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Análise do efeito causado pelos genes quitinase e catepsina dos baculovírus CfDefNPV e AcMNPV inseridos no genoma do Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthlea@bce.unb.br) on 2008-10-24T16:48:55Z
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2008_AnabeleALima.pdf: 2370665 bytes, checksum: 623c68923c82ff2824292fd7e4052e47 (MD5) / Baculovírus são vírus de DNA fita dupla, específicos de artrópodes, que têm
sido utilizados, principalmente, como agentes de controle biológico de insetos-praga e
como vetores de expressão de genes heterólogos. A utilização do baculovírus Anticarsia
gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) no controle da lagarta da soja,
A. gemmatalis, no Brasil, é o maior exemplo mundial de sucesso de um vírus utilizado
como bioinseticida. Uma das características interessantes do genoma viral do AgMNPV
está na ausência dos genes quitinase (v-chiA) e catepsina (v-cath), que por sua vez estão
presentes na maioria dos genomas dos baculovírus pertencentes ao grupo I do gênero
Nucleopolyhedrovirus (NPV). A ausência dos genes v-chiA e v-cath pode ser
responsável pela ausência de liqüefação de larvas de A. gemmatalis mortas pela
infecção do AgMNPV. Este trabalho teve como objetivo a construção de AgMNPV
recombinantes com a introdução individual ou em conjunto dos genes v-chiA e v-cath,
derivados dos vírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV)
e Choristoneura fumiferana defective nucleopolyhedrovirus (CfDefNPV) no genoma
viral, para a observação dos efeitos causados pela infecção viral em larvas de A.
gemmatalis, comparativamente ao vírus AgMNPV selvagem. O DNA plasmidial do
vetor de transferência, contendo os dois genes derivados do vírus CfDefNPV, foi cotransfectado
com o DNA de um vírus recombinate derivado do AgMNPV, o vírus
vAgGalA2, em células A. gemmatalis (UFL-AG-286). O novo vírus recombinante
construído (vAgp2100Cf.v-chiA/v-cath) foi isolado pelo método de diluição seriada, em
placa de 96 poços. O vAgp2100Cf.v-chiA/v-cath foi capaz de promover a liqüefação do
corpo das larvas de A. gemmatalis após a morte das mesmas. Porém, não houve
diferenças significativas com relação à virulência, e conseqüentemente, o tempo de
morte das larvas comparado com o AgMNPV selvagem. Os AgMNPV recombinantes possuindo apenas um dos genes (v-chiA ou v-cath) ainda não foram isolados e, desta
forma, não foi possível analisar o efeito causado por esses genes separadamente, em
larvas de A. gemmatalis.
_____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are double-stranded DNA viruses, arthropod-specific that have
been mainly used as biological-control agents of insect pests and as heterologous gene
expression vectors. The use of the Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus
(AgMNPV) in Brazil, for the control of the velvetbean caterpillar is the most successful
example of a virus used as a biological pesticide. One of the interesting features of the
AgMNPV genome is the absence of chitinase (v-chiA) e catepsin (v-cath) genes, which
in turn are present in most of the genomes of baculoviruses belonging to group I of the
Nucleopolyhedrovirus genus. The absence of v-chiA and v-cath genes may be
responsible for the lack of liquefaction of A. gemmatalis larvae killed by AgMNPV. The
aim of this work was the construction of recombinant AgMNPV with the introduction
of each gene (v-chiA or v-cath) alone or both of them, derived from the baculoviruses
Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) and Choristoneura
fumiferana defective nucleopolyhedrovirus (CfDefNPV) into the AgMNPV genome and
observation of the effects caused by the viral infection in A. gemmatalis larvae,
comparared with the wild-type AgMNPV infection. A recombinant transfer vector
DNA, containing both genes derived from CfDefNPV, was co-transfected with DNA
from vAgGalA2 virus, derived from AgMNPV, in A. gemmatalis (UFL-AG-286) cells.
The new recombinant AgMNPV virus construct (vAgp2100Cf.v-chiA/v-cath) was
isolated using the serial dilution method in 96 well-plates. The vAgp2100Cf.v-chiA/vcath
was able to promote liquefaction of infected A. gemmatalis larvae soon after death.
However, we have not detected significant differences with regard to virulence, and
consequently, the time of death, when compared with the wild-type AgMNPV. The
AgMNPV recombinants, containing only one of the genes (v-chiA or v-cath) have not
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been isolated yet, and therefore, it was not possible to analyse the effects caused from
this genes separately in A. gemmatalis larvae.

Identiferoai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/1317
Date06 1900
CreatorsLima, Anabele Azevedo
ContributorsRibeiro, Bergmann Morais
Source SetsIBICT Brazilian ETDs
LanguagePortuguese
Detected LanguageEnglish
Typeinfo:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis
Sourcereponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB
Rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess

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