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Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As ações biológicas e os efeitos farmacológicos da bradicinina (BK) são mediados por dois receptores, um constitutivo (B2R) e outro induzido (B1R). No fígado, nós verificamos que a resposta hipertensiva portal à BK é mediada por receptores B2, mas não por receptores B1, tanto em ratos normais quanto naqueles submetidos a diferentes agentes de agressão hepática. Nesta última situação verificamos que há aumento da expressão de B1R com a progressão para a cirrose. O objetivo deste trabalho é verificar se o B1R está envolvido no processo de fibrogênese. Para tanto 3 modelos experimentais de fibrose foram utilizados em camundongos knockout de B1R (KOB1R) e selvagens: a)
com injeções intraperitoniais (ip) de CCl4 (6 semanas); b) injeções ip de soro de porco
(10 semanas) e c) ligadura do ducto biliar (BDL). Após uma semana da última injeção,
os fígados foram exanguinados, retirados, pesados e processados. A fibrose foi avaliada
por análise histológica (coloração com Picrus-Sirius), e quantificada pelo programa
AxionVision 4.5 da Carl Zeiss. Avaliação da fibrogênese foi estudada pela expressão de
“heat shock protein”-47 (HSP 47) analisada por Western Blotting. A indução da fibrose
com CCl4 foi obtida com sucesso nos camundongos selvagens e KOB1R, com o
tradicional padrão de formação de septos hexagonais. O modelo BDL apresentou
fibrose com padrão característico de colestase em ambos animais. Pela análise
morfométrica, a quantidade de colágeno (% da área total) nos animais KOB1R-CCl4 (1,9
± 0,3, n=5) é significativamente maior (ANOVA, p = 0,006) que nos animais selvagensCCl4
(1,0 ± 0,2, n=7), bem como quando comparado com o respectivo controle
(KOB1R–óleo) (0,4 ± 0,3%, n=3). Por outro lado, a quantidade de colágeno nos animais
KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) é significativamente menor que nos selvagens (16,1 ± 3,1,
n=6). A expressão de HSP 47 está significativamente (t-test, p = 0,04) aumentada nos
animais KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), comparada aos animais selvagens (6,1 ± 1,3 x
106 UA), ambos tratados com CCl4, confirmando o pior padrão de fibrose observado
também na quantificação morfométrica. No modelo de BDL, houve também maior
expressão de HSP 47 nos animais KOB1R que nos animais selvagens Em conclusão,
nossos resultados demonstram a participação do sistema calicreína-cinina na
fibrogênese hepática e sugere que a ativação do B1R protege o fígado da fibrose
hepática no modelo de CCl4, mas não no modelo BDL. Estes dados são importantes
considerando o potencial terapêutico com o uso de agonistas no tratamento e/ou
prevenção da fibrose. / The biological and pharmacological effects of bradykinin (BK) are mediated by a constitutive B2 and induced B1R. In the liver, we verified that the portal hypertensive response to BK is mediated by B2R, but not by B1R, in normal rats and those submitted to different kind of hepatic injury. In the latter, we also verified an increased expression of B1R in relation to the progression of the cirrhosis. The aim of this work is to analyze the role of BK in the fibrogenesis in wild and knockout of B1R (KOB1R) mice. Three models of fibrosis were used: a) intraperitoneal (ip) injection of of CCl4 (6 weeks); b) ip injection of porcine serum (10 weeks) and c) bile duct ligation (BDL). After one week of injection, the liver were exsanguinated, removed, weighted and processed. Fibrosis
was evaluated by histological analysis (Picrus-Sirius staining) and quantified by AxionVision 4.5 software (Carl Zeiss). Fibrogenesis was evaluated by heat shock protein-47 (HSP 47) expression by Western Blotting. Porcine serum did not induce fibrosis in all animals. CCl4 induced fibrosis in wild and KOB1R in the traditional pattern with hexagonal septa. BDL resulted in fibrosis with the characteristic pattern of colestasis. By morphometric analysis, hepatic collagen (% of total area) of KOB1R-CCl4 (1,9 ± 0,3, n=5) was significantly higher (ANOVA, p = 0,006) than in wild-CCl4 (1,0 ± 0,2, n=7). On the other hand, hepatic collagen in KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) is lower than in wild mice (16,1 ± 3,1, n=6). The liver HSP 47 expression in CCl4 model is significantly (t-test, p = 0,04) higher in KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), compared to wild mice (6,1 ± 1,3 x 106 UA). Interestingly, hepatic HSP 47 expression in KOB1R was also higher than in wild mice. In conclusion, our results suggested that bradykinin participates in the fibrogenesis, and probably activation of B1R protects liver from hepatic fibrosis in the CCl4 model, but not in BDL model. This data is important considering the potential therapeutic with the use of agonist in the threatment and/or prevention of liver fibrosis. / FAPESP: 02/05260-6 / FAPESP: 06/58533-0 / FAPESP: 08/55928-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/10630 |
| Date | January 2009 |
| Creators | Silva, Karina Maxeniuc [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Nagaoka, Márcia Regina [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | 82 p. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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