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Previous issue date: 2011-02-02 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / This investigation had the objective of studying the molecular epidemiology of infections by Mycoplasma spp., Escherichia coli and Staphylococcus spp., in broilers and commercial layers of the state of Pernambuco. A hundred and twenty birds were used from 24 flock of which 55 healthy broilers, 35 broilers and 30 commercial layers with respiratory and digestive signs. For the study of Mycoplasma spp., the bacteriological exam, the Polymerase Chain Reaction (PCR) and Nested-PCR were used. For the isolation of Escherichia coli the medium Eosine Methylene Blue Agar (EMB) was used. The pathogenicity test in vitro was carried out in Congo Red magnesium oxalate agar while the PCR was used, to evaluate the presence of virulence genes and the phylogenetic determination of groups A, B1, B2 and D. For the study of citotoxicity, the samples were inoculated in Vero cells. For the detection of plasmids, the extraction of DNA and the visualization of the plasmid profile was used. For Staphylococcus spp., isolation the bacteriological exam was used, with biochemical proof of species identification. The formation of the biofilm Congo Red Agar (ACR), and the detection of the mecA gene by PCR were verified. For Escherichia coli and Staphylococcus spp., a resistance profile was carried out through tests of disc diffusion and Minimum Inhibitory Concentration (MIC). In the PCR for Mycoplasma spp., it was observed that seven (29.17%) samples were positive for MS and one (4.17%) for MG, in samples of birds with respiratory signs, the positive sample was further confirmed as vacinal strain MG-F; in the bacteriological exam all samples were negative. From the 35 isolated Escherichia coli submitted to PCR, the number of positive E coli isolates for virulence genes of were: iss (16), iutA (10), hlyF (17), ironN (11), ompT (16), crl (10), fimA (14), tsh (5), papA (2), csgA (0) and iucA (2). They were phylogenetically classified into groups A (71.42%) and B1 (28.58%). The presence of hemolysis in agar blood was superior to the detection of the hlyF gene by the PCR. The pathogenicity test in Congo Red agar showed five (14.29%) positive isolated E coli, and for the cytotoxicity evaluation in vitro, in Vero cells, all the isolated E coli were negative. On the resistance profile to antibiomicrobials, it was observed that 33 (94.28%) of the E coli isolates were resistant to three or more antibiotics and that lincomicine presented the highest percentage of resistance (100%). On the CIM, multiresistance to various antimircrobials was observed. With respect to the plasmids, a frequency of 80.0% (28/35) was observed in E. coli isolates, where 16 E. coli isolates presented plasmid of 88 MDa. From the 24 processed samples 16 Staphylococcus isolates were, five being coagulasis-positive (SCP) and 11 coagulasis-negative (SCN). The biofilm production test, six (37.5%) isolates were positive. Regarding PCR for the detection of the mecA gene, all the isolates were negative. It was observed that 15 isolates presented a multiresistance profile to antimicrobials. Based on the results, these bacteria participate in the respiratory disease of the studied chickens populations and they must be considered in the control and treatment measures used in aviculture, together with the performance of in vitro tests. / Objetivou-se com este trabalho estudar a epidemiologia molecular das infecções por Mycoplasma spp., Escherichia coli e Staphylococcus spp., em frangos de corte e poedeiras comerciais no Estado de Pernambuco. Foram utilizadas 120 aves provenientes de 24 granjas, das quais 55 frangos de corte sadios, 35 com sinais respiratórios e 30 poedeiras comerciais com sinais respiratórios e digestivos. Para a pesquisa de Mycoplasma spp., utilizou-se o exame bacteriológico e a reação em cadeia da polimerase (PCR) e Nested-PCR. Para o isolamento de Escherichia coli foi utilizado o meio ágar Eosina Azul de Metileno (EMB), o teste de patogenicidade in vitro foi realizado em ágar oxalato de magnésio acrescido de vermelho congo, enquanto a PCR foi realizada para avaliar a presença de genes de virulência e determinação filogenética dos grupos em A, B1, B2 e D. Para o estudo de citotoxicidade, as amostras foram inoculadas em células Vero e para a detecção de plasmídios foi utilizada a extração de DNA e visualização do perfil plasmidial. Para o isolamento de Staphylococcus spp., utilizou-se o exame bacteriológico, com provas bioquímicas para a identificação das espécies. Verificou-se a formação de biofilme em ágar Vermelho Congo (ACR), e detecção do gene mecA pela PCR. Para Escherichia coli e Staphylococcus spp., realizou-se perfil de resistência através dos testes de disco difusão e Concentração Inibitória Mínima (CIM). Na PCR para Mycoplasma spp., observou-se que sete (29,17%) amostras foram positivas para MS e uma (4,17%) para MG em amostras de aves com sinais respiratórios, sendo a amostra positiva confirmada como cepa vacinal MG-F; no exame bacteriológico todas as amostras foram negativas. Dos 35 isolados de Escherichia coli submetidos a PCR, o número de isolados positivos para os genes de virulência foi: iss (16), iutA (10), hlyF (17), ironN (11), ompT (16), crl (10), fimA (14), tsh (5), papA (2), csgA (0) e iucA (2). Foram classificados filogeneticamente nos grupos A (71,42%) e B1 (28,58%). A presença de hemólise em ágar sangue foi superior à detecção do gene hlyF pela PCR. O teste de patogenicidade em ágar vermelho congo revelou cinco (14,29%) isolados positivos e para avaliação da citotoxicidade in vitro em células Vero todos os isolados foram negativos. No perfil de resistência aos antibiomicrobianos observou-se que 33 (94,28%) isolados foram resistentes a três ou mais antibióticos e a lincomicina apresentou o maior percentual de resistência (100%). Na CIM observou-se multirresistência a vários antimicrobianos. Quanto aos plasmídios observou-se frequência de 80,0% (28/35) nos isolados de E. coli, onde 16 isolados apresentaram plasmídio de 88 MDa. Das 24 amostras processadas foram isolados 16 Staphylococcus, sendo cinco coagulase-positiva (SCP) e 11 coagulase negativa (SCN), e no teste de produção de biofilme, seis (37,5%) isolados foram positivos. Na PCR para detecção do gene mecA todos os isolados foram negativos. Observou-se que 15 isolados apresentaram perfil de multirresistência a antimicrobianos. Com base nos resultados obtidos, essas bactérias participam da doença respiratória na população estudada e devem ser consideradas nas medidas de controle e tratamento nos plantéis avícolas em conjunto com a realização de testes in vitro.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:tede2:tede2/5768 |
| Date | 02 February 2011 |
| Creators | BARROS, Mércia Rodrigues |
| Contributors | MOTA, Rinaldo Aparecido, OLIVEIRA, Andrea Alice da Fonseca, SAUKAS, Tomoe Noda, NASCIMENTO, Elmiro Rosendo do, SILVEIRA, Wanderley Dias da, COSTA, Mateus Matiuzzi da |
| Publisher | Universidade Federal Rural de Pernambuco, Programa de Pós-Graduação em Ciência Veterinária, UFRPE, Brasil, Departamento de Medicina Veterinária |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRPE, instname:Universidade Federal Rural de Pernambuco, instacron:UFRPE |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Relation | -3061482854177903105, 600, 600, 600, 600, -3020210563763616780, 453670264235017319, -2555911436985713659 |
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