Orientador: Fernando Ferreira Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T14:17:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2009 / Resumo: O estado inflamatório crônico que ocorre na doença falciforme (DF) é decorrente
de diversos fatores que se interligam e se retroalimentam, formando um ciclo inflamatório
permanente. Estudos prévios sobre as propriedades adesivas e funcionais das células são
restritos à forma homozigota do gene da HbS (SS). No entanto, trabalhos que avaliem essas
características celulares, que possam contribuir para o esclarecimento da heterogeneidade
clínica em outros grupos de DF e talassemia intermediária (TI), são escassos na literatura.
O objetivo desse trabalho foi avaliar a capacidade adesiva de células vermelhas, neutrófilos
e plaquetas, quimiotaxia dos neutrófilos, os níveis plasmáticos das citocinas inflamatórias e
o stress oxidativo na DF e ß-TI. Dessa maneira foram selecionados pacientes com DF: SS
(n=20), SC (n=20), 3 grupos com S/ß talassemia - S/ß-IVS-I-6 (T->C) (n=17), S/ß-IVS-I-5
(G->C) (n=16), S/ß-Códon39 (C??T) (n=12) - e TI homozigotos para a mutação IVS-I-6
(T->C) (n=20), acompanhados na Fundação HEMOPE. As técnicas utilizadas no
desenvolvimento desse estudo foram: ensaio de quimiotaxia (ChemoTx) para avaliação da
capacidade migratória dos neutrófilos, adesão estática para determinação da adesão basal
das células, citometria de fluxo para avaliar a produção de ROS e a expressão de moléculas
de adesão, e ELISA para determinar a atividade da superóxido dismutase (SOD) e a
dosagem das citocinas. Para avaliação de nossos resultados, todos os grupos de pacientes
foram comparados ao grupo controle AA: a adesão de neutrófilos e plaquetas mostrou-se
significativamente aumentada em todos dos grupos de DF; somente os grupos SS e SC
apresentaram capacidade quimiotática significativamente aumentada, assim como a adesão
de células vermelhas e a expressão das moléculas de adesão CD36 e CD49d. Os níveis
plasmáticos das citocinas IL1-ß, IL-6, IL-8 e TNF-a mostraram-se significativamente
aumentados no grupo SS, e nos demais grupos de DF apresentaram uma distribuição
heterogênea. Observamos um aumento significativo na produção de ROS em células
vermelhas, mononucleares e neutrófilos de todos os grupos de DF, exceto para os grupos
S/ß nas células vermelhas. Além disso, a atividade plasmática da SOD mostrou-se reduzida
nos grupos SS, SC e S/ß-Cd39. A adesão dos neutrófilos, células vermelhas e plaquetas foi
significativamente maior nos pacientes com TI, assim como a expressão das moléculas
CD36 e CD49d nas células vermelhas e a capacidade quimiotática dos neutrófilos. Nesses pacientes, a produção de ROS e os níveis plasmáticos das citocinas foram
significativamente aumentados, enquanto que a atividade enzimática da SOD foi
significativamente reduzida. Apesar da doença SC possuir uma clínica mais branda, nossos
dados sugerem que neutrófilos, glóbulos vermelhos e plaquetas desses pacientes possuem
características adesivas e quimiotáticas semelhantes às encontradas nas células de pacientes
com AF. Além disso, nossos resultados sugerem que quanto maiores os níveis de HbA na
S/ß talassemia, menor a adesão de neutrófilos, células vermelhas e plaquetas, podendo
explicar as diferenças clínicas encontradas nesses pacientes em função do genótipo. É
possível que o aumento da aderência, da capacidade quimiotática, da produção de ROS, das
citocinas e diminuição do mecanismo antioxidante, observados neste estudo, contribuam
nas complicações clínicas encontradas na ß-TI, tais como hipertensão pulmonar e úlceras
de perna. Estudos adicionais podem contribuir para o entendimento das diferenças na
apresentação clínica desses pacientes. / Abstract: The chronic inflammatory state that occurs in sickle cell disease (SCD) is due to
several factors that are interlinked and feeds back to a permanent inflammatory cycle.
Previous studies about the adhesive properties and functional cells are restricted to the
homozygous form of the HbS gene (SS). However, studies that assess the cellular
characteristics that may contribute to the clarification of clinical heterogeneity in other
groups of SCD and thalassemia intermedia (TI), are scarce in the literature. The aim of this
study was to evaluate the adhesive properties of red blood cells (RBC), platelets and
neutrophils (NS), NS chemotaxis, inflammatory cytokine plasma levels and oxidative stress
in SCD and ß-TI patients. Thus, we selected patients with different SCD genotypes: SS
(n=20), SC (n=20), three groups of HbS/ß thalassemia - HbS/ß39 (C->T) (n=12), HbS/IVSI-
5 (G->C) (n=16), and HbS/IVS-I-6 (T->C) (n=17) - and patients with homozygous
thalassemia intermedia IVS-I-6 (T->C) - followed regularly at the Fundação HEMOPE -
Brazil. The techniques used in the development of this study were: chemotaxis assay
(ChemoTx) to evaluate the migratory ability of neutrophils, basal adhesion was compared
using static adhesion assays, flow cytometry to assess the production of ROS and
expression of adhesion molecules, and ELISA to determine the superoxide dismutase
(SOD) activity and cytokine plasma levels. For evaluation of our results, all groups of
patients were compared with the AA control group: the neutrophil and platelet adhesions
were significantly increased in all groups of SCD, only the SS and SC groups showed
significant increase in the chemotactic ability, as well as the RBC adhesion and the
expression of adhesion molecules CD36 and CD49d. All the SCD groups investigated
showed an increase in IL-6 plasma levels. IL1-ß levels were significantly higher in the
S/ß-IVS-I-5 (G??C), S/ß-Cd39 and SS groups. Plasma levels of IL-8 were increased only
in the SS and SC groups, however TNF-a levels were significantly higher in SS and the
three groups with HbS-ß thalassemia. NS and mononuclear cell ROS production was
significantly increased in all SCD groups, however red blood ROS production was higher
only in the SS and SC groups. Moreover, the SOD plasma activity was shown to be reduced
in groups SS, SC and S/ß-Cd39. The NS, RBC and platelets adhesion was significantly
higher in TI patients, as well as the expression of molecules CD36 and CD49d in RBC and chemotactic ability of NS. In these patients, the ROS production and cytokines plasma
levels were significantly increased, while SOD plasma activity was significantly reduced.
Although SC disease has a milder clinical manifestations, our data suggest that
NS, RBC and platelets of these patients have chemotactic and adhesive characteristics
similar to those found in cells of patients with SS. Moreover, our results suggest that the
higher levels of HbA in S/ß thalassemia reduce the NS, RBC and platelets adhesion and
may explain the clinical differences found in these patients, according to genotype. It is
possible that the increase in the cell adherence, chemotactic capacity, ROS production, of
cytokines levels and the reduction in antioxidant mechanism, observed in this study,
contribute to several clinical complications of ß-TI, such as pulmonary hypertension and
leg ulcers. Further studies may contribute to our understanding of the differences in the
clinical presentation of these patients. / Doutorado / Medicina Experimental / Doutor em Fisiopatologia Medica
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/309318 |
| Date | 13 August 2018 |
| Creators | Bezerra, Marcos Andre Cavalcanti |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Costa, Fernando Ferreira, 1950-, Gonçalves, Marilda de Souza, Junior, Antonio Fabron, Bertuzzo, Carmen Sílvia, Grotto, Helena Zerlotti Wolf |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Médica |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 131 p. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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