Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-06-21T18:23:47Z
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Previous issue date: 2017-09-17 / O amendoim cultivado (Arachis hypogaea L.) possui alta qualidade nutricional, sendo caracterizado como uma rica fonte de energia e aminoácidos. Sua produtividade é limitada por vários fatores, dentre eles a suscetibilidade ao nematoide das galhas (Meloidogyne arenaria). Em contrapartida, os parentes silvestres do amendoim (Arachis spp.) apresentam uma grande variabilidade genética, sendo uma fonte potencial de alelos de resistência para programas de melhoramento genético. Estudos do transcritoma da interação de M. areanaria com espécies silvestres de amendoim resistentes, como, A. duranensis e A. stenosperma, têm apontado alguns genes candidatos potencialmente envolvidos na resistência ao ataque deste patógeno. A partir desses estudos, diversos genes candidatos foram selecionados e sua expressão diferencial durante a interação foi posteriormente validada. O objetivo do presente trabalho é compreender o papel biológico dos genes candidatos AdEXLB8, AsDUF e AsLIP, oriundos de espécies silvestres, na resistência ao nematoide das galhas (Meloidogyne spp), por meio de sua superexpressão em raízes transgênicas de amendoim e soja (Glycine max), espécies suscetíveis. Para tanto, as ORFs (Quadro de Leitura Aberta) desses genes foram clonadas no vetor binário pPZP-201BK-EGFP sob o controle do promotor de actina e introduzidas no pecíolo de folhas de amendoim ou no hipocótilo de soja, por meio de transformação com uma linhagem silvestre de Agrobacterium rhizogenes. Raízes transgênicas de amendoim e soja foram posteriormente inoculadas com M. arenaria e M. incognita, respectivamente, e avaliadas 60 dias após a inoculação quanto ao desenvolvimento da doença. Raízes superexpressando cada um dos três genes candidatos demonstraram, tanto em amendoim como em soja, uma redução significativa no número de galhas e formação de ovos quando comparadas com raízes transformadas somente com o vetor vazio. A análise funcional in planta dos efeitos fenotípicos da superexpressão de AdEXLB8, AsDUF e AsLIP, em raízes transgênicas de amendoim e de soja infectadas com diferentes espécies de Meloidogyne, indicam um envolvimento desses genes na resistência ao nematoide das galhas. / Cultivated peanut (Arachis hypogaea L.) has high nutritional quality, being a source of energy and amino acids. Peanut productivity is limited by several constraints, including susceptibility to the root-knot nematode (Meloidogyne arenaria). Conversely, peanut wild relatives (Arachis spp.) has high genetic variability, being a potential source of resistance alleles for breeding programs. Previous transcriptome studies of the interaction between M. areanaria and resistant wild peanut species, such as A. duranensis and A. stenosperma, revealed putative candidate genes involved in the resistance to M. arenaria. From these studies, several genes were selected and their differential expression during the interaction was further validated by qRT-PCR. The aim of the present work was to understanding the biological function of three candidate genes (AdEXLB8, AsDUF e AsLIP), isolated from wild species, in the resistance to the root-knot nematode (Meloidogyne spp.), through its overexpression in transgenic roots of two susceptible species, peanut and soybean (Glycine max). For that, the ORFs (Open Read Frames) of the genes were cloned into the binary vector pPZP-201BK-EGFP under the control of the actin promoter and introduced into the petiole of peanut leaves or into the soybean hypocotyls, via transformation with a wild Agrobacterium rhizogenes strain. Transgenic roots of peanut and soybean were subsequently inoculated with M. arenaria and M. incognita, respectively, and evaluated 60 days after inoculation according the disease development. Roots overexpressing each of the three candidate genes showed, in both peanut and soybean, a significant reduction in the number of galls and egg formation when compared to control roots transformed with the empty vector. Functional in plant analysis of the phenotypic effects of AdEXLB8, AsDUF and AsLIP overexpression in transgenic peanut and soybean roots after infection with different Meloidogyne species indicated that these genes are involved in root-knot nematode resistance.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unb.br:10482/24167 |
| Date | 23 February 2017 |
| Creators | Pereira, Bruna Medeiros |
| Contributors | Brasileiro, Ana Cristina Miranda, Souza, Nara Oliveira Silva |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UnB, instname:Universidade de Brasília, instacron:UNB |
| Rights | A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data., info:eu-repo/semantics/openAccess |
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