Made available in DSpace on 2015-03-04T18:57:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thesis_Baptista_LPR.pdf: 17392105 bytes, checksum: cc35fa1188cd3dff14124658b1799f05 (MD5) Previous issue date: 2011-06-29 / A Leishmaniose é uma doença infecciosa causada por protozoários do gênero Leishmania. Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS), cerca de 12 milhões de pessoas estão atualmente infectadas com Leishmaniose. Destes, aproximadamente 90% dos casos ocorrem em países em desenvolvimento, caracterizando-a claramente como uma doença negligenciada. Casos de resistência aos principais medicamentos foram relatados em diferentes países, reafirmando a necessidade de pesquisa e desenvolvimento de novas drogas para o tratamento desta doença. A ribose-5-fosfato isomerase (Rpi), uma importante enzima da via da pentose fosfato, catalisa a interconversão de D-ribose-5-fosfato (R5P) e D-ribulose-5-fosfato (Ru5P). É conhecido que existem dois tipos de Rpi: o tipo B (RpiB) é mais comumente encontrado em procariotos (presente no genoma de Leishmania major) enquanto o tipo A (RpiA) é principalmente encontrado em eucariotos (ausenteno genoma de Leishmania major). Considerando que RpiB não é encontrada em eucariotos superiores, esta enzima pode se tornar um importante alvo para o desenvolvimento de novas drogas antileishmania. Neste trabalho, as estruturas tridimensionais (3D) da Rpi do parasita L. major (LmRpiB) e a RpiA do hospedeiro (Homo sapiens, HsRpiA) foram modeladas usando uma metodologia híbrida combinando modelagem comparativa e ab initio. De posse das estruturas tridimensionais das duas enzimas, foram realizados os seguintes estudos: (i) caracterização e comparação das propriedades físico-químicas dos sítios catalíticos; (ii) validação dos modelos através de estudos de atracamento molecular para predição do modo de ligação de substratos; (iii) estudos de triagem virtual de compostos para determinação de possíveis candidatos a fármacos seletivos. Os resíduos do sítio ativo em ambas as enzimas foram caracterizados quanto ao seu estado de protonação. Os resultados obtidos sugerem que a LmRpiB segue o mecanismos de reação descrito atualmente na literatura. Entretanto, para a enzima HsRpiA foi encontrada uma diferença significativa no estado de protonação do resíduo catalítico Glu182. Foram verificadas diferenças importantes nos volumes de distintos sítios ativos em cada enzima relacionadas a diferenças na acessibilidade ao solvente de resíduos carregados positivamente. Os estudos de atracamento mostraram que em LmRpiB a correta orientação dos substratos _e altamente sensível a variações na posição destes resíduos. Finalmente, ambas estruturas, utilizando os resultados da caracterização dos sítios ativos, foram utilizadas em experimentos de triagem virtual empregando um conjunto de 1202 compostos do banco de ligantes ZINC. Os melhores compostos candidatos a inibidores de LmRpiB foram analisados levando-se em conta a sua seletividade frente a enzima HsRpiA.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:57:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Isabella_Final.pdf: 20727738 bytes, checksum: dd3b20329660c2fe2868a6796b23e869 (MD5) Previous issue date: 2011-07-15 / The protein kinases are responsible for regulating various biological mechanisms. The active protein kinase can phosphorylate several substrates and proteins in the body, having an important role in regulating biological functions. The lack of phosphorylation in the process of this family of proteins is associated with various diseases such as cancer, diabetes and rheumatoid arthritis. The human genome contains approximately 478 different kinase genes. Among these, the protein kinases IKK-2 and MAPKp38 are considered potential targets for developing anti-inflammatory drugs. In this work, we used the techniques of comparative modeling and molecular docking for a better understanding of the molecular characteristics and properties which can confer potency and selectivity to the inhibitors described in the literature for these two enzymes. The three-dimensional models built for the IKK's (1 and 2) made possible the understanding of special features available in these enzymes. The study of molecular docking with inhibitors allowed to infer important information about the characteristics of the binding modes that give potency and selectivity to the compounds tested. Regarding MAPKp38, cross-docking studies showed that the conformational change of the A-loop of this enzyme has a profound influence on the results of molecular docking of the inhibitors tested. The success rates of sets of structures of the enzyme were estimated, in order to indicate the combinations of structures that could achieve greater accuracy in real ensemble docking experiments. / As proteínas cinases são responsáveis pela regulação de diversos mecanismos biológicos. A proteína cinase ativa é capaz de fosforilar os substratos e diversas proteínas do organismo, tendo um importante papel na regulação das funções biológicas. O descontrole no processo de fosforilação dessa família de proteínas está associado com diversas doenças, como câncer, diabetes e atrite reumatoide. O genoma humano contém aproximadamente 478 diferentes genes de cinases. Dentre estas, as proteínas cinases IKK-2 e MAPKp38 são consideradas como potenciais alvos para o desenvolvimento de fármacos anti-inflamatórios. Neste trabalho, foram utilizadas as técnicas de modelagem comparativa e atracamento molecular para obter um melhor entendimento das características e propriedades moleculares que podem conferir potência e seletividade aos inibidores descritos na literatura para estas duas enzimas. Os modelos tridimensionais construídos para as IKK s (1 e 2) tornaram possível o entendimento de características especiais existentes nessas enzimas. O estudo de atracamento molecular de inibidores possibilitou inferir informações importantes com relação às características dos modos de ligação que conferem potência e seletividade aos compostos testados. Com relação à MAPKp38, os estudos de crossdocking demonstraram que a variação conformacional do A-loop desta enzima exerce grande influência nos resultados de atracamento molecular em inibidores potentes. Conjuntos de estruturas da enzima tiveram as taxas de sucesso estimadas, com o objetivo de indicar as combinações de estruturas que poderiam obter a maior acurácia em experimentos reais de ensemble docking.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Cristina Machado.pdf: 1197786 bytes, checksum: 5f8b2181ba411a99fe6d77d54ddc3784 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Characidium genus shows a broad karyotypic variability regarding the origin and diversification of the sex chromosomes, intra-and interindividual variation of B chromosomes and location of sites and number of NORs chromosomes bearing. Variations in the sex chromosomes Z and W morphology provide an excellent model to study chromosomal differentiation associated with a potential mechanism for reproductive isolation. In this study, we obtained a probe of the sex chromosome W of Characidium gomesi by chromosome microdissection , amplification by DOP-PCR and conducting comparative chromosome painting of W probe together with the 18S rDNA probe in some populations / species: C. gomesi of Rio Verde (PR), C. gomesi of Rio Grande (SP), C. gomesi of Ribeirão Minhoca (MG), C. lauroi of the Rio Grande (SP), C. zebra of Passa Cinco (SP). The conventional analysis of the populations of C. gomesi from rio Verde and ribeirão Minhoca, not yet described, showed the diploid number with 50 chromosomes and the presence of sex chromosome ZZ / ZW in advanced stages of differentiation. With the use of dual FISH, W and 18S rDNA probes, in populations of C. gomesi, C. lauroi and C. zebra was hypothesized a pathway of differentiation of sex chromosomes in the group. In this possible pathway, transposition / translocation of the NORs sites to proto sex chromosome was the first event this differentiation. Thereafter, the heterochromatization of other repetitive DNAs, not present in NORs site, acted on the alteration of the chromosomes Z and W morphologies. The heterochromatization of W chromosome wasintense in C. gomesi and C. alipioi species so the NOR siteswere again transposed to an autosomal condition. Was discussed also the biogeographic barriers help to differentiation of sex chromosomes in Characidium promoting reproductive isolation and speciation of the group. / O gênero Characidium apresenta alta variabilidade cariotípica no que diz respeito a origem e diversificação dos cromossomos sexuais, variação intra e interindividual de cromossomos B e localização e número de sítios de RONs. Variações populacionais na morfologia dos cromossomos sexuais Z e W propiciam excelente modelo de estudo de variação cromossômica associada a mecanismo em potencial para o isolamento reprodutivo. Neste estudo, foi obtida sonda do cromossomo sexual W de Characidium gomesi por microdissecção cromossômica posterior ao bandamento C, amplificação por DOP-PCR e realização de pintura cromossômica comparativa desta sonda W juntamente com o rDNA 18S em algumas populações/espécies do gênero: C. gomesi do rio Verde (PR), C. gomesi do rio Grande (SP), C. gomesi do ribeirão Minhoca (MG), C. lauroi do ribeirão Grande (SP), C. zebra do rio Passa Cinco (SP). A análise convencional das populações de C. gomesi do ribeirão Minhoca e rio Verde, ainda não descritas, demonstraram o número diplóide de 50 cromossomos e presença de cromossomos sexuais ZZ/ZW em estágio avançado de diferenciação. Com a utilização da dupla FISH sonda W e rDNA 18S nas populações de C. gomesi, C. lauroi e C. zebra foi possível hipotetizar uma via de diferenciação dos cromossomos sexuais no grupo. Nessa possível via, a transposição/translocação da RON para um proto cromossomo sexual foi um primeiro evento da diferenciação. Posteriormente, a heterocromatinização de outros DNAs repetitivos não presentes na RON atuou na alteração das morfologias dos cromossomos ZW. Nas espécies C. gomesi e C. alipioi a heterocromatinização do W é intensa, a RON sofreu nova transposição e é observada em condição autossômica. Ainda, foi discutido o isolamento biogeográfico e a diferenciação dos cromossomos sexuais em Characidium com eventos essenciais ao isolamento reprodutivo e especiação do grupo.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 410668.pdf: 610134 bytes, checksum: 96d58c78aa5915846ec6c97a8caffdcb (MD5) Previous issue date: 2009-03-23 / A tuberculose (TB) ? considerada uma amea?a ? sa?de p?blica mundial; segundo a Organiza??o Mundial da Sa?de, cerca de dois milh?es de pessoas morrem anualmente em conseq??ncia desta doen?a. Uma das caracter?sticas mais importantes do pat?geno causador da TB ? a sua capacidade de persistir nos tecidos do hospedeiro por um longo per?odo em um estado de lat?ncia, tamb?m conhecido como persist?ncia. A import?ncia do estado de lat?ncia ? sobreviv?ncia do bacilo tem sido um atrativo fator para o desenvolvimento de trabalhos que caracterizem com maior profundidade esta fase da infec??o por M. tuberculosis. O entendimento do modo de a??o e o papel das enzimas da rota de salvamento de pirimidinas em M. tuberculosis poderia revelar novos alvos para o desenho racional de agentes anti-TB potentes e seletivos capazes de, se poss?vel, prevenir a progress?o e a reativa??o da doen?a. A citidina deaminase (CDA, EC 3.5.4.5), uma enzima evolutivamente conservada da rota de salvamento das pirimidinas, catalisa a deaminacao hidrol?tica de citidina e 2'-desoxicitidina para formar uridina e 2'-desoxiuridina, respectivamente. O prov?vel gene da CDA (cdd, Rv3315c) de M. tuberculosis foi clonado, seq?enciado e expresso em c?lulas de Escherichia coli BL21(DE3). O protocolo de purifica??o da CDA recombinante de M. tuberculosis (MtCDA) produziu 35 mg de prote?na homog?nea a partir de 10 g de c?lulas. A an?lise de espectrometria de massas, seq?enciamento N-terminal e cromatografia por gel filtra??o confirmaram a massa molecular prevista, a identidade e o estado oligom?rico de MtCDA, que foi estimada em 52,99 kDA. Estes resultados e os de alinhamento m?ltiplo de seq??ncias sugere que MtCDA ? um homotetr?mero em solu??o. Medidas de cin?tica em estado estacion?rio da CDA geraram os seguintes par?metros: valores de KM e kcat de, respectivamente, 1004 uM e 4,8 s-1 para citidina, e 1059 uM e 3,5 s-1 para 2'- desoxicitidina. A depend?ncia dos valores de kcat e kcat/KM em fun??o do pH para citidina indicam que a protona??o de um ?nico grupo ioniz?vel com valor de pKa de 4,3 elimina a atividade, e a protona??o de um grupo com pKa de 4,7 reduz a liga??o ao substrato. Foram obtidos cristais de CDA utilizando o m?todo de difus?o de vapor em gota pendente. A demonstra??o de que o locus Rv3315c codifica uma prote?na com atividade CDA em M. tuberculosis ? o primeiro passo para entender o papel do produto deste gene e dever? ajudar no desenho de agentes anti-TB e vacinas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 386733.pdf: 743672 bytes, checksum: c329d7b51647dead043fdc30dd374c25 (MD5) Previous issue date: 2006-01-16 / A clorpropamida ? uma droga hipoglicemiante que atua bloqueando os canais de K+ ATP-dependentes, provocando com isto um aumento na libera??o de insulina. Seguindo-se uma s?rie de experimentos a cerca da frutose-1,6-bisfosfato, avaliando seus efeitos antiinflamat?rio e hipoglicemiante, foi proposto, para esta droga, um mecanismo de a??o associado ao bloqueio de canais de K+ ATP-dependentes. Em um estudo comparativo entre a clorpropamida e a frutose-1,6-bisfosfato foi observado um efeito imunomodulador do agente hipoglicemainte em cultura de linf?citos. Este trabalho tem por objetivo avaliar os efeitos imunomoduladores das drogas hipoglicemiantes orais em cultura de linf?citos de volunt?rios sadios e pacientes diab?ticos do tipo 2. Para isso foram realizados experimentos in vitro e ex vivo utilizando as seguintes drogas hipoglicemiantes: sulfonilur?ias, metformina e a terapia combinada de ambas. No estudo ex vivo foi acrescentado um grupo de pacientes diab?ticos que controlavam a glicemia atrav?s de dieta apropriada. Os resultados obtidos demonstraram que existe um efeito inibidor da prolifera??o celular por parte dos anti diab?ticos orais, tanto das sulfonilur?ias quanto da metformina, e que esse efeito apresenta correspond?ncia em ambos experimentos. Os pacientes diab?ticos do tipo 2 que fazem uso exclusivo da dieta tamb?m tiveram uma redu??o significativa da prolifera??o celular quando submetidos ao agente imunoestimulador. A partir disto podemos sugerir que as manifesta??es inflamat?rias relacionadas ao diabetes mellitus do tipo 2 podem estar sofrendo influ?ncia da terap?utica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 386732.pdf: 399583 bytes, checksum: fd819014b2d965768d8d68375135c0ff (MD5) Previous issue date: 2006-09-14 / O CD14 ? uma prote?na de 53-55kD que n?o possui por??o citoplasm?tica e atua como um receptor de uma ampla gama de microorganismos onde reconhece diferentes estruturas de lipopolissacar?deos (LPS). O CD14 pode ser encontrado sob duas formas: na superf?cie de mon?citos, macr?fagos e neutr?filos (mCD14 ou CD14 de membrana) ou na forma de CD14 sol?vel (sCD14). Tanto o mCD14 quanto o sCD14 desempenham um importante papel na gera??o de uma resposta imune inata contra pat?genos bacterianos. A ativa??o do sistema imune inato por componentes bacterianos pode ser modulada pela diferente express?o do mCD14 e varia??es do sCD14. Sugere-se que a express?o aumentada do CD14 pode trazer benef?cios para pacientes com sepse. Um polimorfismo de nucleot?deo ?nico (SNP) de transi??o de uma citosina para uma timina na posi??o -260 na regi?o promotora do gene CD14 foi identificado. Este SNP parece ter um papel significante na express?o do CD14. De fato, existem estudos sugerindo que homozigotos TT apresentam um aumento na densidade do mCD14 e nos n?veis de sCD14 quando comparados aos indiv?duos que carregam o alelo C. O objetivo deste estudo foi verificar se o polimorfismo -260C>T do promotor do gene que codifica para o CD14 interfere na sua express?o, e se se relaciona com o desfecho de sobrevida em pacientes s?pticos, al?m de verificar se existe diferen?a significativa na express?o do CD14 entre indiv?duos saud?veis e pacientes s?pticos. Observamos que a express?o do CD14, medida pela densidade de mCD14 e n?veis de sCD14, estava aumentada em pacientes s?pticos quando comparados com indiv?duos saud?veis e tamb?m detectamos que o gen?tipo TT estava associado com altos n?veis de mCD14. N?s verificamos, ap?s incuba??o com LPS, que existe um aumento significativo na densidade de mCD14. Esta foi a primeira vez em que pacientes s?pticos foram avaliados para o polimorfismo -260C>T, express?o do CD14 e mortalidade. Entretanto, nenhuma associa??o estatisticamente significativa entre estas tr?s vari?veis foi encontrada. Nossos resultados est?o de acordo com estudos pr?vios, nos quais o aumento da express?o do CD14 pode estar associado com o gen?tipo TT, embora isto n?o tenha influenciado o desfecho cl?nico dos pacientes s?pticos.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-03T12:52:10Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-04T11:34:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T11:34:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Lucas Breseghelo do Nascimento - 2010.pdf: 1202324 bytes, checksum: 56c8aee88b007b5162aa73419f965d0d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2010-08-31 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The fungus Sclerotinia sclerotiorum is among the most successful pathogens, omnivores, and without specific hosts, is considered one of the most important fungal pathogens in the world. Is distributed in all producing regions, temperate, subtropical or tropical. The fungus produces resistant structures called sclerotia on the surface and within tissues colonized, they returned to the soil with crop residues and are responsible for the survival of the fungus in the same area for up to eight years. The objectives of this study were to quantify the variability within and between populations of the fungus S. sclerotiorum in bean and soybean crops in different producing places of those varieties. 46 isolates were collected of S. sclerotiorum in six locals of grain production in different regions of Brazil. The sites chosen were Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina, PR and Santo Antonio de Goiás-GO. All areas of the original host of the gathering was the bean with the exception of Londrina-PR in which the host was soybeans. A population study of the fungus through RAPD markers using 13 primers was carried out for the analysis of genetic variability of the fungus. In parallel, tests were also made for the the Mycelial compatibility groups among isolates and test production of hydrolytic enzymes. The statistical analysis was performed using the Arlequin software, which indicated variability among populations of 16.94% and 83.06% within populations. Were found 10 mycelial compatibility groups without specific populations .Enzyme activities performed indicated significant differences within the populations of all enzymes, a comparison between populations also showed significant differences among populations in polygalacturonases, 1,3-β-glucanase and xylanase. The results indicate a high level of variability within populations and low variability among populations. / O fungo Sclerotinia sclerotiorum está entre os fitopatógenos mais bem sucedidos, onívoros e sem hospedeiros definido, é considerado um dos patógenos fúngicos mais importantes no mundo. Está distribuído em todas as regiões produtoras, sejam elas temperadas, subtropicais ou tropicais. O fungo produz estruturas de resistência denominadas escleródios, na superfície e no interior dos tecidos colonizados. Estes retornam ao solo com os resíduos da cultura e são responsáveis pela sobrevivência do fungo na mesma área por até 8 anos. Os objetivos desse trabalho foram quantificar a variabilidade intra e inter populacional do fungo S. sclerotiorum em culturas de feijão e soja de diferentes localidades produtoras dessas espécies. Para isso foram coletados 46 isolados de S. sclerotiorum de seis locais de produção de grãos em diferentes regiões do Brasil. Os locais escolhidos foram Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina-PR e Santo Antonio de Goiás-GO em todas as áreas o hospedeiro de origem da coleta foi o feijoeiro, com exceção de Londrina-PR, na qual o hospedeiro foi soja. Foi feito um estudo populacional do fungo através de marcadores do tipo RAPD com a utilização de 13 primers para a análise da variabilidade genética do fungo. Paralelamente também foram feitos testes para a formação de grupo de compatibilidade micelial entre os isolados e testes de produção de enzimas hidrolíticas. A análise estatística dos dados se deu através do programa Arlequin, o qual indicou variabilidade de 16,94% entre populações e 83,06% dentro de populações. Foram formados 10 grupos de compatibilidade micelial sem especificidade de populações. As atividades enzimáticas realizadas indicaram diferenças significativas dentro de populações de todas as enzimas. A comparação entre populações também indicou diferenças significativas entre populações nas enzimas poligalacturonases, 1,3-β-glucanase e xilanase. Os resultados indicaram baixo nível de variabilidade entre populações e alta variabilidade dentre as populações.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:14:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-03-20 / Paracoccidioides spp. are pathogens of Paracoccidioidomycosis a systemic mycosis that affects about 10 million people in endemic regions. The incidence of the disease is restricted to Latin America and most cases are found in Brazil. The disease is characterized by chronic granulomatous inflammation, and patients may present with a wide spectrum of clinical manifestations. After inhalation of conidia, the installation of fungus in the lungs, which subsequently through hematogenous route may cause an infection spreads. Hematogenous fungal infections represent a serious health problem, involving hospitalized patients with predisposing conditions that lead to a high mortality rate. Fungemia corresponds to isolation of fungi in the bloodstream and occurs mainly in immunocompromised patients. Yeasts have been increasingly present as etiological agents fungemia including Candida albicans and other species such as Candida non- albicans. In this study, Paracoccidioides spp. was isolated from a case of fungemia. So far this is the first molecular study of a case of fungemia caused by this fungus. In order to identify the molecular factors associated with this specific phenotype, a comparative proteomic analysis was performed. The samples were analyzed by nanoscale liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (nanoUPLC - EPM), where the soluble proteins of fungemia were compared with strain Pb01 -like proteins. 206 proteins regulated positively and negatively regulated 183 were identified. Among the positively regulated protein, 22 % were related to cellular metabolism, 15 % related to protein synthesis and 12% energy. Of phenotypic characterization tests, which showed a better adaptation of isolated Pb9840 blood were also conducted. With this work we propose that the isolated Pb9840 developed mechanisms to better installing the bloodstream and causing the fungemia. The study of the proteomic profile of this isolate may elucidate the virulence mechanisms used by this fungus during fungemia and / or hematogenous spread. / Paracoccidioides spp. são agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose uma micose sistêmica que afeta cerca de 10 milhões de pessoas nas regiões endêmicas. A incidência da doença é restrita à América Latina e a maioria dos casos são encontrados no Brasil. A doença é caracterizada por uma inflamação granulomatosa crônica, e os pacientes podem apresentar um amplo espectro de manifestações clínicas. Após a inalação de conídios, ocorre a instalação do fungo nos pulmões, que posteriormente através de rota hematogenica pode causar uma infecção disseminada. Infecções fúngicas hematogênicas representam um grave problema de saúde, envolvendo pacientes hospitalizados com condições predisponentes que levam a uma alta taxa de mortalidade. Fungemia corresponde ao isolamento de fungos na corrente sanguínea e ocorre principalmente em pacientes imunossuprimidos. As leveduras têm sido cada vez mais presente como agentes etiológicos de fungemia, incluindo Candida albicans e outras espécies, como Candida não-albicans. No presente estudo, Paracoccidioides spp. foi isolado de um caso de fungemia. Até o momento esse é o primeiro estudo molecular de um caso de fungemia causado por este fungo. A fim de identificar os fatores moleculares associados a este fenótipo específico, uma análise proteômica comparativa foi realizada. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida de nanoescala acoplada a espectrometria de massa em tandem (nanoUPLC - EPM), onde as proteínas solúveis da estirpe fungemia foram comparadas com proteínas do Pb01. Foram identificadas 206 proteinas reguladas positivamente e 183 reguladas negativamente. Dentre as proteínas reguladas positivamente 22% estavam relacionadas com o metabolismo celular, 15% relacionadas com síntese proteica e 12% produção de energia. Foram realizados também testes de caracterização fenotípica, que demonstraram uma melhor adaptação do isolado Pb9840 ao sangue. Com o presente trabalho podemos propor que o isolado Pb9840 desenvolveu mecanismos para melhor de instalar na corrente sanguínea e assim causar o quadro de fungemia. O estudo do perfil proteômico deste isolado poderá elucidar os mecanismos de virulência utilizados por este fungo durante fungemia e / ou disseminação hematogênica.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 389155.pdf: 120483 bytes, checksum: 667f3c4666244e3dd47637233492ec4f (MD5) Previous issue date: 2007-01-19 / Diferentes estudos t?m demonstrado que a Hsp70 de Mycobacterium tuberculosis (TBHsp70) pode induzir a remiss?o de modelos de doen?as auto-imunes. Entretanto, o mecanismo pelo qual esta prote?na exibe propriedades imunorregulat?rias necessita ser elucidado. Neste estudo, nos perguntamos se a TBHsp70 poderia suprimir a rejei??o em um sistema de transplante alogeneico de tumor. N?s observamos que enquanto camundongos BALB/c (H-2d) rejeitam melan?citos B16F10 (H-2b) implantados de forma subcut?nea, animais BALB/c tratados com TBHsp70 n?o rejeitam o enxerto de forma similar aos tratados com Dexametasona (DEXA). O tratamento com TBHsp70 inibiu a prolifera??o de c?lulas T induzidas por mit?geno no linfonodo drenante e, finalmente, c?lulas T CD4, CD25 e Foxp3 foram observadas no s?tio de enxertia e nos linfonodos drenantes de animais tratados com esta prote?na. Nossos resultados apontam para um papel imunossupressor da TBHsp70, e sugerem que a indu??o de c?lulas T regulat?rias poderia ser o mecanismo pelo qual esta prote?na suprime a rejei??o ao enxerto

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-10T17:07:26Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cintia Ferreira da Paixão - 2002.pdf: 501587 bytes, checksum: f00ca727b973e5102f7af9c24d03a9ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2014-11-10T17:07:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cintia Ferreira da Paixão - 2002.pdf: 501587 bytes, checksum: f00ca727b973e5102f7af9c24d03a9ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-10T17:07:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cintia Ferreira da Paixão - 2002.pdf: 501587 bytes, checksum: f00ca727b973e5102f7af9c24d03a9ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2002-12-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The actinomycets are Gram-positive bacterias, aerobic with rich DNA in G+C (larger than 60%) and immobile. They are found practically in all the environment, forming ramified filaments or hyphae that persist in the mycelium form. The Streptomyces constitutes 90% of the isolated actinomycets of the soils, in spite of they are also found in aquatic atmospheres and interior of some plants. They stand out for the diversity of production of hidrolytics enzymes and antibiotics, 70% of the know antibiotics are produced by those microorganisms. Aiming to clone genes with biotechnological interest, a genomic libraries of the Streptomyces sp Y7 isolated of the soil of Cerrado was constructed. After the analyses of the sequences of the genomics libraries of Streptomyces sp Y7, it was selected a plasmid named pFS8, that displayed similarity with ftsH genes. The ftsH gene encodes a metalloprotease ATPase and Zn+2 dependent, belongs to the AAA family (ATPases associated with a variety of cellular activities). It is involved with several cellular functions such as secretory proteins export and degradation of transcriptional factors (sigma 32 and Lambda CII). The data of sequencing showed that the ftsH gene was incomplete. In order to characterize if the product of this gene showed biological activity, it was made tests to evaluate the functionality of the fusions proteins in an ftsH-negative E.coli strain AR3291. AR3291 cells transformed with this plasmid showed a general growth advantage upon the cells AR3291. The protein produced did not present toxicant effects for cells AR3289, which had normal ftsH gene. The truncated protein obtained was also analyzed to prediction of the structure “coiled-coil”, that is common to the other FtsH studied, and the results showed those truncated proteins did nor form “coiled-coil” structure. We also tested whether fusion proteins decreased or inhibited the defective transfer of citosolic proteins. / Os actinomicetos são bactérias Gram-positivas, aeróbicas e com DNA rico em G+C (mais que 60%). São encontrados em quase todos ambientes, formando hifas ramificadas que persistem na forma de micélio. Os Streptomyces constituem cerca de 90% dos actinomicetos isolados de solos, apesar de serem encontrados em ambientes aquáticos e no interior de algumas plantas. Os Streptomyces são grandes produtores de enzimas hidrolíticas e antibióticos, 70 % dos antibióticos conhecidos são produzidos por esses microrganismos. Com o objetivo de clonar genes de interesse biotecnológico, foi construída uma biblioteca genômica de Streptomyces sp Y7 isolado de solo de Cerrado. A partir das análises das seqüências das bibliotecas genômicas foi selecionado o plasmídeo pFS8 que apresentava homologia com o gene ftsH. O gene ftsH codifica uma metaloprotease ATP Zn2+ dependente, pertencente a família AAA (ATPases Associadas a diversas Atividades celulares). Os dados do seqüenciamento mostraram que o gene ftsH clonado estava incompleto. A fim de caracterizar o produto do gene ftsH, foram feitos testes para avaliar a funcionalidade dessas proteínas de fusão em células mutadas para o gene ftsH (AR3291). A proteína de fusão produzida por pFS9 é capaz de recuperar o crescimento das células AR3291 e a proteína produzida por pFS8 não apresenta efeitos tóxicos para células AR3289, que não têm mutação para o gene ftsH. Também foi analisado se as proteínas produzidas por pFS8 e pFS9 formam a estrutura “coiled coil” que é comum aos outros organismos estudados. Outra característica analisada nesse trabalho foi a capacidade da proteína produzida por pFS9 diminuir ou inibir a translocação anormal de proteínas para o meio externo. Os resultados mostram que essa proteína não inibe a translocação de proteínas para o meio externo, enquanto que a proteína produzida por pFS8 apresenta efeito contrário a proteína produzida por pFS9.