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Previous issue date: 2012-03-13 / FACEPE CNPQ / O gênero Leishmania compreende 30 espécies de protozoários flagelados
pertencentes a famíla Trypanosomatidae, donde 20 são patogênicas ao homem. Esses
organismos apresentam ciclos de vida complexos e peculiaridades moleculares frente à
maioria dos eucariontes, como a ausência de regulação transcricional. Desse modo, a
regulação da expressão gênica nesses parasitas é efetuada em etapas póstranscricionais,
dentre essas a mais importante é o processo de iniciação da tradução dos
mRNAs, onde diferentes fatores denominados eIFs (eukariotic initiation factors) estão
envolvidos. Dentre esses fatores se destaca o complexo eIF4F com função de promover o
reconhecimento e ligação de RNAs maduros aos ribossomos. Tal complexo é composto
de três sub-unidades: eIF4A (RNA helicase); eIF4E (proteína de ligação ao cap); e eIF4G
(proteína multidomínio estruturadora do complexo eIF4F). Em tripanossomatídeos se
sabe da existência de cinco homólogos da sub-unidade eIF4G distintos (EIF4G1 ao G5),
contudo, pouco se sabe sobre a ocorrência e funções celulares desses homólogos.
Portanto o objetio do presente trabalho foi avaliar a expressão dos diferentes homólogos
do eIF4G durante o ciclo de vida de Leishmania amazonensis, caracterizando as
possíveis modificações pós-traducionais por fosforilação que possam estar agindo sobre
tais fatores, uma vez que em eucariotos superiores mecanismos de regulação global da
tradução por fosforilação dos eIFs via MAP quinases já são conhecidos. Para tal, foram
realizadas culturas de L. amazonensis nas formas promastigota e amastigota-axênicas, e
os extratos protéicos provenientes de diferentes fases do crescimento foram analisados
através de Western blot. Foi observado que os homólogos de eIF4G estão presentes
durante todo o ciclo de vida de L. amazonensis. Podendo ser observado que os EIF4G1,
G4 e G5 apresentaram mais de uma isoforma proteica sugestiva de possíveis
modificações pós-traducionais desses homólogos. Em conseguinte, a expressão de
EIF4G3 e EIF4G4 foi analisada em condições especiais de cultivo na presença de seis
inibidores diferentes, contudo nenhuma dessas condições alterou a expressão desses
fatores, revelando que essas proteínas são bastante estáveis e possuem tempo de meiavida
prolongado. Posteriormente, o mapeamento in silico de sítios de fosforilação por
MAP quinases nos EIF4Gs de Leishmania spp. demonstra a existência de sítios de
fosforilação específicos em todos os homólogos E a purificação de fosfoproteínas
confirma a existência de mecanismos de fosforilação agindo nos EIF4G3 e EIF4G4.
Esses resultados auxiliam no esclarecimento dos mecanismos moleculares, até então
obscuros, envolvidos na regulação da expressão gênica pós-transcricional característica
desses organismos.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/12341 |
| Date | 13 March 2012 |
| Creators | Nascimento, Larissa Mélo do |
| Contributors | Melo Neto, Osvaldo Pompílio de, Reis, Christian Robson de Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Breton |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil, http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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