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Previous issue date: 2012-10-24 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / A sepse ? uma doen?a complexa, de alta gravidade e durante o seu
desenvolvimento pode ocorrer eventos inflamat?rios graves, que podem levar o
paciente ao ?bito. Inibidores de peptidases isolados de sementes de leguminosas
est?o sendo estudados devido suas variadas atividades biom?dicas ou
farmacol?gicas. Nesse sentido, o presente estudo consistiu na avalia??o das
atividades multifuncionais do inibidor de tripsina presente nas sementes de Erythrina
velutina (EvTIb). Dois inibidores de tripsina foram purificados por fracionamento com
sulfato de am?nio (30-60%), cromatografia de afinidade em tripsina-sepharose e
cromatografia de fase reversa. Os inibidores purificados foram denominados de
EvTIa e EvTIb e suas massas moleculares determinadas por espectrometria de
massa por electrospray (ESI) foram: 19.228,16 Da e 19.210,48 Da, respectivamente.
Dentre eles, o EvTIb apresentou maior atividade espec?fica para tripsina e maior
percentual de rendimento de extra??o, sendo, portanto, o escolhido para as an?lises
adicionais. Os fragmentos desse inibidor gerados por tratamento enzim?tico com
tripsina e pepsina foram analisados por espectrometria de massa MALDI-ToF-ToF,
permitindo elucidar sua estrutura prim?ria parcial. O EvTIb exibiu uma atividade de
inibi??o do tipo n?o-competitiva para a tripsina com IC50 de 22 nmol.L-1 e constante
de inibi??o (Ki) de 10 nmol.L-1. Al?m da atividade de inibi??o para tripsina, EvTIb
tamb?m inibiu o fator Xa e a elastase neutrof?lica, por?m n?o inibiu trombina,
quimotripsina ou peptidase 3. EvTIb se manteve est?vel a varia??o de pH e
temperatura. EvTIb n?o foi citot?xico e n?o inibiu o crescimento bacteriano de
Escherichia coli e Staphylococcus aureus. EvTIb foi capaz de prolongar o tempo de
coagula??o de maneira dose-dependente. Finalmente, observou-se que EvTIb foi
capaz de restabelecer os n?veis hemost?ticos, inibir a migra??o leucocit?ria em
camundongos s?pticos e diminuir a secre??o de TNF-α e n?o teve a??o sobre a
libera??o de IL-6. Por outro lado, EvTIb promoveu um aumento na libera??o de IFN-
α e IL-12. Esses dados sugerem que EvTIb pode constituir em uma nova mol?cula
com potencial de uso no tratamento da sepse e doen?as relacionadas ? coagula??o
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.ufrn.br:123456789/12596 |
| Date | 24 October 2012 |
| Creators | Machado, Richele Jana?na de Ara?jo |
| Contributors | CPF:41305655400, http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null, Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes, CPF:96728647449, http://lattes.cnpq.br/2929963416385218, Franco, Oct?vio Luiz, CPF:75523400378, http://lattes.cnpq.br/8598274096498065, Santos, Elizeu Antunes dos |
| Publisher | Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Programa de P?s-Gradua??o em Bioqu?mica, UFRN, BR, Bioqu?mica; Biologia Molecular |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFRN, instname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte, instacron:UFRN |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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