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Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os papilomavírus constituem um grupo de pequenos vírus de DNA de dupla fita
caracterizados por induzirem a formação de lesões que são em geral benignas, podendo
regredir naturalmente ou se transformar em tumores malignos, gerando importantes perdas
econômicas aos criadores. Os BPVs tipo 1 e 2 são carcinogênicos e estão relacionados com o
câncer da bexiga urinária e o tumor sarcóide em eqüino. Como existem muitos animais já
infectados e afetados pela doença, uma estratégia vacinal terapêutica torna-se necessária e
muito aguardada pelos criadores. A imunização genética é uma estratégia bastante eficaz na
indução de imunidades humoral e celular em grande número de modelos animais. O foco
deste trabalho foi realizar a construção e avaliação funcional in vitro do vetor vacinal
pCIE5sintB1/B2, usando o gene E5 otimizado para expressão em célula de mamífero. As
sequências do gene E5 dos BPVs 1 e 2 foram obtidas do GeneBank e analisadas quanto a suas
diferenças e ao uso preferencial de códons, sendo então construída uma sequência otimizada a
qual foi sintetizada (E5sintB1/2), contendo um epitopo AU1 na região N-terminal. O gene
E5sint foi então clonado no vetor de expressão pCI-neo usando sítios de restrição inseridos no
gene sintético. A construção pCIE5sintB1/2 foi seqüenciada para confirmação. Para análise da
funcionalidade o vetor pCIE5sintB1/2 foi utilizado para transfectar em células 293, usando o
Kit TransFast. Após 48 horas de cultivo, as células foram coletadas e os extratos celulares
processados para preparação do extrato protéico celular e de RNA total. A expressão gênica
foi avaliada por meio de RT-PCR, SDS-PAGE, Dot Blot e Western Blot (usando anticorpo
contra o epítopo AU1). Os resultados obtidos mostraram que apenas as células transfectadas
com a construção pCIE5sintB1/B2 apresentaram transcrição do gene E5 e conseqüente
produção da proteína. Estes resultados confirmam a expressão do antígeno vacinal em células
de mamífero
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufpe.br:123456789/6870 |
| Date | 31 January 2010 |
| Creators | LIRA, Rafaelle Cavalcante de |
| Contributors | FREITAS, Antonio Carlos de |
| Publisher | Universidade Federal de Pernambuco |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFPE, instname:Universidade Federal de Pernambuco, instacron:UFPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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