Os basidiomicetos Pleurotus sajor-caju e Lentinula edodes despertam grande interesse
industrial devido às propriedades nutritivas e terapêuticas e também devido à capacidade de
secreção de fenol-oxidases, enzimas com grande potencial biotecnológico. O melhoramento
genético torna-se importante para a obtenção de variantes com características de interesse,
podendo ser realizado através de protoplastização e mutagênese. No presente estudo o objetivo
foi a obtenção de clones com maior atividade de fenol-oxidases (com ênfase para as lacases) e
clones com maior produtividade de basidiomas, visando possíveis aplicações biotecnológicas e
industriais. As linhagens P. sajor-caju PS-2001 e L. edodes LE-06 foram submetidas às técnicas
de protoplastização e mutagênese de protoplastos (radiação UV) e por método seletivo foram
isolados clones com maior relação halo/colônia e também com maior diâmetro da colônia em
relação aos parentais. Inicialmente realizou-se cultivo submerso em diferentes meios com o
intuito de identificar uma condição adequada para a secreção de fenol-oxidases pelas linhagens
parentais de L. edodes e P. sajor-caju e neste contexto, o caldo batata dextrose (CBDY)
apresentou resultados satisfatórios para ambas as linhagens. Os clones selecionados, dos dois
fungos, foram cultivados em estado sólido utilizando serragem como substrato e também a
cultivo submerso em meio CBDY para caracterização quanto ao crescimento e secreção de
fenol-oxidases. Adicionalmente, os clones também foram cultivados em sacos contendo
serragem para a avaliação da produtividade de basidiomas. Um dos clones obtidos em P. sajorcaju,
mutante PS UV22, apresentou secreção 1,5 vezes maior de lacases, em relação à linhagem
parental em cultivo sólido. Outro mutante, PS UV56, apresentou secreção 2,1 vezes maior de
lacases, em relação ao parental em cultivo submerso. Com relação à produtividade de
basidiomas, dois clones, (PS3 e PS UV30) apresentaram aumento significativo em relação ao
parental PS-2001. Em L. edodes, foram identificados quatro clones (LE UV6, LE UV9, LE
UV11 e LE UV20), com aumento significativo na atividade de lacases em relação ao parental
LE-06, em cultivo submerso. No cultivo sólido foi selecionado um clone, mutante LE UV23 que
apresentou atividade de lacases 2,6 vezes maior que a parental LE-06. A partir dos resultados
obtidos, é possível afirmar que as técnicas de protoplastização e mutagênese podem ser
utilizadas no melhoramento genético de L. edodes e P. sajor-caju para aumento da atividade
enzimática e produtividade de basidiomas. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T13:04:13Z
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Dissertacao Anameli Lipreri.pdf: 3300819 bytes, checksum: ce60a0054f415dc33b8cca4173ce757f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The basidiomycetes Pleurotus sajor-caju and Lentinula edodes exhibit great industrial
interest due to properties nutritional and therapies and also due the secretion capacity of
phenoloxidases, enzymes with high biotechnological potential. The improvement genetic
becomes important to obtaining variants with features of interest, which can be obtained with
protoplastization and mutagenesis techniques. In this study the objective was obtaining clones
with increased activity of phenoloxidases (emphasizing laccases) and clones with high
productivity of the mushroom, seeking possible biotechnological and industrial applications.
The strains P. sajor-caju PS-2001 and L. edodes LE-06 were subjected to protoplastization and
mutagenesis of protoplasts by radiation UV method, and, by selective clones were isolated with
more relation halo/colony and also the larger diameter of the colony in comparison with their
parents. Initially held submerged cultive in different medium in order to identify the more
adequate condition for growth and enzyme secretion by parental strains (L. edodes and P. sajorcaju).
In this context, the potato dextrose broth (CBDY) showed satisfactory results for both
strains. The new selected clones, from the two fungi were submitted to solid-state cultive using
sawdust as the substrate and also to the submerged cultive in medium CBDY. In addition, new
clones were also grown in bags containing sawdust to evaluate the productivity of the
basidiomes. One of the mutants obtained from P. sajor-caju, strain PS UV22, showed 1.5 fold
higher secretion of laccase in comparison of the parental strain growing on solid-state cultive.
Another mutant, strain PS UV56, showed 2.1 fold higher secretion of laccases, compared to
parental submerged cultive. Regarding the productivity of basidiomes, two clones (PS3 and PS
UV30), showed a significant increase in comparison with parental PS-2001. In L. edodes, it was
identified two clones (LE UV9 and LE UV20), with a significant increase in laccase activity in
relation to parental LE-06 in submerged cultive. For solid-state cultive was selected a clone,
mutant LE UV23 that showed laccase activity 2.6 times greater than the parental LE-06. From
the results obtained in this study, it can be predicate that the protoplast formation and
mutagenesis techniques can be used in improvement genetic of L. edodes and P. sajor-caju for
enzyme activity and increased productivity of the basidiomes.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:vkali40.ucs.br:11338/671 |
| Date | 03 December 2012 |
| Creators | Lipreri, Anaméli |
| Contributors | Echeverrigaray, Sérgio, Paccola-Meirelles, Luzia Doretto, Brandelli, Adriano, Dillon, Aldo José Pinheiro |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UCS, instname:Universidade de Caxias do Sul, instacron:UCS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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