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Previous issue date: 2011-02-21 / Ticks are important to public health and animal production because of their ability to transmit various infectious agents. Among ticks, Rhipicephalus microplus is responsible for economic losses in tropical and subtropical countries. Among the ways to control this ectoparasite, the immune option is viable, which doesn t generate resistant tick populations and offers safety to the animal products. The synthetic vaccine SBm7462® contains three immunogenic epitopes (4822, 4824 and 4823) derived from the Bm86 protein. Genetic analysis showed that the fragement corresponding to the SBm7462® is conserved in the population of R. microplus from different regions on South America. To evaluate the events of cellular immunity in calves and histology changes in female R. microplus. Previously were designed and constructed two genes expressed in Pichia pastoris Km71 strain. The rBmseq1 gene was designed to express immunogenic epitopes in tandem and rBmseq4 gene designed expressed this without repetitions. The recombinant peptides were recovered from the extracellular medium and were characterized by SDS-PAGE and Western blotting. These peptides were inoculated three times at intervals of thirty days in five Bos taurus taurus calves at doses of 2 mg plus 1.5 mg saponin. Afterwards, the lymph nodes were collected and processed histologically. Histological sections were stained by (H&E) and immunohistochemical staining for peroxidase-anti-peroxidase (PAP). It was shown that they developed a T-dependent response with immunity induction in animals immunized. Hence, showed clear structures whit confers immunity and affinity in animals immunized whit rBmseq4. However, 21 days after the last immunization, the challenge was made with R. microplus 4500 larvae per animal. At 21 days with the beginning of fallen females, these were randomly selected from each group. R. microplus females fed on animal s rBmseq1 group showed integrity of the intestinal epithelium, similar to control group. However, guts of ticks fed on animal s rBmseq4 group showed denudation and erosion of basal membrane cell. It demonstrates the peptide rBmseq4 peptide has a great ability to generate immune responses which induce adverse reactions in R. microplus. / Devido à sua capacidade de transmitir diversos agentes infecciosos, os carrapatos são importantes para a saúde pública e a produção animal. Dentre estes se destaca o carrapato Rhipicephalus microplus, responsável por perdas econômicas nos países das regiões tropicais e subtropicais. Entre as medidas de controle deste ectoparasito, o controle imunológico se tornou uma alternativa viável, que além de não gerar populações de carrapatos resistentes oferece inocuidade aos produtos de origem animal. A vacina sintética SBm7462®, cuja eficácia já foi demonstrada em bovinos, contém três epítopos imunogênicos (4822, 4824 e 4823) derivados da proteína Bm86. Análises genéticas mostraram que o fragmento correspondente ao peptídeo SBm7462® está conservado nas populações do R. microplus de diferentes regiões da América do Sul. Para avaliar os eventos de imunidade celular em bezerros e as alterações histológicas em fêmeas do R. microplus. Previamente foram desenhados e construídos dois genes que se expressaram na levedura Pichia pastoris cepa Km71. O gene rBmseq1 foi desenhado para produzir os epítopos imunogênicos em tandem e o gene rBmseq4 para produzir a sequência sem repetições. Os peptídeos expressos se recuperaram do meio extracelular e se caracterizaram por SDS-PAGE e Western blotting. Esses peptídeos recombinantes foram inoculados três vezes com intervalos de 30 dias em 4 bezerros Bos taurus taurus, na dose de 2 mg mais 1,5 mg de saponina. Em seguida, os linfonodos foram coletados e processados para análise histológica. Os cortes foram submetidos à coloração por Hematoxilina-eosina (H&E) e imunoistoquímica por peroxidase - anti - peroxidase (PAP), demonstrando que foi induzida uma resposta T- dependente, com desenvolvimento da imunidade nos animais imunizados. Além disso, se observaram claras estruturas que conferem afinidade e imunidade nos animais inoculados com o rBmseq4. Aos 21 dias após a última imunização, foi feito o desafio com 4500 larvas de R. microplus por animal. Com o começo da caída das fêmeas aos 21 dias, foram escolhidas, aleatoriamente, teleóginas de cada grupo. As fêmeas do R. microplus, alimentadas em bovinos do grupo rBmseq1 apresentaram conservação da integridade do epitélio intestinal, similar ao grupo controle. No entanto, alças intestinais de teleóginas, alimentadas em bovinos do grupo rBmseq4 mostraram desnudamento da membrana basal e erosão celular. Demonstrou-se que o peptídeo rBmseq4 possui maior capacidade de gerar uma resposta imune com habilidade para induzir reações adversas nos carrapatos R. microplus.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:localhost:123456789/5091 |
| Date | 21 February 2011 |
| Creators | Tafur Gómez, Gabriel Andres |
| Contributors | Viloria, Marlene Isabel Vargas, Sossai, Sidimar, Salcedo, Joaquín Hernán Patarroyo, Furlong, John |
| Publisher | Universidade Federal de Viçosa, Mestrado em Medicina Veterinária, UFV, BR, Biotecnologia, diagnóstico e controle de doenças; Epidemiologia e controle de qualidade de prod. de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFV, instname:Universidade Federal de Viçosa, instacron:UFV |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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