Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:57:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O [receptor B1] para as [cininas] está normalmente ausente em condições fisiológicas, sendo expresso em processos inflamatórios ou infecciosos. Este estudo avaliou alguns dos mecanismos envolvidos na indução do receptor B1 após o tratamento com o [lipopolissacarídeo] de E. Coli (LPS) na pata de rato. A injeção do agonista seletivo dos receptores B1, a [des-Arg9-bradicinina] (DABK), produziu [edema] de baixa intensidade na pata de ratos normais, enquanto o pré-tratamento local com LPS causou aumento tempo-dependente do edema à DABK, da ativação do [fator nuclear-kB] (NF-kB) e da expressão do RNAm para o receptor B1. Os inibidores de síntese protéica, cicloheximida ou dexametasona, ou da ativação do NF-kB, PDTC ou TLCK, reduziram significativamente a resposta edematogênica à DABK nos animais tratados com LPS. O edema à DABK também foi inibido de forma significativa pelos anticorpos anti-IL-1b ou anti-TNF-a, pela IL-10 ou pelo antagonista do receptor de IL-1, IRA. A indução dos receptores B1 pelo LPS foi acompanhada por um aumento marcante dos níveis de IL-1b e TNF-a, da expressão da sintase do óxido nítrico induzida (iNOS) e da migração de [neutrófilos]. Os inibidores da migração celular, fucoidina ou anticorpo anti-CD18, o antagonista de PAF WEB 2086 ou o anticorpo anti-PMN também reduziram significativamente o edema mediado pelos receptores B1. Por fim, os inibidores de NOS, L-NOARG, aminoguanidina e 1400W também inibiram marcadamente o edema à DABK. Estes dados sugerem que a produção de [citocinas] e de óxido nítrico, a ativação do NF-kB e o influxo de neutrófilos são eventos importantes para a indução dos receptores B1 após o tratamento com LPS.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cisplatina e um agente quimioterapico que causa disfuncao renal severa. O receptor B1 de cininas tem sido associado a modulacao de celulas do sistema imune ao tecido lesionado e tambem tem sido relacionado a inflamacao renal. Para testarmos e verificarmos o papel do receptor B1 de cininas no modelo de lesao renal aguda induzida por cisplatina, nos usamos animais nocautes para o gene do receptor B1 de cininas e tambem utilizamos tratamento com o antagonista desse receptor e dois momentos distintos, antes e depois da aplicacao da cisplatina. A administracao desse farmaco elevou consideravelmente os niveis sericos de creatinina e ureia, aumento da regulacao da expressao genica do receptor B1, aumento de citocinas pro inflamatorias como tambem aumento do numero de celulas do sistema imune. Os animais nocautes apresentaram creatinina e ureia serica reduzidas, menor apoptose, e uma diminuicao da regulacao de componentes inflamatorios induzidos pela cisplatina. Alem disso o tratamento precoce com o antagonista do receptor B1 foi capaz de diminuir os niveis sericos de creatinina e ureia apos a exposicao a cisplatina. Por isso nos propomos que as cininas tem um importante papel na lesao renal aguda induzida por cisplatina, prejudicando migracao de celulas do sistema imune para o tecido renal durante a nefrotoxicidade da cisplatina / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-06-25T22:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 307869.pdf: 2942955 bytes, checksum: c02d78ab39a8ea822c0c2f236d2dc38e (MD5) / O objetivo do presente estudo foi investigar o papel do receptor B2 para as cininas na neuroinflamação induzida pelo peptídeo A?1-40 em camundongos. Há indícios de que o peptídeo A? tem um papel central na doença de Alzheimer e, de relevância para este trabalho, estudos recentes sugeriram o envolvimento do sistema calicreína-cininas na patofisiologia da doença em humanos, bem como sua contribuição em modelos experimentais desta doença. Para a realização dos experimentos, os animais foram pré-tratados com o antagonista seletivo do receptor B2, o HOE 140 (50 ?mol/sítio/ i.c.v.), 2 horas antes da injeção i.c.v do peptídeo A?1-40 (400 ?mol/sítio). Após 14 dias, os animais foram submetidos aos testes comportamentais e no dia seguinte (dia 15), os cérebros foram removidos para a realização da técnica de western blot. Ainda, o mesmo protocolo de tratamento foi seguido para a realização de coletas em tempos específicos (6h, 24h ou 8 dias) para a realização das análises de imunoistoquímica, nos tempos de expressão máximo da cada proteína. O pré-tratamento dos animais com HOE 140 preveniu o prejuízo cognitivo e o dano sinápico induzido pelo peptídeo A?1-40, avaliados através do teste de reconhecimento de objetos e pela expressão das proteínas sinápticas sinaptofisina e PSD-95, respectivamente. Além disso, o peptídeo A?1-40 induziu aumento na expressão do receptor B2 após 15 dias no hipocampo dos animais, e o bloqueio deste receptor com o HOE 140 preveniu esta alteração, sugerindo uma possível auto-regulação do receptor B2 pelo seu antagonista. Ainda, o processo inflamatório induzido pelo peptídeo A?1-40, evidenciado através do aumento da ativação microglial e do aumento na expressão das enzimas COX-2, iNOS e nNOS, foi prevenido pelo pré-tratamento com o HOE 140. Estes efeitos tóxicos iniciados pela administração de A?1-40 parecem ser mediados pela ativação de PKC (isoformas ? e ?) e, por conseguinte, das MAPKs p-38 e JNK, e dos fatores de transcrição NF?B e c-jun. Estes eventos parecem ser modulados pela ativação do receptor B2, uma vez que, o bloqueio deste receptor com o HOE 140 preveniu todas estas alterações induzidas pelo peptídeo A?1-40. Estes resultados, analisados em conjunto, fornecem evidências de que a toxicidade induzida por A?1-40 parece ser mediada pela ativação do receptor B2 e que o bloqueio deste receptor e das vias de sinalização por ele ativadas podem ser novos alvos para o tratamento do processo inflamatório característico na progressão da doença de Alzheimer. / The aim of this study was to investigate the role of the kinin B2 receptor in the A?-induced neuroinflammation in mice. There are recent evidences showing that the A? peptide has a central role in Alzheimer's disease. Relevantly, recent studies have suggested the involvement of the kallikrein-kinin system in the pathophysiology of Alzheimer's disease in both humans and experimental models. In this study, experimental procedures were carried out using Swiss mice pretreated with the selective B2 receptor antagonist, HOE 140 (50 ?mol/site, i.c.v.), given two hours prior the i.c.v. injection of A?1-40 peptide (400 ?mol/site). After 14 days, the animals were subjected to behavioral tests, and on day 15 the brains were removed to perform Western blot analysis. In addition, the same treatment protocol was used to carry out tissue collections, at specific time points (6h, 24h or 8 days), in order to perform immunohistochemical analysis. These time point were chosen based on the maximum expression level of each protein. The pretreatment of animals with HOE 140 prevented the cognitive impairment and synaptic injury induced by A?1-40 peptide, assessed using object recognition task and through evaluation of the expression of synaptic proteins, (synaptophysin and PSD-95), respectively. Furthermore, A?1-40 peptide increased B2 receptor expression, in the mice hippocampus after 15 days, and the pharmacological blockage of this receptor (with HOE 140) prevented this alteration, suggesting a possible auto-regulation mechanism for B2 receptor expression. Also, the A?1-40-induced inflammatory process was evidenced by increased microglial activation and increased expression of COX-2, iNOS and nNOS. All these alterations were prevented by the pretreatment with HOE 140. The toxic effects induced by A?1-40 administration seems to be mediated by activation of PKC (? and ? isoforms), which leads to the activation of p-38 MAPKs and JNK, and transcription factors NF?B and c-Jun. These events seems to be modulated by activation of B2 receptor, since blocking this receptor with HOE 140 prevented all these changes. These results, taken together, provide evidence that the A?-induced toxicity might be mediated by B2 receptor activation. Thus, the blockage of B2 receptor, and signaling pathways activated by it, might constitute new attractive targets for the treatment of the inflammation associated with of Alzheimer's disease progression.

Orientadores: Nelson Rodrigues Netto Jr., Ronilson Moreno / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T18:11:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fregonesi_Adriano_D.pdf: 17035244 bytes, checksum: 969ded8c55049acf4602ef262dbe3c97 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Objetivo: Caracterizaro subtipo de receptor para cinina envolvido no relaxamento de corpo cavernoso humano induzido por bradicinina (BK), Lys-bradicinina (Lys- BK), Met-Lys-bradicinina (Met-Lys-BK) e des-Arg9-bradicinina (des-Arg9-BK) e investigar se o relaxamento do corpo cavernoso humano induzido por cininas é devido à estimulação de nervos não-adrenérgicos e não colinérgicos que suprem o tecido cavernoso. Material e Métodos: Tecido cavernoso humano proveniente de doadores cadáveres de múltiplos órgãos para transplante foram retirados e imediatamente colocados em solução de krebs e mantido à 4°C até a utilização (nunca excedendo 24 horas após a remoção). O tecido foi cortado em fragmentos de aproximadamente 2cm, colocados em supensão em sistema de cascata e superfundidos com solução de krebs oxigenada e morna a cinco litros por minuto. Após equilíbrio do fragmento em cascata por aproximadamente 90 minutos, noradrenalina (3~moI/L) foi infundida para indução de contração submáxima dos fragmentos de corpo cavernoso humano (CCH). A liberação de produtos da ciclooxigenase foi prevenida pela infusão de indometacina (6~moVL). Os fragmentos de CCH foram calibrados injetandoem bolus o nitrovasodilatador gliceril trinitrato (GTN) e a sensibilidade dos tecidos foi ajustada eletronicamente. Os agonistas (cininas, histamina e acetilcolina) foram injetados como simples bolus (acima de 1001-lL)e o relaxamento dos fragmentos de CCH foram expressos como uma percentagem de relaxamento submáximo induzido por GTN. Resultados: Bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina relaxaram de maneira significativa os fragmentos de CCH; em base molar, não houve diferença estatisticamente significativa entre os graus de relaxamento induzido por estes peptídeos. O agonista de receptor B1 de cininas des-Arg9-bradicinina não teve efeito sobre os fragmentos de CCH. A infusão do antagonista de receptor B2 de cininas HOE 140 (50mmmoI/L) aboliu o relaxamento induzido pela bradicinina, Lys-bradicinina e Met-Lys-bradicinina sem afetar aqueles induzidos por acetilcolina e histamina.A infusão do inibidorde óxido nítrico sintase Nw-nitro-L-Argininametil éster aumentou os tônus dos fragmentos de CCH e reduziu significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) e acetilcolina (89%) sem afetar aqueles induzidos por GTN. A infusão subseqüente de L-arginina (300I-lmoI/L)reverteu parcialmente a hipertonicidade e restaurou significativamente (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK e Met-Lys-BK. Os resultados foram similares com o inibidor de guanilato ciclase 1H-[1,2,4] oxadiolo [4,3,-alquinoxalin-1-one] que reduziu em mais de 95% (p < 0,01) o relaxamento induzido por BK, Lys-BK, Met-Lys-BK, acetilcolina e GTN. A infusão do bloqueador de canal de sódio tetrodotoxina não teve efeito significativo no relaxamento dos fragmentos de CCH induzidos por BK, GTN e acetilcolina. Conclusão: Este estudo demonstra claramentea existência funcional de receptores de cininas B2em tecido erétil de corpo cavernoso humano e que, quando ativados, liberam óxido nítrico, Relaxando a musculatura lisa destes tecidos. Como a tetrodotoxina não conseguiu afetar o relaxamento induzido por cininas dos segmentos de corpo cavernoso humano, é provável que estes peptídeos liberem óxido nítrico do endotélio dos sinusóides, e não de neurônios que inervam o tecido cavernoso. Emboraas calicreínas teciduais e seus produtos tenham sido encontrados no sistema reprodutor masculino, a importância fisiopatológica da sua presença nestes tecidos não está totalmente elucidada / Abstract: Objective: To caracterize the kinin receptor subtype involved in the relaxation of human isolated corpus cavernosum (HCC) induced by bradykinin (BK). Lysbradykinin (Lys-BK), Met-Lys-bradykinin (Met-Lys-BK) and des-Arg9-bradykinin (des-Arg9-BK), and to investigate whether the kinin-induced relaxation of HCC results from the stimulation of nonadrenergic, noncholinergic (NANC) neurons supplying the cavernosal tissue. Materiais and Methods: Excised HCC tissues were immediately placed in Krebs solution and kept at 4°C until use (never >24 hours after removal). HCC was cut in strips of - 2 centimetres, supended in a cascade system and superfused with oxygenated and warmed Krebs solution at 5 mUminute. After equilibration for - 90 minutes , noradrenaline (3IJmoI/L)was infused to induce a submaximal contraction of the HCC strips. The release of cyclo-oxygenase products was prevented by infusing indomethacin (6IJmoI/L). HCC strips were calibrated by injecting a single bolus of the nitrovasodilator glyceryl trinitrate (GTN) and the sensitivity of the tissues adjusted electronically to be similar.The agonists (kinins, histamine and acetylcholine)were injected as a single bolus (up to 1001JL)and the relaxation of HCC expressed as a percentage of the submaximal relaxation induced by GTN. Resul1s: Bradykinin, Lys-BK and Met-Lys-BK significantly relaxed the HCC tissues; on a molar basis, there was no statistical difference among the degrees of relaxation induced by these peptides. The B1kinin receptor agonist des-Arg9-bradykinin had no effect on the HCC. The infusion of the B2 kinin receptor antagonist Hoe 140 (50nmoI/L) virtually abolished the relaxation induced by BK, Lys-BK and Met-Lys-BK without affecting those induced by acetylcholine and histamine. The infusion of the nitric oxide synthase inhibitor NW-nitro-L-argininemethyl ester increased the tone or the HCC tissues and significantly reduced (p < 0.01) the relaxation induced by BK (74%), Lys-BK (90%), Met-Lys-BK (87%) and acetylcholine (89%) without affecting those induced by GTN. The subsequente infusion of L-arginine (300 J,JmoI/L) partially reversed the increased tone and significantly (P < 0.01) restored the relaxationinduced by Bk, Lys-BKand Met-Lys-BK.The resultswere similar with the novel guanylate cyclase inhibitor 1H-[1,2,4] oxadiazolo[4,3,-alquinoxalin-1-one] which reduced by > 95% (p > 0.01) the relaxation induced by BK, Lys-BK, Met- Lys-BK, acetylcholine and GTN. The infusion of the sodium-channel bolcker tetrodotoxin had no signficant effect on the BK-, GTN- and acetylcholine-induced relaxation of HCC. Conclusion: This study clearly showed the existence of functional B2kinin receptors in human erectile tissues that when activated lead to the release of NO and hence relaxation of the HCC tissues. As tetrodotoxin failed to affect the kinin-induced relaxation of HCC strips, it is likely that these peptides release NO frem the endotheliumof sinuoidal capillaries rather than from neuronal sources supplying the cavernosal tissue. Although tissue kallikreins and their components have been found in the male reproductive system, the physiopathological importance of these findings has yet to be elucidated. / Doutorado / Cirurgia / Doutor em Cirurgia Medica

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. / Made available in DSpace on 2012-10-17T21:41:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T18:15:20Z : No. of bitstreams: 1 172462.pdf: 1823217 bytes, checksum: 2c6bf169a5dbda819588c9c81c8bdc3c (MD5) / O glutamato é um importante neurotransmissor na resposta nociceptiva. Uma parte deste trabalho teve como objetivo caracterizar a contribuição do NO em um modelo de hiperalgesia térmica induzida pelo glutamato.. A administração de glutamato (10-100 nmol/sítio) por via intratecal (i.t.) em camundongos causou marcante e longa resposta hiperalgésica no teste da placa quente (5-60 minutos). A administração intratecal de inibidores da NO-sintase, de inibidores da guanilato ciclase solúvel e do inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 reverteram a resposta hiperalgésica induzida pelo glutamato. Além disso, o doador de NO, SNAP e o ativador da via GMPC-PKG , 8-bromo-GMPC potencializaram a resposta induzida pelo glutamato em dose sub-limiar (10 nmol/sítio, i.t.). Esses resutados demonstram que, pelo menos em parte, o NO tem uma importante contribuição na hiperalgesia térmica causada pelo glutamato. Assim como os receptores glutamatérgicos, os receptores B1 e B2 para as cininas são importantes para a transmissão da dor. Diante disto, outra parte do presente estudo visa caracterizar o efeito hiperalgésico induzido pelas cininas administradas intratecalmente. A bradicinina, a Tyr8-bradicinina (1-30 nmol/sítio), a des-Arg9-bradicinina e a des-Arg10-calidina (3-50 nmol/sítio) causaram marcante hiperalgesia térmica quando analisados no teste da placa quente em camundongos, uma ação mediada pela ativação de receptores B1 e B2. Além disso, a hiperalgesia induzida pela bradicinina foi parcial, mas significantemente revertida pela pré-administração intratecal dos antagonistas NMDA, NK1 (FK888, 3-30 pmol/sítio), do CGRP, dos inibidores da ciclooxigenase e da óxido nítrico sintase. Os resultados do presente estudo demonstram que as cininas que a hiperalgesia causada pela bradicinina, parece ser mediada por fibras aferentes primárias sensíveis a capsaicina, e pela liberação ou ação de glutamato, substância P, CGRP, prostaglandinas e óxido nítrico. Desta maneira, as cininas possuem importantes ações moduladoras da transmissão dolorosa espinhal. Assim, inibem as ações hiperalgésicas das cininas em nível espinhal, são potencialmente importantes para o desenvolvimento de novos analgésicos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pos-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T06:25:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 289480.pdf: 1840258 bytes, checksum: 1a58fd49245ad6bea3a26426f0d7f25a (MD5) / O envolvimento dos receptores B1 e B2 para as cininas em processos fisiopatológicos da bexiga urinária tem sido demonstrado em diversos estudos. No entanto, a implicação destes receptores na hiperatividade da bexiga urinária após lesão medular permanece inexplorada até o momento. Desse modo, este estudo investigou o envolvimento dos receptores B1 e B2 na hiperatividade da bexiga urinária induzida por lesão da medula espinhal por compressão ao nível torácico T9-T10. A lesão medular induziu uma resposta inflamatória pronunciada e diversas mudanças funcionais na contratilidade e nos parâmetros urodinâmicos da bexiga urinária. A lesão medular resultou, ainda, em um aumento nos níveis de RNAm para os receptores B1 na bexiga urinária, nos gânglios da raiz dorsal (L6-S1) e nos segmentos correspondentes da medula espinhal. Houve também, em um aumento na expressão dos receptores B1 e B2 na bexiga urinária. Ensaios in vitro com preparações da bexiga urinária obtidas 2, 7, 14 e 28 dias após a lesão medular reveleram aumento significativo da resposta contrátil a agonistas seletivos dos receptores B1 (des-Arg9-BK) ou B2 (bradicinina) quando comparadas às respostas obtidas de grupos controle ou falso-operado. As respostas aos agonistas B1 ou B2 foram reduzidas pelos seus respectivos antagonistas seletivos, des-Arg9-[Leu8]-BK ou Hoe 140. De maneira interessante, estudos cistométricos em animais com lesão medular demonstraram que o tratamento sistêmico com Hoe 140 reduziu significativamente a amplitude e o número das contrações não-associadas a micção (CNMs) na bexiga urinária. Tratamento sistêmico com o antagonista do receptor B1, des-Arg9-[Leu8]-BK, apenas reduziu significativamente o número das CNMs na bexiga urinária dos animais lesionados. O presente estudo demonstra o importante envolvimento dos receptores B1 e B2 para as cininas na hiperatividade da bexiga urinária induzida por lesão medular em ratos e apontam novos alvos terapêuticos para o tratamento da hiperatividade da bexiga urinária decorrente de lesão medular traumática. / The B1 (B1R) and B2 (B2R) kinin receptors has been implicated in physiological and pathological conditions of the bladder, but its role in overactive bladder (OB) following spinal cord injury (SCI) remains elusive. Here we assessed by means of functional and molecular approaches the relevance of these receptors in OB caused by SCI in rats. SCI resulted in an inflammatory process, changes in bladder contractility and in urodynamic parameters. Moreover, SCI caused a marked up-regulation of B1 mRNA levels in bladder, spinal cord and dorsal root ganglion (L6-S1). SCI also caused an up-regulation of B1 and B2 protein levels in bladder. The exposure of B1 agonist, des-Arg9-BK, and B2 agonist, bradykinin (BK), to bladder strips induced a contractile response significantly enhanced following SCI. Pre-incubation of the bladder preparations with des-Arg-Leu8-BK (B1 antagonist) or Hoe 140 (B2 antagonist), significantly reduced bladder contraction. In addition, cystometric studies on SCI animals revealed that systemic Hoe 140 treatment significantly reduced the amplitude and the number of non-voiding contractions (NVCs) while systemic treatment with DALBK only reduced the number of NVCs. There were no significant changes in basal pressure, threshold pressure, maximum voiding pressure, voided volume and voiding efficiency before administration of vehicle, HOE 140 or DALBK. Taken together, these results suggest that up-regulation of BK receptors are involved in the mechanism inducing OB following SCI in rats.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T08:48:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 235300.pdf: 4136601 bytes, checksum: 0dab6f3ff684295f3f50f7305aca2559 (MD5) / A proposta deste estudo foi investigar os mecanismos envolvidos nas respostas hipernociceptivas induzidas pela avulsão do plexo braquial em camundongos. A avulsão do plexo braquial (APB) em camundongos suíços, C57/BL6 e J192 resultou no aumento persistente da sensibilidade mecânica e térmica na para traseira direita e cauda. Este modelo é caracterizado também pela ausência de resposta na pata cirurgiada, bem como de sinais de prostração, entretanto é capaz de causar um déficit de coordenação motora numa fase mais tardia. A citocina TNF , avaliada através da utilização de animais com deleção gênica para o seu receptor p55 ou do anticorpo anti-TNF e a talidomida, demonstrou ter um papel fundamental na instalação das respostas hipernociceptivas mecânica e térmica após a APB. Os fatores neurotróficos NGF, GDNF, BDNF e NT-3 também parecem participar da gênese das alterações na sensibilidade mecânica dos animais, uma vez que seus respectivos anticorpos foram capazes de retardar o aparecimento da hipernocicepção. Entretanto, apenas o BDNF parece ter um papel importante na manutenção do quadro hipernociceptivo induzido pela APB. Com base nos resultados obtidos com animais com deleção gênica para os receptores B1 ou B2, bem como com antagonistas seletivos para cada receptor (R-715 e o SSR240612; HOE-140), podemos sugerir que o receptor B1 participa da perpetuação das respostas hipernociceptivas, envolvendo principalmente estruturas supra-espinhais numa fase mais tardia da patologia. Em contrapartida, o receptor B2 não parece estar significativamente envolvido na gênese e na manutenção da hipernocicepção mecânica e térmica induzidas pela APB. Estes dados contribuem para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos na dor neuropática.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:46:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: A patogenese da doenca periodontal envolve diferentes aspectos da imunidade e da remodelacao ossea. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel do receptor B1 de cininas (B1R) na periodontite experimental e osteoclastogenese. Material e Metodos: Foi utilizado um modelo experimental de periodontite induzida por ligadura (PEx) em camundongos nocautes para o B1R (B1R-/-) para testar o papel deste receptor na modulacao da perda ossea in vivo. A analise ex vivo dos linfonodos submandibulares confirmou a ativacao do linfocitos T no modelo de ligadura. O efeito autonomo da delecao do B1R foi avaliado em osteoclastos diferenciados a partir de precursores da medula ossea de camundongos. Resultados: Os camundongos B1R-/- exibiram aumento da perda ossea alveolar e aumento da secrecao de interleucina (IL) - 17 ex vivo nos linfonodos submantibulares em resposta a PEx, quando comparados ao animal selvagem (Wt). A analise ex vivo dos linfondos submandibulares revelou niveis de fator de necrose tumoral (TNF)-&#945; reduzidos, enquanto a quantidade de interferon (IFN)-&#947; permaneceu inalterada. A PEx, entretanto, nao foi capaz de modificar os niveis de IL-10 em animais B1R-/-. Os osteoclastos de camundongos B1R-/- apresentaram aumento do numero de celulas multinucleadas, positivas para a coloracao com a fosfatase acida resistente ao tartrato (TRAP+) quando comparado com o tipo selvagem. O uso de inibidor da enzima conversora de angiotensina, enzima que degrada cininas, como uma estrategia farmacologica para aumentar a disponibilidade de cininas, reduziu a destruicao do osso em ratos e camundongos. Conclusao: Juntos, os nossos resultados indicam que o B1R participa na patogenese da perda ossea induzida por ligadura, demonstrando, assim, o seu papel no desenvolvimento da doenca periodontal. / Aim : The pathophysiology of periodontal diseases involves different aspects of immunity and bone remodeling. Thus, the purpose of this study was to evaluate the role of kinin B1 receptor (B1 R - / - ) in experimental periodontitis and osteoclastogenesis. Material and Methods: Here we used a model of ligature- induced experimental periodontitis (PEx) in mice lacking B1 R (B1 R - / - ) to test the role of this receptor in modulating bone loss in vivo. Ex vivo analysis of submandible lymph nodes were used to confirm T lymphocyte activation. Autonomous effect of B1 R deletion was evaluated in primary osteoclasts precursor from mouse bone marrow. Results: B1 R - / - mice exhibit increased bone loss and increased interleukin (IL) - 17 secretion by lymphnode cells in response to PEx when compared to wild type, whereas tumor necrosis factor (TNF) - α levels were decreased and interferon (IFN)- γ remained unaltered. PEx failed to modify IL - 10 levels in B1 R - / - . Osteoclasts from B1R - / - mice also displayed increased differentiation into functional multinucleated tartrate - resistant acid phosphatase - positive (TRAP+) osteoclasts when compared to wild type. Furthermore, treatment of mice or rats with angiotensin - converting enzyme (ACE) inhibitor, a pharmacological strategy to increase kinin availability once ACE degrades kinins into inactive peptides, could prevent bone destruction. Conclusion: Taken together, our results indicate that B1R participates in the pathogenesis of ligature - induced bone loss, thereby demonstrating its role in the development of periodontal disease / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:27Z : No. of bitstreams: 1 Publico-00272a.pdf: 1939032 bytes, checksum: 8909a1a58abf8a089d6c5e15f9ab0dc0 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:27Z : No. of bitstreams: 2 Publico-00272a.pdf: 1939032 bytes, checksum: 8909a1a58abf8a089d6c5e15f9ab0dc0 (MD5) Publico-00272b.pdf: 922324 bytes, checksum: 7763fc40b0d1d67d34b28da3e6cdf817 (MD5) / A síndrome metabólica é uma condição patológica de impacto global e recursos financeiros substanciais são gastos por governos no tratamento de doenças associadas como obesidade, diabetes mellitus e cardiopatias. O crescente índice de obesos no mundo não tem uma causa única e parece ter raízes evolutivas. É clara a participação do hipotálamo no controle da ingestão alimentar e do gasto energético, sendo ele um dos principais locais de integração de fatores centrais e periféricos que controlam a homeostase energética. Nosso grupo recentemente correlacionou o sistema calicreína-cinina como controle do gasto energético, mostrando que animais nocautes para o gene codificacador do receptor B1 de cininas (B1-/-) apresentam um fenótipo de resistência à obesidade induzida por dieta. Estes animais apresentam, por exemplo, níveis séricos basais reduzidos de leptina, porém são mais sensíveis a este hormônio em comparação a animais controles selvagens. Além disso, esses animais possuem também um aumento na atividade física quando submetidos a uma dieta rica em lipídeos. A descoberta de que a leptina tem uma ação trófica sobre estruturas hipotalâmicas estimulou-nos a investigar se anormalidades estruturais no hipotálamo têm papel importante na causação do fenótipo observado. As técnicas de imuno-histoquímica e hibridização in situ com sondas para peptídeos classicamente implicados no controle do balanço energético - Neuropeptídeo Y (NPY), transcrito relacionado à cocaína e anfetamina (CART), -melanocyte stimulating hormone (-MSH) e sonda para o receptor de leptina (Ob-Rb) - foram usadas. A região do núcleo paraventricular hipotalâmico e a região perifornicial da área hipotalâmica lateral (em que a ação do CART está corelacionada com o aumento do gasto energético e aumento da atividade locomotora, respectivamente) de animais B1-/- apresentam um aumento significativo na expressão de CART em comparação a animais WT corroborando nossas observações experimentais prévias sobre estes animais. / The metabolic syndrome is a global aiction and substantial financial resources are spent by governments in the treatment of related diseases such as obesity, diabetes mellitus and cardiopathies. The growing index of obese people in the world has not a single cause and seems to have evolutionary roots. There is a clear role of the hypothalamus in the control of food intake and energetic expenditure. It is one of the major integration sites of peripheral and central factors regulating energy homeostasis. Our group has recently correlated the kallikrein-kinin system with the control of energy expenditure showing that mice that had the kinin B1 receptor gene knockedout( B1-/-) display a phenotype of resistance to diet-induced obesity. These mice have reduced leptin serum levels and are more sensitive to this hormone as opposed to wild-type mice. In addition, they diplay an increased motor activity when submited to a high-lipid containing diet. The discovery that leptin has a trophic action on hypothalamic structures has prompted us to investigate whether structural abnormalities in the hipothalamic circuitry of B1-/- mice would have a role in the causation of the observed phenotype. Immunohistochemistry and in situ hybridization techniques using probes targeting peptides classically implicated in the control of energy balance - Neuropeptide Y (NPY), Cocaine-and-Amphetamine Related Transcript (CART), -melanocyte stimulating hormone (-MSH) and the leptin receptor (Ob-Rb) - were used. The paraventricular nucleus of the hypothalamus and the perifornical region of the lateral hipothalamic area are places at which the CART peptide activity is respectively correlated to increased energy expenditure and increased locomotor activity. An increased CART expression was demonstrated in these nuclei in B1-/- mice, satisfying our previous experimental observations about the B1 knock-out phenotype. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-04-04T12:35:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 rafaela_rymer_ioc_mest_2008.pdf: 24426174 bytes, checksum: b883213aabb48fb7bd040264314153b8 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Uma das principais patologias relacionadas à Doença de Chagas é a cardiopatia chagásica, sendo uma das principais causas de morte durante a fase aguda da infecção. A cardiopatia aguda difere da crônica, devido ao processo inflamatório intenso e a presença de ninhos de parasitas, diferente do processo fibrótico e praticamente ausência de parasitas, observando durante a fase crônica. As cininas são um grupo de proteínas vasoativas que apresentam uma relação estreita com a infectividade do Trypasonoma cruzi. Diversos autores descrevem a capacidade do T. cruzi em ativar o sistema de cininas e infectar células, sendo sua infectividade, potencializada, pela inibição da degradação dessas moléculas. Cininas podem induzir resistência à infecção pelo T. cruzi através da ativação de células dendríticas, pela via de sinalização dependente de B2R. Recentemente, foi demonstrado que camundongos tratados com captopril durante o curso da infecção desenvolvem menos fibrose e necrose do tecido cardíaco e redução da inflamação Assim, nós decidimos investigar o papel do sistema de cininas na formação da cardiopatia chagásica, durante a fase da infecção experimental pelo T. cruzi. Nossos resultados demonstram que o sistema de cininas não é capaz de modular a curva de parasitemia, nem a celularidade de órgãos linfóides primários e secundários durante a fase aguda da infecção experimental, com a exceção de HOE-140, que foi capaz de inibir o aumento da celularidade descrito para linfonodos subcutâneos durante a fase aguda. Por outro lado, as cininas são capazes de modular a expressão de moléculas de matriz extracelular no coração. Nós observamos que a potencialização do sistema de cininas aumenta o infiltrado inflamatório na fase aguda, e que o bloqueio do B2R parece agravar essa situação, enquanto que o processo de formação da fibrose é inversamente proporcional ao aporte celular. Nossos dados sugerem que a via de cininas participa da formação da cardiopatia, durante a fase aguda da infecção e que possivelmente existe um mecanismo compensatório agindo através de B1R, para assumir parte da atividade vasoativa de B2R / One of the major pathologies related to Chaga`s Disease is the cardiomyopathy, being one of the main cause of death during the acute phase of the infection. The acute cardiomyopathy differs from the chronic, due to the intense inflammatory process and the presence of parasite’s nests, opposed to the fibrotic and almost absence of parasite’s observed during the chronic phase. Kinins are a group of vasoactive proteins that have a tight relationship with Trypanosoma cruzi’s infection. Authors described the T. cruzi’s capacity to activate the kinin system and infect cells, and that its infectivity is potentiated by the inhibition of kinin’s degradation. Kinins may induce acquired resistance to T. cruzi infection through the activation of dendritic cells via B2R/kinin signaling pathway. A recent work demonstrated that mice treated with captopril during the course of infection, present less fibrosis and necrosis of the cardiac tissue and reduction of inflammation. Thus, we decided to investigate the role of the kinin system on the formation of the chagasic cardiomyopathy. Our results demonstrate that the kinin system can’t modulate the parasitemy curve nor the cellularity of primary and secondary lymphoid organs during the acute phase of the experimental infection, with the exception of HOE-140, who down modulated the increased cellularity described in subcutaneous lymph nodes during the acute phase. On the other hand, kinins can modulate the expression of extracellular matrix molecules on the heart. We observed that the potentiation of the kinin system increases the inflammatory infiltrate during the acute phase, and the blockage of the B2R seems to aggravate it, while the fibrosis process is inversely proportional to the inflammation. Our data suggests that the kinin system participates in the formation of the cardiopathy, during the acute phase of the infection, and there might be compensatory mechanism acting through the B1R to assume some of B2R’s vasoactive activity during B2R blockage