Bochum, Universiẗat, Diss., 2001.

Ao mesmo tempo em que se avolumam os problemas ambientais causados pelos impactos de atividades industriais o homem tenta aperfeiÃoar ou desenvolver novas tÃcnicas de descontaminaÃÃo. A biorremediaÃÃo se destaca pela ampla gama de microrganismos que podem metabolizar muitos dos principais poluentes, alÃm de nÃo deixar resÃduos ou subprodutos recalcitrantes, como geralmente ocorre com outras tÃcnicas. Uma das mais recentes inovaÃÃes nesta Ãrea diz respeito ao uso de microrganismos imobilizados. A imobilizaÃÃo traz uma serie de vantagens, alÃm de facilitar o controle do processo e dos microrganismos. A quitosana, um polissacarÃdeo natural que pode ser obtido de carapaÃas de crustÃceos, agrega vÃrias caracterÃsticas que o tornam um suporte ideal para imobilizaÃÃo de certos organismos. Destaca-se sua biodegradabilidade, lipofilicidade, capacidade de formar gel e microesferas, alÃm de poder ser reticulado. Neste trabalho foi preparada uma quitosana a partir de quitina de carapaÃas de camarÃo com grau de desacetilaÃÃo de 78% e massa molar mÃdia de 117.000 Da. Esse polÃmero serviu de matriz para imobilizaÃÃo de uma cepa da bactÃria Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus, selecionada pela hidrofobicidade de sua parede celular, o que a torna um emulsificante. Foram produzidos esferas, membranas, filmes e hidrogÃis de quitosana sem e com a bactÃria imobilizada. Os produtos foram testados quanto à capacidade de emulsificaÃÃo de misturas Ãleo-Ãgua, remoÃÃo de cobre e chumbo de amostras de Ãguas contaminadas e como coagulantes de Ãleo em Ãgua. Os produtos tambÃm foram avaliados quanto à resistÃncia mecÃnica, uniformidade, solubilidade, alÃm de serem analisados por microscopia eletrÃnica de varredura. Os resultados mostraram que a incorporaÃÃo da bactÃria a quitosana melhorou significativamente a resistÃncia desse polÃmero. A membrana de quitosana suportou atà 53,62 Mpa enquanto uma membrana semelhante contendo bactÃrias imobilizadas suportou atà 73,96 Mpa. As esferas com a bactÃria tambÃm se destacaram pela uniformidade e resistÃncia a agitaÃÃo mecÃnica durante os testes de emulsificaÃÃo de misturas Ãleo-Ãgua. As esferas com cÃlulas ao contrÃrio das esferas sem cÃlulas promoveram a emulsificaÃÃo de hidrocarbonetos, atingindo um percentual de 60% de emulsificaÃÃo. Os filmes obtidos pelo tratamento das membranas com glicerol 20% se comportaram bem diferentes das membranas. Os filmes foram menos resistentes a traÃÃo, suportando 20,50 Mpa e 8,91 Mpa, para filmes sem cÃlulas e com cÃlulas respectivamente. Por outro lado, foram significativamente mais elÃsticos do que asmembranas, como provado pelos valores dos mÃdulos de Young, 146,4 Mpa e 222,8 Mpa, para filmes sem cÃlulas e com cÃlulas, respectivamente. As membranas com bactÃrias imobilizadas removeram mais eficientemente cobre e chumbo do que as membranas sem cÃlulas, enquanto os filmes independentemente de terem ou nÃo cÃlulas imobilizadas foram impermeÃveis à passagem dessas soluÃÃes. As esferas de quitosana contendo cÃlulas foram significativamente mais eficientes para adsorver cobre e chumbo de amostras de Ãguas contaminadas. Comparativamente, o cobre foi melhor adsorvido do que o chumbo nas esferas. NÃo foram observadas diferenÃas na remoÃÃo de atà 200 μg/g de cobre e chumbo atribuÃveis Ãs diferenÃas da Ãgua doce e Ãgua do mar. A adsorÃÃo de cobre e chumbo foi da ordem de 20 mg/g de quitosana enquanto a capacidade de dessorÃÃo foi de mais de 90% para o cobre e mais de 80% para o chumbo. NÃo foram observadas diferenÃas entre a coagulaÃÃo de amostras de petrÃleo derramadas em Ãgua com gÃis de quitosana sem cÃlulas ou com cÃlulas. Conclusivamente, os produtos desenvolvidos e testados neste trabalho possuem grande potencial para emprego em atividades de biorremediaÃÃo. / As the environmental problems caused by the impacts of industrial activities increase the man tries to improve or to develop new descontamination techniques. The bioremediation stands out for a wide range of microorganisms that can metabolize many of the pollutants, besides not leaving residues or recalcitrant by-products, as it usually happens with other techniques. One of the most recent innovations in this concern is the use of immobilized microorganisms. The immobilization has many advantages besides facilitating the control of the process and the microorganisms. The chitosan, a natural polysaccharide that can be obtained from crustacea shells, presents several characteristics that turn it an ideal support for immobilization of certain microorganisms such as its biodegradability, lipofilic properties, capacity to form gel and beads and it can be reticulated. In this work was prepared a chitosan starting from chitin of shrimp shells with degree of desacetilation of 78% and molar mass of 117.000 Da. This polymer was used for immobilization of the Staphylococcus saprophyticus subsp. saprophyticus strain, selected by the cell-wall hydrophobicity, what turns it an emulsificant. Beads, membranes, films and hydrogels were produced with and without immobilized bacteria. The products were tested for oil-water emulsification, removal of copper and lead from contaminated water and as clotting of oil in water. The products were also available for the mechanical resistance, uniformity, solubility and analyzed by electronic microscopy of varredure. The results showed that the incorporation of the bacteria into chitosan improved significantly the resistance of this polymer. The chitosan membrane supported up to 53.62 Mpa while a similar membrane containing immobilized bacteria supported up to 73.96 Mpa. The beads with the bacterium also stood out for the uniformity and mechanical resistance during the tests of oil-water emulsification. The beads with cells unlike the beads without cells promoted the hydrocarbon emulsification, reaching of 60%. The films obtained by the treatment of the membranes with glycerol 20% behaved very different far from the membranes. The films were less resistant to traction, supporting 20.50 Mpa and 8.91 Mpa, for films without cells and with cells respectively. On the other hand, the films were significantly more elastic than the membranes, as proven by the values of the Young modules, 146.4 Mpa and 222.8 Mpa, for films without cells and with cells, respectively. The membranes with immobilized bacteria removed copper and lead more efficiently than the membranes without cells, while the films showed the same result independently of having or not immobilized cells. Both films were impermeable to the passage of copper and lead solutions. The beads containing cells were significantly more efficient for metal adsorption from samples of polluted waters. Comparatively, the copper was better adsorpted than the lead. There were not observed any difference on the removal of 200 μg/g of copper and lead that should be attributed to the differences of fresh and sea water. The copper and lead adsorption was of 20mg/g of chitosan while the desorption was more than 90% for the copper and more than 80% for the lead. No differences were observed among the petroleum coagulation spilled in water with chitosan gels with or without cells. In conclusion, the products developed and tested in this work showed great potential for bioremediation applications.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-12-10T14:10:12Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Silva de Oliveira - 2014.pdf: 3199133 bytes, checksum: cb42a7815c2701477249ff4d0cb2a05b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-12-11T07:57:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Silva de Oliveira - 2014.pdf: 3199133 bytes, checksum: cb42a7815c2701477249ff4d0cb2a05b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-11T07:57:23Z (GMT). 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Among the proteins found, five of them have a crucial role in the glycolytic pathway: Triosephosphate isomerase (TPI), enolase (ENO), Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and Glucose-6-phosphate isomerase (GPI), however, its role as moonlighting proteins have been observed in various microorganisms. Through of the immunoproteomics, it was possible to detect 18 protein species that reacted onto Western-blotting, and 5 of them could be identified by mass spectrometry. The most abundant protein specie identified as immunogenic in S. saprophyticus, it was transglycosilase IsaA (Immunodominant staphylococcal antigen A), being it well described in Staphylococcus aureus as virulence factor. Another abundant protein found as immunogenic was Ssa (Staphylococcal secretory antigen), which, it was identified under 3 isoforms. The enolase was the last protein identified at immunoproteome of S. saprophyticus. It was possible to conclude from these results that S. saprophyticus has a wide of extracellular proteins capable to promote bacteria adaption, and some of them are involved in oxidative/nitrosative stress (SOD and AhpC), besides possess proteins that have the capacity to incite the humoral immune response in BalbC mice. All this lead us to hypothesize that S. saprophyticus have defense and virulence mechanisms in order to protect itself against extracellular stresses and appropriate mechanisms to promote urinary tract infections. / Staphylococcus saprophyticus caracteriza-se por ser uma bactéria uropatogênica que causa infecção no trato genito-urinário especialmente de mulheres jovens. Alguns fatores de virulência já foram elucidados, no entanto, pouco se conhece do modo pelo qual esta bactéria acomete o hospedeiro humano. A uréase foi o primeiro fator de virulência descrito em S. saprophyticus, sendo responsável pela alcalinização do pH da bexiga de pacientes contaminados. Este estudo é o pioneiro tratando-se de S. saprophyticus na abordagem da proteômica e imunoproteômica do perfil de proteínas secretadas (exoproteoma) por esta bactéria. Um total de 44 proteínas secretadas inéditas foram detectadas por espectrometria de massas. Dentre as proteínas encontradas, cinco delas possuem papel fundamental na via glicolítica: triose-fosfato isomerase (TPI), enolase (ENO), gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH) e glicose-6-fosfato isomerase (GPI), no entanto, seu papel como proteína “moonlighting” já foi observado em diversos microrganismos. Através da imunoproteômica, foi possível detectar 18 espécies proteicas que reagiram no Wester-blotting, e 5 delas puderam ser identificadas por espectrometria de massas. A espécie proteica mais abundante identificada como imunogênica em S. saprophyticus, foi a transglicosilase IsaA (Immunodominant staphylococcal antigen A), sendo bem descrita em S. aureus como um fator de virulência. Outra proteína abundante identificada como imunogênica foi a Ssa (Staphylococcal secretory antigen), no qual, foi identificada em 3 isoformas. A enolase também foi identificada no imunoproteoma de S. saprophyticus. Foi possível concluir através destes resultados que S. saprophyticus possui uma gama de proteínas extracelulares capazes de promover a adaptação desta bactéria, algumas delas envolvidas na proteção contra o estresse oxidativo/nitrosativo (SOD e AhpC), além de possuir proteínas que tem a característica de incitar a resposta imune humoral de camundongos BalbC. Isso tudo nos leva a hipotetizar que S. saprophyticus possui mecanismos de defesa e virulência a fim de se proteger contra estresses exteriores e mecanismos para promover a patogênese no trato genito-urinário.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-20T12:49:28Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alex Jesus de Carvalho - 2014.pdf: 1685689 bytes, checksum: 5b4f38809e4a3fe6252bba20b25d949b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-20T12:58:32Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alex Jesus de Carvalho - 2014.pdf: 1685689 bytes, checksum: 5b4f38809e4a3fe6252bba20b25d949b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-20T12:58:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Alex Jesus de Carvalho - 2014.pdf: 1685689 bytes, checksum: 5b4f38809e4a3fe6252bba20b25d949b (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-06-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The Gram-positive bacterium Staphylococcus saprophyticus, one of the coagulasenegative staphylococci, is the second most common causative agent of urinary tract infection, affecting mainly sexually active women. Staphylococcus saprophyticus can cause acute diseases as pyelonephritis, sepsis, nephrolithiasis, endocarditis, urethritis, epididymitis and prostatitis. This work aims to identify Staphylococcus saprophyticus surface proteins by using a proteolytic shaving approach, a methodology that was established to identify surface-exposed protein domains by tripsinization of intact cells. The peptides obtained were treated by trypsin, reduced, alkylated and identified by nano-chromatography using a nanoACQUITY UPLCTM system (Waters) coupled to a SYNAPT Q-TOF mass spectrometer (Waters). The homology analysis was performed using the software ProteinLynx 2.3 (Waters). Through the shaving, it was possible to identify 219 proteins, many of them, described as virulence factors. Of total, 01 is cell wall protein, 09 are extracelular proteins, 19 are membrane proteins and 190 are citoplasmatic proteins. Besides of the lysis process, the presence of cytoplasmic proteins on cell surface can be due to the activity of export pathways not yet identified and many of these proteins can be proteins with moonlighting function, in other words, proteins that plays more of one function, it can, in this case, plays functions on S. saprophyticus cell surface related to bacterial virulence. The main proteins with moonlighting function include metabolic enzymes of the glycolytic pathway; enzymes of other metabolic pathways, such as, glyoxalate cycle; chaperones and proteins related with the proteic folding. The prediction of cellular localization was performed through LocateP database. The results of this research help to elucidate the strategies and machineries used by proteins during the adhesion, infection and proliferation, leading us to understand the interaction between the pathogenic bacteria S. saprophyticus and the human host. The knowledge about the proteins present on the cell surface is of extreme importance, because many of these proteins represent targets to new drugs, therapeutic antibodies or vaccines, since the pathogen cell surface is the first to contact with the host cells during the infection process. / A bactéria Gram-positiva Staphylococcus saprophyticus, uma das bactérias estafilococos coagulase negativa, é o segundo agente mais comum causador de infecções do trato urinário, afetando principalmente mulheres sexualmente ativas. S. saprophyticus pode causar doenças agudas como pielonefrite, sepse, nefrolitíase, endocardite, uretrite, epididimite e prostatite. Este trabalho teve como objetivo identificar proteínas de superfície de S. saprophyticus pela abordagem de shaving proteolítico, uma metodologia que foi estabelecida para identificar proteínas que possuem domínios proteicos na superfície celular utilizando a tripsinização de células intactas. Posteriormente, os peptídeos obtidos foram tripsinizados, reduzidos, alquilados e identificados através de nano-cromatografia utilizando um sistema nanoACQUITY UPLCTM (Waters) acoplado a um espectrômetro de massas SYNAPT Q-TOF (Waters). Com isso foi possível identificar 219 proteínas, muitas delas descritas como fatores de virulência. Do total, 01 proteína é de parede celular, 09 extracelulares, 19 de membrana e 190 citoplasmáticas. Além do processo de lise, a presença de proteínas citoplasmáticas na superfície celular pode ser devida à atividade de vias de exportação ainda não identificadas e muitas dessas proteínas podem ser proteínas com função moonlighting, ou seja, proteínas que desempenham mais de uma função, podendo, neste caso, desempenhar funções na superfície de S. saprophyticus relacionadas à virulência bacteriana. As principais proteínas com função moonlighting incluem enzimas metabólicas da via glicolítica; enzimas de outras vias metabólicas, tais como, ciclo do glioxalato; chaperonas e proteínas relacionadas com o dobramento proteico. A predição de localização celular foi realizada com o banco de dados LocateP. Os resultados desta pesquisa contribuíram na elucidação das estratégias e maquinarias utilizadas pelas proteínas durante a adesão, infecção e proliferação, levando-nos a compreender a interação entre a bactéria patogênica S. saprophyticus e o hospedeiro humano. O conhecimento acerca das proteínas presentes na superfície celular é de extrema importância, visto que muitas dessas proteínas representam alvos para novas drogas, anticorpos terapêuticos ou vacinas, uma vez que a superfície celular do patógeno é a primeira a entrar em contato com as células do hospedeiro durante o processo de infecção.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-14T17:40:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-14T17:41:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-14T17:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus saprophyticus is a pathogenic bacterium of the urinary tract and the main etiological agent of urinary tract infections by Gram-positive bacteria. Although S. saprophyticus potentially can cause serious infections such as pyelonephritis, septicemia, endocarditis and nephrolithiasis, and also multidrug resistance has been reported, not much is known about the mechanisms used by this bacterium during infection. Secreted proteins might be essential on those mechanisms if their role is accomplished during phagocytosis by their assistance of an active infection in phagocytic cells, protecting against oxidative stress and increasing the persistence of bacterial cells within phagocytes, and / or causing lysis of the host cell. Recently our group identified the immunogenic protein SsaA in the secretome of S. saprophyticus. This protein had been previously identified in S. aureus proteome, and it appears to be controlled by regulatory systems for known virulence factors. It also presents similarities with lytic proteins and proteins that assist the persistence within phagocytic cells. However, no approach had analyzed the contribution of SsaA during infection, therefore, through the construction a cloning vector containing the S. saprophyticus gene ssaA, heterologous expression of the recombinant protein and the production of specific polyclonal antibodies, it was able to verify the interaction of SsaA and proteins from macrophages infected by bacterial cells. Through immunofluorescence microscopy, it was verified that the dispersion of SsaA is not limited to phagocytic cells but it was throughout their cytoplasm after internalization of the bacterium. These findings together with other evidence in the literature suggest that SsaA is used during infection by S. saprophyticus, more specifically during phagocytosis. Further approaches are required to confirm if SsaA has a lytic activity and also characterize this protein as a virulence factor, contributing to elucidate strategies used by S. saprophyticus during infection in the human host. / Staphylococcus saprophyticus é uma bactéria patogênica do trato urinário e principal agente etiológico de infecções urinárias por bactérias Gram-positivas. Apesar de potencialmente S. saprophyticus ocasionar infecções graves como pielonefrite, septicemia, nefrolitíase e endocardite, e relatos de multirresistência a antibióticos, relativamente pouco é conhecido sobre os mecanismos utilizados por esta bactéria durante infecção. Proteínas secretadas podem ser essenciais nesses mecanismos se seus papéis forem durante fagocitose auxiliando uma internalização ativa na célula fagocítica, protegendo contra o estresse oxidativo e aumentando a persistência de células bacterianas no interior de fagócitos, e/ou causando lise da célula hospedeira. Recentemente nosso grupo identificou a proteína imunogênica SsaA no secretoma de S. saprophyticus. Essa proteína já havia sido identificada em S. aureus como altamente imunogênica, e parece estar relacionada a fatores de virulência como o Antígeno Imunodominante A (IsaA), a proteína Urease, a hidrolase de peptideoglicano LytM, a Proteína Repressora de Toxinas (Rot) e a proteína de choque térmico HslU. Contudo, poucos estudos conseguem identificar a proteína SsaA secretada e nenhum analisa sua contribuição durante infecção por bactérias do gênero Staphylococcus. Através da construção de um vetor de clonagem contendo o gene ssaA de S. saprophyticus, expressão heteróloga da proteína recombinante e produção de anticorpos policlonais específicos, foi possível verificar a interação entre SsaA e proteínas de macrófagos infectados por células de S. saprophyticus. Através de microscopia de imunofluorescência, foi verificado que a secreção de SsaA não é limitada à fagossomos, mas esta proteína é dispersa em todo o citoplasma da célula fagocítica após internalização de células bacterianas. Os resultados encontrados sugerem que SsaA é utilizada por S. saprophyticus durante infecção, especificamente durante fagocitose. Estudos posteriores serão necessários para confirmar se SsaA possui atividade lítica e caracteriza-la como fator de virulência, contribuindo para elucidar estratégias utilizadas por S. saprophyticus durante infecção no hospedeiro humano.

INTRODUÇÃO: Infecção do trato urinário (ITU) é doença cujos sinais e sintomas são frequentemente inespecíficos, especialmente em lactentes. Portanto, o conhecimento de seus aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais são relevantes para a adequada abordagem clínica. OBJETIVOS PRINCIPAIS: Descrever: a prevalência de ITU como motivo de atendimento em pronto-socorro geral de Pediatria; a variabilidade da frequência de ITU e dos agentes etiológicos em diversas faixas etárias e sexo; o perfil de sensibilidade antimicrobiana de Escherichia coli; o quadro clínico, laboratorial e evolutivo de lactentes jovens. OBJETIVOS SECUNDÁRIOS: Cálculo de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e valor preditivo negativo do corte de leucocitúria >= 10.000 leucócitos/mL para o diagnóstico de ITU em lactentes jovens. Comparar as diferenças de ITU por Escherichia coli e Staphylococcus saprophyticus em adolescentes do sexo feminino e discutir as melhores escolhas de terapia antimicrobiana empírica para uso na população estudada. MÉTODO: Estudo retrospectivo, descritivo, incluindo todos os casos de ITU (urocultura quantitativa com >= 50.000 UFC/mL por sondagem vesical ou >= 100.000 UFC/mL por jato médio) atendidos no Pronto-Socorro de Pediatria do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo, de 01/01/2010 a 31/12/2012, idades entre zero a 15 anos incompletos. Resultados: Do total de 188.460 atendimentos realizados, 7994 colheram urocultura por suspeita de ITU; este diagnóstico foi confirmado em 1071 casos (prevalência: 0,57% do total de atendimentos e 13,4% das uroculturas incluídas). A proporção de casos entre sexo masculino e feminino foi: 1:0,3 em menores de três meses; 1:3,9 entre três meses a 12 anos e 1:12 entre 12 a 15 anos. Escherichia coli foi o principal agente responsável por 73,2% dos casos totais de ITU. Entretanto, outros agentes importantes foram Klebsiella pneumoniae (18,46%) e Enterococcus faecalis (7,7%) em lactentes jovens (menores de três meses de idade); Proteus mirabilis (30,8%) em meninos de três meses a 12 anos; Staphylococcus saprophyticus (25%) em adolescentes do sexo feminino entre 12 a 15 anos. A sensibilidade antimicrobiana de Escherichia coli foi observada acima de 80% para: amoxicilina/ácido clavulânico (87%), cefuroxima (98%), cefotaxima (98%), ceftriaxona (100%), cefepime (99%), amicacina (100%), gentamicina (97%), ciprofloxacina (98%), norfloxacina (94%), ácido nalidíxico (93%) e nitrofurantoína (97%). Em lactentes jovens, febre sem sinais localizatórios foi o sintoma mais frequente de ITU (77,8%). Exames subsidiários de hemograma e proteína C reativa foram de pouca utilidade clínica. O teste de nitrito positivo apresentou baixa sensibilidade: 30,8% (IC 95%: 19,9%-43,4%), porém elevada especificidade e valor preditivo positivo. Enquanto que o corte de leucocitúria > 10.000 leucócitos/mL para ITU revelou boa sensibilidade: 87,7% (IC 95%: 77,2%-94,5%), porém baixa especificidade e valor preditivo positivo. Nas adolescentes do sexo feminino entre 12 a 15 anos, houve menor positividade do teste do nitrito nas ITU por Staphylococcus saprophyticus do que nas ITU por Escherichia coli. Na população do presente estudo, a terapia empírica inicial recomendada seria: zero a três meses: tratamento parenteral com aminoglicosídeo ou cefalosporina de terceira geração; podendo associar ampicilina para cobertura de Enterococcus faecalis. Entre três meses a 15 anos: amoxicilina/ácido clavulânico ou cefuroxima ou ceftriaxona ou aminoglicosídeos. CONCLUSÕES: ITU é doença frequente em atendimentos de pronto-socorro. Os aspectos epidemiológicos, clínicos e laboratoriais são variáveis nas diversas faixas etárias e sexos; portanto, a abordagem deve ser individualizada em cada um destes segmentos / INTRODUCTION: Urinary tract infection (UTI) frequently presents with nonspecific signs and symptoms, particularly in infants. Therefore, the understanding of its epidemiological, clinical and laboratory aspects are relevant to its appropriate clinical approach. MAIN OBJECTIVES: To describe: the prevalence of UTI as a cause for attending the pediatric emergency department; the variability of the frequency of UTI and etiological agents in different age groups and sexes; the antimicrobial sensitivity profile of Escherichia coli; the clinical features, laboratory findings and treatment outcomes in young infants. SECONDARY OBJECTIVES: To evaluate sensitivity, specificity, positive predictive value and negative predictive value of pyuria >= 10,000 leukocytes/mL for screening UTI in young infants. To compare UTI due to Escherichia coli with UTI due to Staphylococcus saprophyticus in female adolescents and to discuss the best empirical antimicrobial treatment in the population studied. METHODS: Retrospective, descriptive study, including all cases of UTI (urine culture of >= 50,000 CFU/mL obtained by bladder catheterization or >= 100,000 CFU/mL obtained by midstream-voided method) attended at the pediatric emergency department of University Hospital of the University of São Paulo, from 01/01/2010 to 12/31/2012, ages from zero to 15 years old. Results: Of 188,460 visits in this period, 7994 collected urine culture on suspicion of UTI. This diagnosis was confirmed in 1071 cases (prevalence: 0.57% of total visits and 13.4% of urine cultures included). The proportion of cases between male and female was: 1: 0.3 in children younger than three months old; 1: 3.9 from three months to 12 years old and 1:12 from 12 to 15 years old. Escherichia coli was the main etiology responsible for 73.2% of total cases of UTI. However, other important agents were Klebsiella pneumoniae (18.46%) and Enterococcus faecalis (7.7%) in young infants (under three months of age); Proteus mirabilis (30.8%) in boys from three months to 12 years old; Staphylococcus saprophyticus (25%) in female adolescents aged 12-15 years. The antimicrobial sensitivity of Escherichia coli was still above 80% for amoxicillin / clavulanic acid (87%), cefuroxime (98%), cefotaxime (98%), ceftriaxone (100%), cefepime (99%), amikacin (100%), gentamicin (97%), ciprofloxacin (98%), norfloxacin (94%), nalidixic acid (93%) and nitrofurantoin (97%). In young infants, the absence of another source of fever was the most frequent UTI symptom (77.8%). Laboratory parameters including peripheral white blood cell count and C-reactive protein concentration were of limited clinical usefulness. The sensitivity of nitrite testing for bacteriuria was low: 30.8% (95% CI: 19.9%-43.4%), but had high specificity and positive predictive value. Pyuria> 10,000 leukocytes / mL for identifying UTI had high sensitivity: 87.7% (95% CI: 77.2%-94.5%), but low specificity and positive predictive value. In female adolescents aged 12 to 15 years old, there were few positive nitrite tests in UTI due to Staphylococcus saprophyticus compared with UTI due to Escherichia coli. In the population studied, the initial empirical therapy recommended would be: from zero to three months old: parenteral treatment with aminoglycoside or third generation cephalosporin; it could be associated with ampicillin to treat Enterococcus faecalis. Between three months to 15 years old: amoxicillin / clavulanic acid or cefuroxime or ceftriaxone or aminoglycosides. In cystitis: in addition to amoxicillin / clavulanic acid or cefuroxime; nitrofurantoin is also a good option for Staphylococcus saprophyticus UTI whereas nalidixic acid is also a nice choice for Proteus mirabilis UTI. CONCLUSIONS: UTI is a common disease in emergency department visits. The epidemiological, clinical and laboratory aspects are variable in the different age and sex groups; therefore, the approach must be individualized in each of these groups

Background Coagulase-negative staphylococci (CoNS) and in particular Staphylococcus epidermidis have emerged as major pathogens primarily causing nosocomial infections in patients with indwelling medical devices. These infections are often caused by multidrug-resistant strains of S. epidermidis (MDRSE). Other clinical entities due to CoNS are lower urinary tract infections (UTI) in women and native valve endocarditis. The purpose of this work was to investigate the frequency of antibiotic resistance and the molecular epidemiology of both hospital and community-associated isolates of S. epidermidis in order to examine if certain clones are related to MDRSE infections. Furthermore, we aimed to explore if specific clones of S. saprophyticus are associated with UTI in women. Methods A total of 359 hospital-associated methicillin-resistant isolates of CoNS obtained from 11 hospitals in northern Europe and 223 community-associated staphylococcal isolates were examined. Furthermore, 126 isolates of S. saprophyticus isolated from women with uncomplicated UTI from five different locations in northern Europe were analyzed. Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) was used for genotyping. Additionally, some of the S. epidermidis isolates were analyzed with multilocus sequence typing (MLST). Antibiotic susceptibility was determined for all isolates by the disc diffusion test. Results 293 of the 359 (82%) hospital-associated and 124 of the 223 (56%) community-associated isolates belonged to the species S. epidermidis. Among the hospital-associated S. epidermidis isolates, two dominating PFGE types (type A and B) were distinguished, comprising 78 (27%) and 51 (17%) isolates, respectively. Type A, which was detected in a Norwegian and eight Swedish hospitals, corresponded with a novel sequence type (ST215). Type B was discovered in a German, a Danish and seven Swedish hospitals and corresponded with ST2. In contrast, community-associated isolates of S. epidermidis were genetically extremely diverse with no predominating genotype, and showed a low rate of antibiotic resistance; only two (1.6%) methicillin-resistant strains were detected. Among 126 analyzed isolates of S. saprophyticus, 47 different PFGE profiles were identified. Several clusters of genetically highly related isolates were detected among isolates obtained from different locations and periods of time. Conclusion We have demonstrated the occurrence, persistence and potential dissemination of two multidrug-resistant S. epidermidis (MDRSE) genotypes, including a novel sequence type (ST215), within hospitals in northern Europe. Community-associated isolates of S. epidermidis showed a low rate of methicillin-resistance and were genetically heterogeneous. These results indicate that MDRSE by large are confined to the hospital setting in our region. Moreover, although the S. saprophyticus population was quite heterogeneous, indistinguishable isolates of S. saprophyticus causing lower UTI in women were identified in different countries 11 years apart, indicating the persistence and geographical spread of some clones of S. saprophyticus.