a base de sulfametoxazol/trimetoprim, anfotericina B, e derivados azólicos por longos períodos. A gp43, possui 416 aminoácidos, onde um trecho específico de 15 aminoácidos (QTLIAIHTLAIRYAN) designado como (P10), é reconhecido pelos linfócitos T de camundongos e humanos. No presente estudo avaliamos o efeito aditivo da imunização do P10 com às drogas antifúngicas utilizadas no tratamento da PCM. Nossos resultados indicam um efeito aditivo entre a imunização com P10 e o tratamento medicamentoso em camundongos Balb/c infectados. Associado a redução significativa da carga fúngica no pulmão, baço e fígado desses animais, detectamos aumento dos níveis de IL-12 e IFN-? e diminuição de IL-4 e IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by Paracoccidioides brasiliensis, a thermal dimorphic fungus. PCM is endemic in Latin America affecting mainly rural workers. The patients with PCM demand treatment the base of sulfametoxazole/trimethoprim, amphotericin B and derivatives azolic. The gp43 has 416-mer and mice and human T lymphocytes are stimulated by a 15-mer peptide designated as P10 (QTLIAIHTLAIRYAN). In the present work we evaluated the additive effect of P10 immunization and antifungal drugs utilizing in PCM treatment. Ours results showed an additive protective effect between immunization with P10 and drugs treatment with infected Balb/c mice. Associated to the reduction of fungal burden in the lung, spleen and liver we observed increase of levels of IL-12 and IFN-? and reduction of IL-4 and IL-10.

A paracoccidioidomicose (PCM), doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica na América Latina e atinge principalmente indivíduos do sexo masculino com atividades econômica ligada a agricultura. Os pacientes com PCM exigem tratamento a base de sulfametoxazol/trimetoprim, anfotericina B, e derivados azólicos por longos períodos. A gp43, possui 416 aminoácidos, onde um trecho específico de 15 aminoácidos (QTLIAIHTLAIRYAN) designado como (P10), é reconhecido pelos linfócitos T de camundongos e humanos. No presente estudo avaliamos o efeito aditivo da imunização do P10 com às drogas antifúngicas utilizadas no tratamento da PCM. Nossos resultados indicam um efeito aditivo entre a imunização com P10 e o tratamento medicamentoso em camundongos Balb/c infectados. Associado a redução significativa da carga fúngica no pulmão, baço e fígado desses animais, detectamos aumento dos níveis de IL-12 e IFN-? e diminuição de IL-4 e IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by Paracoccidioides brasiliensis, a thermal dimorphic fungus. PCM is endemic in Latin America affecting mainly rural workers. The patients with PCM demand treatment the base of sulfametoxazole/trimethoprim, amphotericin B and derivatives azolic. The gp43 has 416-mer and mice and human T lymphocytes are stimulated by a 15-mer peptide designated as P10 (QTLIAIHTLAIRYAN). In the present work we evaluated the additive effect of P10 immunization and antifungal drugs utilizing in PCM treatment. Ours results showed an additive protective effect between immunization with P10 and drugs treatment with infected Balb/c mice. Associated to the reduction of fungal burden in the lung, spleen and liver we observed increase of levels of IL-12 and IFN-? and reduction of IL-4 and IL-10.