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Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A pele é um órgão extenso e de fácil acesso, e possui vários tipos
celulares diferentes que estão em constante renovação. Dentre estas células, alguns
tipos de células-tronco com potencial proliferativo, de autorrenovação e de
diferenciação, são responsáveis pela manutenção da homeostase deste órgão e
pela cura de feridas. Estudos anteriores sugerem a existência de um nicho de
células-tronco presente no “bulge” dos folículos pilosos, que contém populações
positivas para CD200 e CD34. Este trabalho foi realizado com o intuito de: 1- Obter
tecidos derivados da pele de cães adultos e fetos, isolar e cultivar as células in vitro
derivadas destes, empregando um método de isolamento celular através de digestão
enzimática simples 2- Comprovar a presença de células do “bulge”, positivas para
CD200 e CD34 após cultivo celular in vitro, comparando com a análise do tecido;
Uma coloração por hematoxilina e eosina foi realizada da pele de cães adultos e
fetos, e biopsias e células cultivadas in vitro foram caracterizadas pela presença das
proteínas CD200 e CD34 através de imunofluorescência, imunocitoquímica e
citometria de fluxo. Os resultados da imunofluorescência foram negativos para
ambos CD200 e CD34 nas peles de feto e adulto. Na imunocitoquímica, as células
foram positivas para CD34 e CD200, tanto em fetos quanto adultos. Adicionalmente,
o marcador de pluripotência OCT4 foi testado, sendo expresso em células de feto.
Por citometria de fluxo, a porcentagem média de células marcadas duplamente por
CD200 e CD34 nos adultos foi de 3,1% e nos fetos de 0,33% (n=3). A marcação
somente por CD200 foi encontrada somente nos adultos, sendo de 2,8% (n=3). Os
resultados sugerem ser possível a obtenção de células-tronco do “bulge” do folículo
piloso através do método de digestão enzimática simples, utilizado neste trabalho.
Este estudo é o primeiro passo para novas pesquisas que envolvam esse nicho, na
pele de cães. / Skin is an extensive and easily accessible organ, possessing various
cell types which are in constant renovation. Some stem cell types found in the skin
have the potential of self-renewal, proliferation and differentiation, processes which
are responsible for the organ’s maintenance of homeostasis and the healing of
wounds. Previous studies suggested the presence of a stem cell niche at the bulge
region of the hair follicle, which contains cell populations positive for CD200 and
CD34. Thus, this work sought to identify these cell populations in canine cultures
using the following methods: 1. 1- Collecting samples of adult and fetus canine skin,
isolating and culturing these cells in vitro using a method of simple enzymatic
digestion; 2- Testing the cell cultures for CD200 and CD34 in vitro, comparing them
with analyzed tissue material. Hematoxylin and eosin staining were conducted for the
biopsies and analysis of fetal and adult canine skin, with the extracted cell cultures
being characterized for the presence of the proteins CD200 and CD34 through
immunofluorescence, immunocytochemistry and flow cytometry. In both adult and
fetal tissue samples, CD200 and CD34 immunofluorescence results were negative.
In immunocytochemistry, both fetal and adult cultures cells tested positive for CD34
and CD200. The pluripotency marker OCT4 was also tested, and was positive for
fetal culture cells. Flow cytometer results showed that, for samples with a double
staining of CD200 and CD34 the average percentage of marked cells was 3.1% in
adults and 0.33% in fetal cells (n=3). For the CD200 marker alone, positive cells were
found only in adult cultures, representing 2.8% of the total population (n=3). In
conclusion, the results suggest that obtaining bulge stem cells from both fetuses and
adults, with use of CD200 and CD34 markers, is validated through the simple
enzymatic digestion and cell culture methods utilized in this study. The present work
is the first step towards developing new research involving this niche in dogs.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unesp.br:11449/139466 |
| Date | 26 February 2016 |
| Creators | Castro, Raquel Vasconcelos Guimarães de [UNESP] |
| Contributors | Universidade Estadual Paulista (UNESP), Garcia, Joaquim Mansano [UNESP], Bressan, Fabiana Fernandes |
| Publisher | Universidade Estadual Paulista (UNESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNESP, instname:Universidade Estadual Paulista, instacron:UNESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 600, 600 |
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