Orientador: Benedito de Oliveira Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T12:44:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 1995 / Resumo: Botrocetina é uma coaglutinina de plaqueta descrita no veneno de Bothrops jararaca. Foi sugerida como um substituto para a ristocetina como medidor da interação entre o complexo GPIb-IX e o fator de von Willebrand (vWF). (Read et aI., 1978). Botrocetina de uma e duas cadeias foram descritas no veneno de B. jararaca (Fujimura et al., 1991a). A Botrocetina de duas cadeias apresenta alta homologia na sua sequência de aminoácidos com a albogreguina-B (isolada do veneno de Trimeresus albolabris), que aglutina plaquetas diretamente por se ligar à GPIb- IX de membranas de plaqueta em um sítio próximo ou identico ao do vWF (Peng et aI., 1991). Neste trabalho descrevemos a purificação e isolamento de uma proteína (SIII-3rp) do veneno de Botltrops alternatus, através de filtração em gel, cromatografia de troca ionica e HPLC em cromatografia de fase reversa em coluna C18. A proteína purificada que inibia a ligação de ristocetina ao vWF, apresentava uma única banda (28 kDa) em condições não desnaturantes quando submetida a PAGE-SDS 12,5%; após redução com DTT 0,1M foi observada uma banda com 15kDa. Microsequenciamento automático da proteína SIII-3rp foi realizado em um sequenciador automático Applied Biosystems Modelo 477 com fase de pulso liquído. A sequência N-terminal obtida foi DCPSDWSPYEG, e apresentava uma homologia de 82% com os primeiros onze resíduos das cadeias a e b da botrocetina heterodimérica / Abstract: Botrocetin is a platelet coagglutin described in Bothrops jararaca venon suggested as a substitute for ristocetin as a mediator of the interaction between GPIb-IX complex and the von Willebrand factor (vWF) that lead to platelet agglutination (Read et al., 1978). A single chain and a two chain botrocetin were described in B. jararaca venon (Fujimura et al., 1991a). Two chain botrocetin is highly homologous in its aminoacid sequence to alboaggregin-B (isolated from the venom of Trimeresus albolabris) a protein which directly agglutinates platelets by binding to a site on platelet membrane GPIb- IX dose to or identical with the site for vWF binding (Peng et al., 1991) .lu this work we report the purification and isolation of a protein (SIII3rp) from Bothrops alternatus venon, through procedures of gel filtration, ion exchange chromatography and HPLC reverse phase chromatography with a C 18 column. The purified protein which inhibits the ristocetin binding to vWF, presented a sillgle band (28 kDa) in non denaturing conditions in 12,5% PAGESDS; after reduction with 0,1M DTT, a 15kDa band was observed. Automatic microsequencing of this proteill was performed on a Applied Biosystem 477 automatic model sequencer with liquid phase pulse. The N-termillal sequence obtained DCPSDWSPYEG presented 82% homology to the first elevell residues of the a and b chains of the heterodimeric botrocetin / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Ciências
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unicamp.br:REPOSIP/313985 |
| Date | 04 August 1995 |
| Creators | Novello, Jose Camillo, 1955- |
| Contributors | UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS, Oliveira Filho, Benedito, 1930-, Filho, Benedito de Oliveira |
| Publisher | [s.n.], Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 72f. : il., application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da Unicamp, instname:Universidade Estadual de Campinas, instacron:UNICAMP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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