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Previous issue date: 2017-06-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Atherosclerosis is a multifactorial disease, considered as one of the main risk factors that lead to the development of cardiovascular diseases. It is characterized by endothelial and autonomic dysfunction due to the presence of inflammation and systemic oxidative stress.
The objective of this study was to evaluate the presence of ROS (reactive oxygen species) in the subfornical organ (SFO) and rostral ventrolateral medulla (RVLM) of animals knockout apolipoprotein E (apoE-/-) fed with a standard diet and the possible relation of the presence of peripheral inflammatory cytokines with central oxidative stress. So, for this purpose, the serum was collected from C57BL/6 mice, isogenic mice, and apoE-/-, mice, also isogenic, genetically modified for the deletion of the gene coding for apolipoprotein E. The serum was used for cholesterol dosage, lipid peroxidation in the
form of malonialdehyde (MDA) and inflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-10). In addition, the aortas of both groups were collected for the evaluation of lipid deposition. For the determination of reactive oxygen species by the dihydroethidine technique (DHE) and quantification of inflammatory cytokines (IL-1β, TNF-α and IL-10) were also collected samples from the SFO and RVLM from the two groups. We observed a significant increase in total cholesterol levels in apoE-/- animals compared to control animals (237.4±17.7 mg/dL n=6 vs 90.7±6.4 mg/dL n=6, p<0.05), both fed a standard diet. We
also observed a higher lipid deposition in the apoE-/- animals when compared to controls (27.7±4.8% n=3 vs 5.3±0.6% n=4, p<0.05, respectively). There was an increase in serum levels of malonialdehyde in the apoE-/- mice compared to the control (1.8±0.2 nmol/mL, n=15 vs 1.1±0.2 nmol/mL, n=12, p<0.05). Regarding systemic inflammatory evaluation, we observed an increase in IL-1β levels in apoE-/- animals when compared to controls (17.7±2.9 pg/mL, n=11 vs 5.8±0.5 pg/ML, n=11, p<0.05), as well as TNF-α, which was
also elevated in atherosclerotic animals (4.6±0.8 pg/mL, n=8 vs 2.1±0.6 pg/mL, n=8, p<0.05). However, we did not observe a significant difference in IL-10 levels when we compared the groups (apoE-/-: 201.6±16.0 pg/mL, n=6 vs C57BL/6: 190.1±11.1pg/mL,
n=6). Regarding the evaluation of the oxidative stress in SFO and RVLM, an increase in O2•- levels was observed in both areas from the apoE-/- animals compared to the control (SFO: 36.4±2.1FR/u.a, n=4 vs 19.4±2 FR/u.a, 1, n=4, p<0.05; RVLM: 31.7±2.7 FR/u.a,
n=4 vs 16.0±1.0 FR/u.a, n=5, p<0.05). Finally, we evaluated the levels of inflammatory cytokines in the SFO, and observed a decrease in the levels of both the proinflammatory cytokines (TNF-α and IL-1β) and IL-10 (anti-inflammatory) in apoE-/-: IL-1β (4.4±0.3 pg/mL n = 5, vs. 9.1 ± 0.8 pg/mL n=5, p<0.05), TNF-α (3.0±0.7 pg/mL, n=7 vs 6.4±0.9
pg/mL n=7, p<0.05), IL-10 (214.0±1.9 pg/mL n=3, vs 354.2±19.3 pg/mL n=3, p<0.05). Therefore, we can conclude that apoE-/- animals fed standard diet have high levels of ROS in the SFO and RVLM, which together are important regions responsible for cardiovascular control. We may also suggest that the peripheral inflammatory cytokines participate in the induction of central oxidative stress from its action in the SFO. / A aterosclerose é uma doença multifatorial, considerada como um dos principais fatores
de risco que levam ao desenvolvimento de outras doenças cardiovasculares. É
caracterizada por disfunção endotelial e autonômica devido à presença de inflamação e
estresse oxidativo sistêmico. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de EROs
(espécies reativas de oxigênio) no órgão subfornical (SFO) e no bulbo ventrolateral
rostral (RVLM) de animais knockout para apolipoproteína E (apoE-/-), alimentados com
dieta padrão e a possível relação da presença de citocinas inflamatórias periféricas com
a geração de estresse oxidativo central. Para isso foi realizada a coleta do soro de
camundongos C57BL/6, camundongos isogênicos, e apoE-/-, camundongos, também
isogênicos, geneticamente modificados para a deleção do gene que codifica a
apolipoproteína E. O soro foi utilizado para a dosagem do colesterol, da peroxidação
lipídica na forma de malonialdeído (MDA) e das citocinas inflamatórias (IL-1β, TNF-α e
IL-10). Além disso, foram coletadas as aortas de ambos os grupos para a avaliação “en
face” da deposição lipídica. Ainda foi realizada a coleta de amostras do SFO e do RVLM
dos dois grupos para a realização da dosagem de espécies reativas de oxigênio pela
técnica do di-hidroetídio (DHE) e para a quantificação de citocinas inflamatórias (IL-1β,
TNF-α e IL-10) no SFO. Observamos um aumento significativo dos níveis de colesterol
total nos animais apoE-/- em relação aos animais controle (237,4±17,7 mg/dL n=6 vs
90,7±6,4 mg/dL n=6, p<0,05), ambos alimentados com dieta padrão e com idade de 13
meses. Observamos também uma maior deposição lipídica nos animais apoE-/- quando
comparados com os controles (27,7±4,8% n=3 vs 5,3± 0,6% n=4, p<0,05,
respectivamente). Houve aumento nos níveis séricos de malondialdeído nos
camundongos apoE-/- quando comparados com o controle (1,8±0,2 nmol/mL, n=15 vs
1,1±0,2 nmol/mL, n=12, p<0,05). Com relação a avaliação inflamatória sistêmica,
observamos aumento nos níveis de IL-1β nos animais apoE-/- quando comparados aos
controles (17,7±2,9 pg/mL, n=11 vs 5,8±0,5 pg/mL, n=11, p<0,05), bem como o TNF-α
que também se apresentou elevado nos animais ateroscleróticos (4,6±0,8 pg/mL, n=8 vs 2,1±0,6 pg/mL, n=8, p<0,05). No entanto, não constatamos diferença significativa nos
níveis de IL-10 quando comparamos ambos os grupos (apoE-/-:201,6±16,0 pg/mL, n=6
vs C57BL/6:190,1±11,1 pg/mL, n=6). Quanto à avaliação do estresse oxidativo no SFO
e no RVLM foi observado aumento nos níveis de O2•- em ambas as áreas dos
camundongos apoE-/- quando comparados com o controle (SFO: 36,4±2,1 FR/u.a, n=4
vs 19,4±2,1 FR/u.a, n=4, p<0,05; RVLM: 31,7±2,7 FR/u.a, n=4 vs 16,0±1,0 FR/u.a, n=5,
p<0,05). Por fim avaliamos os níveis de citocinas inflamatórias no SFO e observamos
uma diminuição nos níveis tanto das citocinas pró-inflamatórias (TNF-α como da IL-1β),
como da IL-10 (anti-inflamatória) nos camundongos apoE-/- quando comparados com o
controle: IL-1β (4,4±0,3 pg/mL n=5, vs 9,1±0,8 pg/mL n=5, p<0,05), TNF-α
(3,0±0,7pg/mL, n=7 vs 6,4±0,9 pg/mL n=7, p<0,05), IL-10 (214,0±1,9 pg/mL n=3, vs
354,2±19,3 pg/mL n=3, p<0,05). Portanto, concluímos que os animas apoE-/- alimentados com dieta padrão apresentam níveis elevados de EROs no SFO e RVLM, que em conjunto, são importantes regiões responsáveis pelo controle cardiovascular. Podemos ainda sugerir que, possivelmente, as citocinas inflamatórias periféricas participam da indução do estresse oxidativo central a partir da sua ação no SFO.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede.biblioteca.ufpb.br:tede/9698 |
| Date | 13 June 2017 |
| Creators | Assis, Taísa França de Medeiros |
| Contributors | Braga, Valdir de Andrade, Balarini, Camille de Moura |
| Publisher | Universidade Federal da Paraíba, Programa Multicêntrico de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas, UFPB, Brasil, Ciências Fisiológicas |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFPB, instname:Universidade Federal da Paraíba, instacron:UFPB |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | 1980732882193703533, 600, 600, 600, 600, -378403742546487717, 7737708247419018223, 2075167498588264571 |
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