Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-20T22:35:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bizeto_Luciana_M.pdf: 1491855 bytes, checksum: f428d0df16b92e28a1011622265135ee (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Neste trabalho, investigamos o efeito de calicreínas tissulares e plasmática sobre a permeabilidade vascular em pele de coelhos in vivo. A seguir, investigamos o efeito de dez novos inibidores de calicreína tissular sobre o aumento de permeabilidade vascular induzido por calicreínas tissulares. O veneno da aranha Phoneutria nigriventer foi também usado como agente edematogênico em virtude da capacidade do mesmo de aumentar a permeabilidade vascular em coelhos por um mecanismo dependente da ativação do sistema de calicreína tissular. Nossos resultados mostraram que calicreínas tissulares, tais como a calicreína pancreática de porco (CPP; 0.1 1l9/sítio) e a calicreína urinária de coelho (10 119/sítio) induzem extravazamento significante de proteínas plasmáticas quando administradas na presença do vasodilatador prostaglandina E1 (PGE1). Ao contrário, a calicreína plasmática de coelho não causou extravazamento de proteínas, mesmo na presença de PGE1...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: In this study we have investigated the effect of novel tissue kallikreins on the plasma protein exudation induced by eitheR porcine pancreas kallikrein (PPK) or Phoneutria nigriventer spider venon in the rabbit skin in vivo. The tissue kallikrein inhibitors here described were synthetised based on analogues of peptide substrates for tissue kallikreins. The intradermal injection of PPK and rabbit urinary kallikrein, but not of rabbit plasma kallikrein, significantly increased the microvascular permeability leading to local oedema formation in the rabbit skin...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos son las principales células impulsoras del proceso fibrótico en el corazón. Estas células son activadas tanto por estrés mecánico, como también por citoquinas, entre ellas TGF-β1, que actúa promoviendo la diferenciación celular a miofibroblastos y la síntesis de diferentes proteínas y sustancias que originan el proceso fibrótico. Antecedentes de nuestro laboratorio han revelado que el receptor B1 de cininas se encuentra levemente expresado en fibroblastos y su expresión se induce en los miofibroblastos cardiacos. Este receptor es parte del sistema cinina-calicreína, que de modo general, actúa de manera opuesta al sistema renina-angiotensina, y que contrarresta el efecto pro-fibrótico de angiotensina II, tanto en los fibroblastos como en los miofibroblastos cardiacos. Utilizando técnicas de western blot determinamos que TGF-β1 induce la expresión de B1R a las 48 horas y que este fenómeno estaría mediado por la vía de las MAPK y también por ALK5. Utilizando técnicas de adhesión sobre placa demostramos que tanto BK o DAKD no aumentan la adhesión de fibroblastos o miofibroblastos cardiacos. Por otro lado, utilizando el método de migración en placa (método de la herida), BK aumenta el comportamiento de migración en los fibroblastos, no así de los miofibroblastos. Finalmente, a partir de este trabajo concluimos que TGF-β1, a través de las vías transduccionales MAPK y ALK5; y no por la vía PI3-Akt ni a través de Smad 3; induce la expresión de B1R. Por otro lado, las cininas no median el comportamiento de adhesión celular de fibroblastos ni de miofibroblastos cardiacos. Sin embargo, BK induce la migración celular solo en fibroblastos cardiacos, mientras que DAKD, no media migración en fibroblastos ni miofibroblastos cardiacos. Estos resultados en conjunto, fortalecen el concepto de que las cininas son importantes mediadores del remodelado cardiaco. / Fibroblasts are the main drivers of cells in the heart fibrotic process. These cells are activated either by mechanical stress as well as by cytokines, including TGF-β1, which acts by promoting cell differentiation to myofibroblasts and the synthesis of different proteins and substances that originate the fibrotic process. History of our laboratory has shown that the kinin B1 receptor is slightly expressed in fibroblasts and its expression is induced in cardiac myofibroblasts. This receptor is part of the kininkallikrein system, which in general, acts opposite to the renin-angiotensin system, and counteracts the pro-fibrotic effect of angiotensin II in fibroblasts and cardiac myofibroblasts. Using western blot techniques, we determined that TGF-β1 induces the expression of B1R at 48 hours and that this phenomenon would be mediated by the MAPK pathway and by ALK5. Using plate adhesion techniques demonstrated that either BK or DAKD not increase the adhesion of cardiac fibroblasts or myofibroblasts. Furthermore, using the migration plate method (wound healing), BK increases the migration behavior in fibroblasts, but not of myofibroblasts. Finally, from this work, we conclude that TGF-β1, through MAPK signal transduction pathways and ALK5, and not through PI3-Akt or Smad 3, induces the expression of B1R. Furthermore, kinins do not mediate cell adhesion behavior of cardiac fibroblasts or myofibroblasts. However, BK induces cell migration only in cardiac fibroblasts, while DAKD doesn’t mediate migration in fibroblasts and myofibroblasts heart. These results, taken together reinforce the concept that kinins are important mediators of cardiac remodeling.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pos-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-24T01:51:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:19:24Z : No. of bitstreams: 1 251558.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5)

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-24 / O sistema calicreína-cininas desempenha funções estabelecidas em diversos processos biológicos como transmissão de dor, controle da pressão arterial, geração e manutenção do estado inflamatório. Neste presente trabalho nós mostramos, pela primeira vez, a relação do sistema calicreína-cininas a processos metabólicos em camundongos nocaute para ambos os receptores B1 e B2 (B1B2 -/-). Os camundongos B1B2 -/- foram protegidos do desenvolvimento de obesidade induzida pelo tratamento com dieta hiperlipídica por doze semanas. Além disso, apresentaram menor ingestão alimentar, prevenção da intolerância à glicose, parcial proteção ao desenvolvimento de resistência à insulina e reduzidos níveis circulantes dos hormônios insulina e leptina. A expressão gênica da citocina TNF-alfa e da proteína C-reativa, componentes importantes de processos inflamatórios, estavam reduzidas em tecidos chaves no metabolismo energético, como tecido adiposo, músculo esquelético e fígado. Com isso, sugerimos que as reduzidas concentrações de insulina levaram ao aumento da utilização do tecido adiposo como fonte energética, por meio do processo de lipólise, protegendo o animal B1B2 -/- contra o ganho de massa corporal. Além da diminuída expressão de TNF-alfa e proteína C-reativa, demonstramos neste trabalho que a ausência funcional do sistema calicreína-cininas apresenta relação direta com o metabolismo e o sistema imune, sendo uma alternativa ao tratamento de patologias como diabetes tipo 2 e obesidade. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduaçao em Farmacologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-06-26T01:07:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317194.pdf: 3146285 bytes, checksum: fbc0517bdd2ccde0d3830d50661084bb (MD5) / A neuropatia periférica induzida por quimioterápicos (NPIQ) é uma das principais causas de dor neuropática em humanos. Apesar de muitos esforços, atualmente não há terapia farmacológica disponível para o tratamento adequado de pacientes com dor crônica. É importante mencionar que talvez a dor crônica seja uma das áreas mais promissoras para que antagonistas dos receptores cininérgicos demonstrem eficácia clínica. Neste estudo procurou-se avaliar a contribuição de ambos os receptores B1 (B1R) e B2 (B2R) das cininas para a neuropatia periférica induzida pelo paclitaxel (PTX), um quimioterápico de uso clínico amplo. Além disso, este estudo investigou o possível envolvimento do receptor de potencial transitório vanilóide 4 (TRPV4) nas respostas nociceptivas das cininas em animais naïve, bem como a relevância desta interação para a neuropatia induzida pelo PTX. O tratamento com PTX induziu hiperalgesia mecânica e térmica em camundongos (linhagens C57BL/6 e CD1). A deleção do gene para os receptores B1, B2 ou B1 e B2 (animais duplo-nocaute) reduziu significativamente as respostas hiperalgésicas induzidas pelo PTX em comparação aos animais do tipo selvagem. De modo relevante, o tratamento intraperitoneal com os antagonistas peptídicos e seletivos para os receptores B1 e B2 (DALBK e Hoe 140, respectivamente) inibiu significativamente a hiperalgesia mecânica e térmica quando testados 7 e 14 dias após o primeiro tratamento com PTX. Estes antagonistas também foram eficazes quando administrados centralmente pela via intratecal. Além disso, a injeção intracerebroventricular de DALBK (mas não de Hoe 140) foi eficaz contra a hiperalgesia mecânica induzida pelo PTX em estágios tardios (14 dias). Este efeito foi associado com aumento da expressão do B1R (RNAm e proteína) no tálamo de camundongos. Apesar da eficácia contra a hiperalgesia instalada, o tratamento prolongado e preventivo com os antagonistas cininérgicos não foi eficaz em prevenir a gênese da neuropatia induzida pelo PTX. Porém, este protocolo de tratamento foi efetivo em inibir transitoriamente a hiperalgesia mecânica (por 24 h), bem como inibir expressivamente a hiperalgesia à hipotonicidade (um ativador do canal de mecanotransdução TRPV4). De fato, o canal TRPV4 demonstrou estar envolvido na hiperalgesia mecânica induzida por agonistas seletivos dos receptores B1 ou B2, DABK e BK, respectivamente. Ainda, verificou-se que a BK sensibiliza camundongos aos ativadores do canal TRPV4 (4a-PDD e hipotonicidade) por ativar a via de sinalização PLC/PKC. Corroborando este resultado, o tratamento prolongado e preventivo com os antagonistas cininérgicos preveniu a ativação da PKCE induzida pelo PTX na pata de camundongos; evento este que demonstrou ser importante para a sensibilidade aumentada a hipotonicidade em animais tratados com o quimioterápico. Os resultados do presente estudo demonstraram que as cininas agindo sobre ambos os receptores B1 e B2 desempenham papel crucial no controle da neuropatia periférica induzida pelo PTX através da sensibilização do canal TRPV4 via ativação da enzima PKCE. Estas evidências suportam a ideia de que antagonistas seletivos para os receptores cininérgicos poderiam representar novas opções terapêuticas para o tratamento da dor crônica causada pela quimioterapia.<br> / Abstract : Chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN) is one of the leading causes of neuropathic pain in humans. Despite much effort, the available pharmacotherapies fail to provide satisfactory pain relief for patients with persistent pain. Chronic pain is perhaps the most promising area where kinin receptor antagonists could prove to be useful. In this study we sought to analyse the contribution of both B1 (B1R) and B2 (B2R) kinin receptors to the peripheral neuropathy induced by paclitaxel (PTX), a widely used chemotherapeutic agent. Also, we have investigated whether kinins might mediate nociception and mechanical hyperalgesia by sensitizing transient receptor potential vanilloid 4 (TRPV4) channel and special attempts were made in order to assess this possible interaction in PTX-induced peripheral neuropathy in mice. PTX treatment induced a significant increase in both mechanical and thermal hyperalgesia in mice (C57BL/6 and CD1 strains). Kinin B1R, B2R and B1B2R (double knockout) deficient mice presented a significant reduction in PTX-induced hyperalgesic responses in comparison to wild-type animals. Of relevance, the intraperitoneal treatment of CD1 mice with the peptide kinin B1R or B2R antagonists (DALBK and Hoe 140, respectively) significantly inhibited both mechanical and thermal hyperalgesia when tested at 7 and 14 days after the first PTX injection. DALBK and Hoe 140 were also effective against PTX-induced mechanical hyperalgesia when injected centrally by the intrathecal route. Additionally, the intracerebroventricular injection of DALBK (but not Hoe 140) was effective in preventing mechanical hyperalgesia at later stages (14 days). This effect was associated to the increase in the expression of B1R (both mRNA and protein) in the mouse thalamus. Preventive chronic treatment with kinin receptor antagonists was not able to prevent the development of PTX-induced neuropathy. However, this treatment schedule was effective in transiently inhibiting mechanical hyperalgesia (for 24 h), and expressively inhibiting hyperalgesia to a hypotonic stimulus (an activator of TRPV4 channel mechanotransduction). Indeed, the TRPV4 channel was shown to be involved in the mechanical hyperalgesia induced by the selective B1R or B2R agonists (DABK and BK, respectively), and BK sensitized the animals to TRPV4 activators (4á-PDD and hypotonicity) by triggering PLC/PKC signalling pathway. Corroborating this result, the chronic and preventive treatment with kinin receptor antagonists prevented PTX-induced PKCå activation in the mouse paw, which seemed to be important to limit the increased sensitivity of PTX-tested mice to hypotonicity. The present results demonstrated that kinins acting on both B1R and B2R play a crucial role in controlling PTX-induced peripheral neuropathy by sensitizing TRPV4 channels via PKCå activation. This evidence supports the notion that selective kinin receptor antagonists might represent new and attractive therapeutic options for treating the chronic pain generated by chemotherapy.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2013-07-15T22:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O [receptor B1] para as [cininas] está normalmente ausente em condições fisiológicas, sendo expresso em processos inflamatórios ou infecciosos. Este estudo avaliou alguns dos mecanismos envolvidos na indução do receptor B1 após o tratamento com o [fator de ativação plaquetária] (PAF) ou com a [anafilotoxina C5a] na pata de rato. A injeção do agonista seletivo dos receptores B1, a [des-Arg9-bradicinina] (DABK), produziu [edema] de baixa intensidade na pata de ratos normais, enquanto o pré-tratamento local com PAF ou C5a causou aumento temporal do edema à DABK precedido pelo aumento da expressão dos receptores B1. A regulação dos receptores B1 após tratamento com os fatores quimiotáticos PAF e C5a envolve vias comuns de modulação como a síntese de proteínas, a ativação do [fator de ativação-?B] (NF-?B), a ativação de [quinases] e de [mastócitos]. Além disso, o PAF ainda pode lançar mão de mecanismos adicionais de modulação destes receptores como o [recrutamento de neutrófilos], a expressão de [moléculas de adesão] e a [produção de citocinas próinflamatórias] (TNFa e IL-1ß). Com relação ao PAF, pode-se sugerir ainda, que a ativação do eixo NF-?B/TNFa/neutrófilo por este mediador é suficiente para o aumento do RNAm para o receptor B1. Além disso, o eixo NF-?B/TNFa/neutrófilo é também necessário para a produção de IL-1ß Ademais, nossos resultados sugerem a existência de uma regulação positiva direta entre estes mediadores inflamatórios possibilitando o aumento rápido e sustentado das respostas mediadas pelos receptores B1. Finalmente, os resultados descritos no presente trabalho fornecem novas evidências sobre como os fatores quimiotáticos podem regular os receptores B1 in vivo, e tentam sugerir uma possível seqüência temporal de eventos envolvidos nesta indução.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-19T09:13:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T23:13:54Z : No. of bitstreams: 1 183509.pdf: 2419471 bytes, checksum: 04c50bd7c80ed8a54981d913ba84e96d (MD5) / O presente estudo avaliou, através de técnicas moleculares e farmacológicas, o efeito dos glicocorticóides endógenos sobre a expressão do receptor B1 em ratos. Também foram investigados alguns dos mecanismo envolvidos na indução do receptor B1 para as cininas na aorta isolada de coelhos. Foram obtidas evidências moleculares e farmacológicas adicionais indicando que a expressão do receptor B1 para as cininas pode ser regulada pelos glicocorticóides endógenos através de mecanismo dependente da ativação da via do NF-kB. Além disso, a indução tempo-dependente da contração mediada pela des-Arg9-BK na aorta de colho envolve a ativação da proteína quinase C, da tirosina quinase, com a participação da ciclooxigenase-2 e também da via do NF-kB. Os resultados obtidos com o presente estudo sugerem uma importante participação dos receptores B1 para as cininas mediando respostas inflamatórias. Além disso, sugerem ainda que pelo menos em parte das ações antiinflamatórias dos glicocorticóides pode estar associada com a regulação dos receptores B1 para as cininas.

Orientadora : Profª. Drª. Daniela de Almeida Cabrini / Coorientadora : Prof. Dr. Michel Fleith Otuki / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 12/03/2015 / Inclui referências : f. 62-69 / Resumo: Com o objetivo de verificar o envolvimento do sistema das cininas no processo de cicatrização cutânea, animais nocaute para os receptores cininérgicos (KOB1, KOB2 e KOB1B2) e wildtype (WT/controle) foram submetidos ao modelo de cicatrização por excisão cutânea. Observou-se que no décimo dia após a excisão, os animais WT apresentaram oclusão da ferida igual a 96,13 ± 0,55%, enquanto os grupos nocaute KOB1, KOB2 e KOB1B2 apresentaram contração da lesão de 91,39 ± 0,93%, 86,80 ± 1,93% e 82,0 ± 1,73%, respectivamente. Uma vez que foram observadas diferenças com relação ao tempo de resolução do processo de reparo tecidual, foi realizada a avaliação do período de oclusão total das feridas nestes grupos. Os animais WT apresentaram fechamento completo de suas lesões no 12° dia após a realização da excisão, já os animais nocautes tiveram suas lesões elucidadas no 17° (KOB1), 21° (KOB2) e 23° dia (KOB1B2). Análises realizadas com amostras coletadas durante as diferentes fases do processo de cicatrização (fase inflamatória - 2°, 3° dias, fase proliferativa - 7 °, e fase de remodelamento tecidual - 10 ° dia), reforçaram a ocorrência de diferenças no processo de reparação tecidual nos grupos nocaute. Os resultados mostraram que houve redução significativa do número de células infiltradas no tecido lesionado durante a fase inflamatória nos grupos nocaute, sendo esta redução de 30,65 ± 3,66% (KOB1), 48,20 ± 2,52% (KOB2) e 47,72 ± 2,29% (KOB1B2), no 2° dia após a excisão. Esta redução permaneceu no 3° dia, sendo iguais a 44,26 ± 7,79% (KOB1), 67,19 ± 2,88% (KOB2) e 60,03 ± 4,28% (KOB1B2), quando comparados ao grupo WT. Na fase proliferativa (7° dia), observaram-se reduções significativas na taxa de reepitelização nos grupos nocautes para o receptor B2, em comparação ao grupo WT (76,16 ± 8,03%), sendo estas reduções iguais a 24,94 ± 8,45% (KOB2) e 23,63 ± 5,41% (KOB1B2). Análises de amostras referentes à fase de remodelamento tecidual (10° dia) mostraram diferenças nos níveis de colágeno tecidual nos animais nocautes para os receptores das cininas, sendo estas reduções iguais a 18,13 ± 2,7% (KOB1), 12,11 ± 1,52% (KOB2) e 16,96 ± 0,51% (KOB1B2), em comparação com o grupo controle (88,9 ± 2,62 ?g/tecido). Através de análises imunohistoquímicas, foram constatadas reduções significativas na taxa de proliferação de fibroblastos nos grupos nocautes B2, com reduções de 39,01 ± 5,96% (KOB2) e 38,03 ± 4,32% (KOB1B2). Assim como, foram observadas reduções no número de miofibroblastos nestes grupos, sendo estas reduções iguais a 34,87 ± 3,31% (KOB2) e 44,10 ± 3,54% (KOB1B2), em comparado ao grupo controle (32,5 ± 4,92 células/campo). No entanto, os dados dos animais KOB1 foram semelhantes aos dos WT. Os resultados obtidos sugerem a participação do sistema das cininas em processos que compõem a reparação tecidual, auxiliando na compreensão desse processo fisiopatológico e tornando as cininas uma nova opção terapêutica. Observou-se a participação direta do receptor B2 em processos de proliferação e diferenciação de células que compõem a pele. Palavras-chave: Cininas, Cicatrização, Pele, receptores cininérgicos, Receptor B1, Receptor B2. / Abstract: To verify the involvement of kinins in the skin healing process, knockout animals for kinin receptors (KOB1, KOB2 and KOB1B2), and wildtype (WT / control) were subjected to excision wound healing model. It was observed that on the tenth day after excision, WT animals had occlusion of the wound equal to 96.13 ± 0.55%, while knockout groups KOB1, KOB2 and KOB1B2 presented wound closure of 91.39 ± 0.93 % 86.80 ± 1.93% and 82.0 ± 1.73%, respectively. Since differences with time resolution of tissue repair process were observed, the evaluation of the period of total occlusion of wounds in these groups was performed. Thus, the WT animals showed a complete closure of injuries on the 12th day after excision, and the knockout animals had their injuries elucidated on the 17th (KOB1), 21th (KOB2) and 23th day (KOB1B2). Analyzes performed on samples collected during the different phases of wound healing (inflammatory phase - days 2 and 3, proliferative phase - day 7, and tissue remodeling phase - day 10), reinforced the occurrence of differences in the repair process tissue in the knockout groups. Results in the knockout groups also show reduction of infiltrated cells in the tissue during the inflammatory phase, with a decline of 30.65 ± 3.66% (KOB1), 48.20% ± 2.52 (KOB2) and 47.72 ± 2.29% (KOB1B2), on the day 2 after excision. This reduction remained on day 3 being equal to 44.26 ± 7.79% (KOB1), 67.19 ± 2.88% (KOB2) and 60.03 ± 4.28% (KOB1B2), both compared to WT group. In the proliferative phase (day 7), there was a significant reduction in re-epithelialization rate in knockouts groups for the B2 receptor in comparison to WT (76.16 ± 8.03%), presenting rate reductions of 24.94 ± 8.45% (KOB2) and 23.63 ± 5.41% (KOB1B2). Analysis of samples relating to the phase of tissue remodeling (day 10) showed differences in the levels of collagen tissue, with reduced levels in knockout animals of 18.13 ± 2.7% (KOB1), 12.11 ± 1.52% (KOB2) and 16.96 ± 0.51% (KOB1B2), compared with the control group (88.9 ± 2.62 g /tissue). In knockouts B2 groups, immunohistochemical analyzes show significant reductions in fibroblast proliferation rate of 39.01 ± 5.96% (KOB2) and 38.03 ± 4.32% (KOB1B2). Again, decreases were observed in the number of myofibroblasts in these groups, equal to 34.87 ± 3.31% (KOB2) and 44.10 ± 3.54 % (KOB1B2), in comparison with the control group (32.5 ± 4.92 cells/field). Data from KOB1 animals did not show differences concerning fibroblast proliferation and myofibroblasts. The results suggest the involvement of the kinin system in processes that make up the tissue repair, assisting in the understanding of pathophysiological process, and making kinins a new therapeutic option. Highlighting the B2 receptor direct participation in proliferation and differentiation of fibroblasts in the skin. Keywords: Kinins, Wound Healing, Skin, kinin B1 receptors, kinin B2 receptors.

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As ações biológicas e os efeitos farmacológicos da bradicinina (BK) são mediados por dois receptores, um constitutivo (B2R) e outro induzido (B1R). No fígado, nós verificamos que a resposta hipertensiva portal à BK é mediada por receptores B2, mas não por receptores B1, tanto em ratos normais quanto naqueles submetidos a diferentes agentes de agressão hepática. Nesta última situação verificamos que há aumento da expressão de B1R com a progressão para a cirrose. O objetivo deste trabalho é verificar se o B1R está envolvido no processo de fibrogênese. Para tanto 3 modelos experimentais de fibrose foram utilizados em camundongos knockout de B1R (KOB1R) e selvagens: a) com injeções intraperitoniais (ip) de CCl4 (6 semanas); b) injeções ip de soro de porco (10 semanas) e c) ligadura do ducto biliar (BDL). Após uma semana da última injeção, os fígados foram exanguinados, retirados, pesados e processados. A fibrose foi avaliada por análise histológica (coloração com Picrus-Sirius), e quantificada pelo programa AxionVision 4.5 da Carl Zeiss. Avaliação da fibrogênese foi estudada pela expressão de “heat shock protein”-47 (HSP 47) analisada por Western Blotting. A indução da fibrose com CCl4 foi obtida com sucesso nos camundongos selvagens e KOB1R, com o tradicional padrão de formação de septos hexagonais. O modelo BDL apresentou fibrose com padrão característico de colestase em ambos animais. Pela análise morfométrica, a quantidade de colágeno (% da área total) nos animais KOB1R-CCl4 (1,9 ± 0,3, n=5) é significativamente maior (ANOVA, p = 0,006) que nos animais selvagensCCl4 (1,0 ± 0,2, n=7), bem como quando comparado com o respectivo controle (KOB1R–óleo) (0,4 ± 0,3%, n=3). Por outro lado, a quantidade de colágeno nos animais KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) é significativamente menor que nos selvagens (16,1 ± 3,1, n=6). A expressão de HSP 47 está significativamente (t-test, p = 0,04) aumentada nos animais KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), comparada aos animais selvagens (6,1 ± 1,3 x 106 UA), ambos tratados com CCl4, confirmando o pior padrão de fibrose observado também na quantificação morfométrica. No modelo de BDL, houve também maior expressão de HSP 47 nos animais KOB1R que nos animais selvagens Em conclusão, nossos resultados demonstram a participação do sistema calicreína-cinina na fibrogênese hepática e sugere que a ativação do B1R protege o fígado da fibrose hepática no modelo de CCl4, mas não no modelo BDL. Estes dados são importantes considerando o potencial terapêutico com o uso de agonistas no tratamento e/ou prevenção da fibrose. / The biological and pharmacological effects of bradykinin (BK) are mediated by a constitutive B2 and induced B1R. In the liver, we verified that the portal hypertensive response to BK is mediated by B2R, but not by B1R, in normal rats and those submitted to different kind of hepatic injury. In the latter, we also verified an increased expression of B1R in relation to the progression of the cirrhosis. The aim of this work is to analyze the role of BK in the fibrogenesis in wild and knockout of B1R (KOB1R) mice. Three models of fibrosis were used: a) intraperitoneal (ip) injection of of CCl4 (6 weeks); b) ip injection of porcine serum (10 weeks) and c) bile duct ligation (BDL). After one week of injection, the liver were exsanguinated, removed, weighted and processed. Fibrosis was evaluated by histological analysis (Picrus-Sirius staining) and quantified by AxionVision 4.5 software (Carl Zeiss). Fibrogenesis was evaluated by heat shock protein-47 (HSP 47) expression by Western Blotting. Porcine serum did not induce fibrosis in all animals. CCl4 induced fibrosis in wild and KOB1R in the traditional pattern with hexagonal septa. BDL resulted in fibrosis with the characteristic pattern of colestasis. By morphometric analysis, hepatic collagen (% of total area) of KOB1R-CCl4 (1,9 ± 0,3, n=5) was significantly higher (ANOVA, p = 0,006) than in wild-CCl4 (1,0 ± 0,2, n=7). On the other hand, hepatic collagen in KOB1R-BDL (3,1 ± 1,4, n=5) is lower than in wild mice (16,1 ± 3,1, n=6). The liver HSP 47 expression in CCl4 model is significantly (t-test, p = 0,04) higher in KOB1R (10,6 ± 1,6 x 106 UA), compared to wild mice (6,1 ± 1,3 x 106 UA). Interestingly, hepatic HSP 47 expression in KOB1R was also higher than in wild mice. In conclusion, our results suggested that bradykinin participates in the fibrogenesis, and probably activation of B1R protects liver from hepatic fibrosis in the CCl4 model, but not in BDL model. This data is important considering the potential therapeutic with the use of agonist in the threatment and/or prevention of liver fibrosis. / FAPESP: 02/05260-6 / FAPESP: 06/58533-0 / FAPESP: 08/55928-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T00:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2013-07-16T20:00:16Z : No. of bitstreams: 1 243741.pdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / O objetivo do presente estudo foi avaliar e caracterizar as respostas hipernociceptivas em ratos submetidos à ligação dos nervos espinhais L5 e L6 (LNE L5L6), bem como analisar a participação dos receptores B1 e B2 para as cininas neste modelo de dor neuropática. A LNE L5L6 induziu hipernocicepção ao frio, ao calor e mecânica. A hipernocicepção ao frio e mecânica foram reduzidas pelo tratamento sistêmico com morfina, indometacina e anticonvulsivantes, enquanto que a hipernocicepção ao calor foi totalmente resistente aos anticonvulsivantes. Nos animais neuropáticos, a injeção intraplantar do agonista de receptores B1 (DABK) induziu respostas nociceptivas, as quais são mediadas pela ativação de receptores B1, enquanto que a nocicepção induzida pela injeção intraplantar de agonista de receptores B2 (Bradicinina, BK) foi potencializada nesses animais, e envolveu a ativação de receptores B2 e B1. Este estudo também demonstrou que nos animais neuropáticos, a expressão dos receptores B1 e B2 estava aumentada na pele da pata e nos segmentos L4-L6 dos nervos espinhais, 12 dias após a indução da neuropatia. Neste mesmo período, em gânglios da raiz dorsal (GRD) L4 e L5L6 de animais falso-operados e L4 de animais neuropáticos, os receptores B1, B2 e TRPV1 foram expressos em corpos celulares de fibras C não-peptidérgicas positivas para isolectina B4 (IB4). Nesses mesmos tecidos, os receptores B1 e B2 também foram expressos em corpos celulares de fibras A. Entretanto, nos GRDs lesados L5L6, ocorreu uma redução da imunorreatividade para IB4 e conseqüente redução da expressão de receptores B1, B2 e TRPV1. Contudo, os receptores B1 e B2 foram expressos em corpos celulares de fibras A. Com base nos experimentos envolvendo a mobilização de cálcio intracelular induzida pela BK, podemos sugerir que a potencialização dessa resposta, em neurônios insensíveis a capsaicina, nos GRDs L5L6 de animais neuropáticos é dependente da ativação de receptores B2 e da formação de prostaglandinas, mas não envolve a ativação de receptores B1, TRPV1 e TRPA1. A hipernocicepção térmica (tanto ao frio quanto ao calor) e mecânica foram reduzidas pelo tratamento com antagonistas de receptores B1 (DALBK) e B2 (HOE 140). Conclui-se portanto que receptores B1 e B2 para cininas, presentes na pata, nos nervos espinhais e nos GRDs intactos e lesados parecem ser importantes na mediação das respostas hipernociceptivas induzidas pela LNE L5L6, podendo representar alvos terapêuticos valiosos para o tratamento da dor neuropática.