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Previous issue date: 2014-06-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Gram-positive bacterium Staphylococcus saprophyticus, one of the coagulasenegative
staphylococci, is the second most common causative agent of urinary tract
infection, affecting mainly sexually active women. Staphylococcus saprophyticus can
cause acute diseases as pyelonephritis, sepsis, nephrolithiasis, endocarditis,
urethritis, epididymitis and prostatitis. This work aims to identify Staphylococcus
saprophyticus surface proteins by using a proteolytic shaving approach, a
methodology that was established to identify surface-exposed protein domains by
tripsinization of intact cells. The peptides obtained were treated by trypsin, reduced,
alkylated and identified by nano-chromatography using a nanoACQUITY
UPLCTM system (Waters) coupled to a SYNAPT Q-TOF mass spectrometer (Waters).
The homology analysis was performed using the software ProteinLynx 2.3 (Waters).
Through the shaving, it was possible to identify 219 proteins, many of them,
described as virulence factors. Of total, 01 is cell wall protein, 09 are extracelular
proteins, 19 are membrane proteins and 190 are citoplasmatic proteins. Besides of
the lysis process, the presence of cytoplasmic proteins on cell surface can be due to
the activity of export pathways not yet identified and many of these proteins can be
proteins with moonlighting function, in other words, proteins that plays more of one
function, it can, in this case, plays functions on S. saprophyticus cell surface related
to bacterial virulence. The main proteins with moonlighting function include metabolic
enzymes of the glycolytic pathway; enzymes of other metabolic pathways, such as,
glyoxalate cycle; chaperones and proteins related with the proteic folding. The
prediction of cellular localization was performed through LocateP database. The
results of this research help to elucidate the strategies and machineries used by
proteins during the adhesion, infection and proliferation, leading us to understand the
interaction between the pathogenic bacteria S. saprophyticus and the human host.
The knowledge about the proteins present on the cell surface is of extreme
importance, because many of these proteins represent targets to new drugs,
therapeutic antibodies or vaccines, since the pathogen cell surface is the first to
contact with the host cells during the infection process. / A bactéria Gram-positiva Staphylococcus saprophyticus, uma das bactérias
estafilococos coagulase negativa, é o segundo agente mais comum causador de
infecções do trato urinário, afetando principalmente mulheres sexualmente ativas. S.
saprophyticus pode causar doenças agudas como pielonefrite, sepse, nefrolitíase,
endocardite, uretrite, epididimite e prostatite. Este trabalho teve como objetivo
identificar proteínas de superfície de S. saprophyticus pela abordagem de shaving
proteolítico, uma metodologia que foi estabelecida para identificar proteínas que
possuem domínios proteicos na superfície celular utilizando a tripsinização de
células intactas. Posteriormente, os peptídeos obtidos foram tripsinizados,
reduzidos, alquilados e identificados através de nano-cromatografia utilizando um
sistema nanoACQUITY UPLCTM (Waters) acoplado a um espectrômetro de massas
SYNAPT Q-TOF (Waters). Com isso foi possível identificar 219 proteínas, muitas
delas descritas como fatores de virulência. Do total, 01 proteína é de parede celular,
09 extracelulares, 19 de membrana e 190 citoplasmáticas. Além do processo de lise,
a presença de proteínas citoplasmáticas na superfície celular pode ser devida à
atividade de vias de exportação ainda não identificadas e muitas dessas proteínas
podem ser proteínas com função moonlighting, ou seja, proteínas que
desempenham mais de uma função, podendo, neste caso, desempenhar funções na
superfície de S. saprophyticus relacionadas à virulência bacteriana. As principais
proteínas com função moonlighting incluem enzimas metabólicas da via glicolítica;
enzimas de outras vias metabólicas, tais como, ciclo do glioxalato; chaperonas e
proteínas relacionadas com o dobramento proteico. A predição de localização celular
foi realizada com o banco de dados LocateP. Os resultados desta pesquisa
contribuíram na elucidação das estratégias e maquinarias utilizadas pelas proteínas
durante a adesão, infecção e proliferação, levando-nos a compreender a interação
entre a bactéria patogênica S. saprophyticus e o hospedeiro humano. O
conhecimento acerca das proteínas presentes na superfície celular é de extrema
importância, visto que muitas dessas proteínas representam alvos para novas
drogas, anticorpos terapêuticos ou vacinas, uma vez que a superfície celular do
patógeno é a primeira a entrar em contato com as células do hospedeiro durante o
processo de infecção.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.bc.ufg.br:tede/5496 |
| Date | 09 June 2014 |
| Creators | Carvalho, Alex Jesus de |
| Contributors | Rocha, Juliana Alves Parente, Rocha, Juliana Alves Parente, Coelho, Alexandre Siqueira Guedes, Baeza, Lilian Cristiane |
| Publisher | Universidade Federal de Goiás, Programa de Pós-graduação em Genetica e Biologia Molecular, UFG, Brasil, Instituto de Ciências Biológicas - ICB (RG) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFG, instname:Universidade Federal de Goiás, instacron:UFG |
| Rights | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -7235106986317239737, 600, 600, 600, 600, -3872772117827373404, -3439178843068202161, 2075167498588264571 |
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