Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2018-04-18T13:18:24Z
No. of bitstreams: 1
Tese-15860.pdf: 879437 bytes, checksum: c869f5350ca0a0b0f13be8ba348f8fa5 (MD5) / Approved for entry into archive by Mariusa Loução (mariusa.loucao@unifesp.br) on 2018-04-18T13:20:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1
Tese-15860.pdf: 879437 bytes, checksum: c869f5350ca0a0b0f13be8ba348f8fa5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T13:20:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Tese-15860.pdf: 879437 bytes, checksum: c869f5350ca0a0b0f13be8ba348f8fa5 (MD5)
Previous issue date: 2016 / O uso da biologia molecular como ferramenta de diagnóstico microbiológico vem se expandindo no setor da medicina laboratorial. Novas plataformas aparecem com a prerrogativa de facilitar e acelerar o processo de análise. O uso de sistemas automatizados, que realizam extração, amplificação e detecção de ácidos nucleicos dentro da mesma plataforma, permite maior precisão e facilidade ao desenvolvimento de
um novo teste por apresentarem todos os processos acoplados e reagentes disponíveis para o processo. Dentre as plataformas automatizadas, uma das que se destacam é o BD Max™ (Becton Dickinson Diagnostics). O sistema BD Max é uma plataforma automatizada aberta, que combina a extração de ácidos nucleicos, PCR (Reação de Polimerização em Cadeia) em tempo real e detecção dentro do mesmo instrumento, oferecendo a opção de usar os testes aprovados pelo Food and Drug Administration (FDA) e também, testes desenvolvidos pelo usuário. Com o objetivo de testar os recursos que a modalidade aberta da plataforma BD Max oferece, foram desenvolvidos três estudos distintos para o diagnóstico molecular de agentes infecciosos direto de amostras clínicas. Estudo 1: O objetivo deste estudo foi validar um teste multiplex usando a tecnologia PCR em tempo real no sistema aberto BD MAX™, para detectar o complexo Mycobacterium tuberculosis (CMT), complexo Mycobacterium avium (CMA) e Mycobacterium spp. (PAN) diretamente de amostras clínicas. Quando os resultados do novo teste foram comparados com os resultados da cultura, a reação de PCR apresentou especificidade de 97,1%, 100% e 100% para CMT, CMA e PAN, respectivamente. Estudo 2: O objetivo deste estudo foi validar um teste multiplex usando a tecnologia PCR em tempo real no sistema aberto BD MAX™ para detectar o grupo Mycobacterium abscessus (GMA), complexo Mycobacterium fortuitum (CMF) e Mycobacterium chelonae (MC), diretamente de amostras clínicas. Quando os resultados do novo teste foram comparados com os resultados da cultura, uma concordância de 97%, 100% e 99% para GMA, CMF e MC, respectivamente foi observada. Estudo 3: O objetivo deste estudo foi validar um teste multiplex usando a
tecnologia PCR em tempo real no sistema aberto BD MAX™ para detectar e identificar Achromobacter xylosoxidans (AX), Burkholderia cepacia (BC), Pseudomonas aeruginosa (PSA) e Stenotrophomonas maltophilia (SM) diretamente de amostras respiratórias de pacientes portadores de Fibrose Cística (FC). Quando os resultados do novo teste foram comparados com os resultados da cultura, uma alta concordância foi observada entre as duas metodologias. Conclusão: Os 3 testes desenvolvidos provaram ser específicos e sensíveis para detectar por PCR em tempo real microrganismos causadores de infeção
direto da amostra clínica. A plataforma automatizada BD Max provou ser uma excelente ferramenta para a realização de testes moleculares automatizados. / The use of molecular biology as a tool for microbiology diagnostic has been expanding in the
laboratory routine. Despite of the strong growth of the area, companies can not afford the demand about
epidemiological changes around the world and for this reason laboratories opt to develop their own
methods. New platforms appear with the prerogative to facilitate and accelerate the analysis process. The
use of automated sample-in results-out platforms allows higher precision and facilitates the development
of a new test by presenting all attached processes and reagents available for the test. Among platforms
that best fits this profile, the BD Max™ (BD Diagnostics) is one of the most used ones. The BD Max
system is an automated open platform that combines extraction and real time PCR in the same
instrument, offering the option of using tests approved by the FDA or the open platform mode for userdeveloped
test. In order to explore the BD Max open mode platform, three differents studies were
developed to detect the microorganisms that causes infection directly from clinical samples. Study 1: A
multiplex real time PCR was validated on the BD MAX™ open mode system to detect Mycobacterium
tuberculosis complex (MTC), Mycobacterium avium complex (MAC) and Mycobacterium spp. (PAN)
directly from clinical specimens. When compared to culture results, the new BD MAX PCR test
presented specificities of 97.1%, 100% and 100% for MTC, MAC and PAN, respectively. Study 2: A
multiplex real time PCR was validated on the BD MAX™ open mode system to detect Mycobacterium
abscesses Group (MAG), Mycobacterium fortuitum complex (MFC) and Mycobacterium chelonae (MC)
directly from clinical specimens. When compared to culture results, the new BD Max PCR test presented
an overall agreement of 97%, 99% and 100% for the detection of MAG, MFC and MC, respectively.
Study 3: A multiplex real time PCR was validated on the BD MAX™ open mode system to detect
Achromobacter xylosoxidans (AX), Burkholderia cepacia (BC), Pseudomonas aeruginosa (PSA) and
Stenotrophomonas maltophilia (SM) directly from clinical specimens collected from Cystic Fibrosis
patients. When culture results were compared to the new BD Max PCR test results, a high overall
agreement were observed between both methodologies. Conclusion: All 3 tests proved to be specific and
sensitive to detect different microorganisms associated with infections, directly from clinical samples.
The BD Max proved to be an excellent tool for automated molecular tests.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:repositorio.unifesp.br:11600/41761 |
| Date | January 2016 |
| Creators | Rocchetti, Talita Trevizani [UNIFESP] |
| Contributors | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP] |
| Publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | 96 p. |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UNIFESP, instname:Universidade Federal de São Paulo, instacron:UNIFESP |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0028 seconds