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Previous issue date: 2014-05-08 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The increase in the number of fungal infections by Candida species, as a result of the
significant increase of immunocompromised patients emphasizes the importance of
studies associated to this genre. The resistance of these strains to antifungal drugs is
observe in specific isolates, as well as infections associated with biofilm formation
(BF). The aim of this study was to compare the susceptibility profile of sessile and
planktonic cells of different Candida isolates, differentiating species by multiplex
qPCR and scanning electron microscopy. The sample consisted of 10 C. albicans, 10
C. parapsilosis and 1 C. tropicalis. The genetic material was extracted by phenolchloroform
extraction of the sample C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) and
ATCC 22019 (C. parapsilosis) for use in a species-specific multiplex qPCR assay with
analysis of differences in the curve fusion. Microdilution plate test and reduction of the
tetrazolium salt for 21 isolates were performed for the susceptibility of sessile and free
cells, respectively. The evaluation of the ultrastructure of the biofilm was performed
on strips of polyurethane with visualization by scanning electron microscopy. The
amplified products from C. albicans obtained three melting peaks with values of 75,2
°C, 76,8 °C and 79,8 °C, while C. tropicalis and C. parapsilosis showed one peak with
values 73,5 °C and 78,5 °C, respectively. The identification test showed to be reliable
for the identification of the most common species in the study. All of Candida yeasts
were able to form biofilm with own organization of each specie. The in vitro
susceptibility test of planktonic cells demonstrated that amphotericin B and
caspofungin showed better activity compared to fluconazole and voriconazole who
obtained 19% of resistant strains, all C. albicans. In assessing of the CIMs50% and
CIMs80% of sessile cells, we observed an increase of at least 60 times the values of
planktonic cells. It was observed a high percentage of BF that demonstrates the need
for diagnosis and combat against this biomass formed by Candida species. The BF
is a virulence factor determinant for decrease of susceptibility to antifungal agents
thus compromising antifungal therapy. / O aumento no número de infecções fúngicas por espécies de Candida, como
resultado do expressivo aumento de pacientes imunocomprometidos destaca a
importância de estudos relacionados a esse gênero. A resistência destas leveduras
aos fármacos antifúngicos é observada em isolados específicos, assim como em
infecções associadas com a formação de biofilme (FB). O objetivo deste estudo foi
comparar o perfil de suscetibilidade in vitro de células sésseis e planctônicas de
diferentes isolados de Candida, diferenciando as espécies por qPCR multiplex e
microscopia eletrônica de varredura. A amostra foi composta de 10 C. albicans, 10
C. parapsilosis e 1 C. tropicalis. O material genético foi extraído pelo método de
extração fenol-clorofórmio da amostra de C. tropicalis, ATCC 28367 (C. albicans) e
ATCC 22019 (C. parapsilosis) para utilização no ensaio espécie-específico qPCR
multiplex com avaliação das diferenças na curva de fusão. Foram realizados teste de
microdiluição em placa e redução do sal tetrazólio para 21 isolados a fim de
determinar a suscetibilidade de células livres e sésseis, respectivamente. A avaliação
da ultraestrutura do biofilme foi realizada em tiras de poliuretano com visualização
por microscopia eletrônica de varredura. Os produtos amplificados de C. albicans,
obtiveram três picos de fusão com valores de 75,2°C, 76,8°C e 79,8°C, enquanto C.
parapsilosis e C. tropicalis mostraram um pico de valores 73,5°C e 78,5°C,
respectivamente. O teste de identificação apresentou-se confiável para a
identificação das espécies mais comuns no estudo. Todas as leveduras de Candida
foram capazes de formar biofilme com organização própria de cada espécie. O teste
de suscetibilidade in vitro das células planctônicas demonstrou que anfotericina B e
caspofungina apresentaram melhor atividade em comparação com o fluconazol e
voriconazol que obtiveram 19% das amostras resistentes, sendo todas C. albicans.
Na avaliação da CIMs50% e CIMs80% das células sésseis, observou-se um aumento
de pelo menos 60 vezes dos valores das células planctônicas. Foi observada
porcentagem elevada de FB que demonstra a necessidade do diagnóstico e combate
à essa biomassa formada pelas espécies de Candida, pois é um fator de virulência
determinante para a diminuição da suscetibilidade aos antifúngicos comprometendo
assim a terapêutica antifúngica.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/4233 |
| Date | 08 May 2014 |
| Creators | Marreto, Lais Carneiro Naziasene Lima |
| Contributors | Costa, Carolina Rodrigues, Costa, Carolina Rodrigues, Silva, Maria do Rosário Rodrigues da, Jesuino, Rosália Santos Amorim |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Biologia das Interações PH (IPTSP), UFG, Brasil, Instituto de Patologia Tropical e Saúde Pública - IPTSP (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 6367159433410056917, 600, 600, 600, 600, -7769011444564556288, -1634559385931244697, -961409807440757778 |
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