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Pablo Rafael Silveira Oliveira Modulação da ativação de macrofagos e agravamento da infecção....pdf: 1352782 bytes, checksum: 6124c322249b9e7b7ed3d1afbbb270a0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-08-01T21:34:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Pablo Rafael Silveira Oliveira Modulação da ativação de macrofagos e agravamento da infecção....pdf: 1352782 bytes, checksum: 6124c322249b9e7b7ed3d1afbbb270a0 (MD5)
Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Em humanos, tanto L. amazonensis quanto L. braziliensis causam a leishmaniose
cutânea localizada, mas, no Brasil, o desenvolvimento da leishmaniose cutâneodifusa
(LCD) é exclusivamente atribuído às infecções por L. amazonensis. Por outro
lado, a leishmaniose cutâneo-mucosa (LCM) está usualmente associada à L.
braziliensis. Enquanto a LCD é caracterizada pelo elevado número de parasitos nas
lesões e pela falta de resposta celular anti-Leishmania, a LCM é geralmente
acompanhada por resposta celular intensa e baixo número de parasitos nas lesões.
Portanto, é provável que diferenças espécie-específicas sejam determinantes para o
desenvolvimento dos dois polos de responsividade imune nas leishmanioses
cutâneas. Experimentos realizados em nosso laboratório mostraram que a
imunização de camundongos BALB/c com o extrato de formas amastigotas de L.
amazonensis (ELa) confere suscetibilidade à infecção por L. braziliensis. Os
principais objetivos do presente estudo foram identificar e elucidar os mecanismos
de ação dos fatores do ELa capazes de conferir suscetibilidade à infecção
experimental por L. braziliensis. Para isso, o ELa foi fracionado por cromatografia
líquida em coluna de troca iônica. As atividades das frações obtidas foram avaliadas
quanto às suas capacidades em interferir nas funções normais de macrófagos de
BALB/c, tornando-os suscetíveis à infecção cutânea causada por L. braziliensis.
Foram preparadas quatro misturas de frações adjacentes, eluídas da coluna, que
possuíam proteínas com perfis eletroforéticos na presença de dodecil sulfato de
sódio e atividades proteolíticas semelhantes. Estas misturas de frações foram
denominadas de frações 1, 2, 3 e 4. As frações 2, 3 e 4, e não a 1, foram capazes
de agravar a doença causada por L. braziliensis. Após a ativação dos macrófagos
com lipopolissacarídeo bacteriano (LPS), o ELa suprimiu a produção de óxido nítrico
e das citocinas inflamatórias avaliadas (TNF-α, IL-12p70 e IL-6). De maneira oposta,
o tratamento com o ELa aumentou a produção de IL-10 por macrófagos ativados por
LPS. Nenhuma das frações contendo moléculas eluídas da coluna de troca iônica,
ou a fração efluente da coluna, foi capaz de suprimir globalmente a produção de
citocinas inflamatórias e de NO e aumentar a produção de IL-10 in vitro, como
observado com o extrato total de amastigotas de L. amazonensis, após a ativação
dos macrófagos por LPS. Apenas o tratamento in vitro com a fração 3 suprimiu a
produção de TNF-α por macrófagos. A identificação e a elucidação dos mecanismos
de ação dos fatores capazes de agravar a leishmaniose cutânea podem ser
determinantes para o desenvolvimento de estratégias para o combate de patógenos
intracelulares e também para a imunomodulação terapêutica de doenças
autoimunes e alérgicas. / In humans, infections with Leishmania (Viannia) braziliensis usually induces a
intense cellular response and few lesions restricted to the skin and/or mucous
membrane, while infections with Leishmania (Leishmania) amazonensis can cause
also a very serious form of the disease, known as diffuse cutaneous leishmaniasis, in
which there is a poor cellular response to the parasite and disseminated lesions on
the skin of the host. Most inbred strains of mice, like the BALB/c, are susceptible to L.
amazonensis and resistant to L. braziliensis infections. This parasite-related
difference could result from the activity of a L. amazonensis-specific virulence factor.
In agreement with this hypothesis, we previously demonstrated that the immunization
of BALB/c mice with L. amazonensis amastigote extract (LaE), and not with L.
braziliensis extract, confers susceptibility to L. braziliensis infection. The main
objectives of this study were to identify and elucidate the mechanisms of action of the
LaE factors that contribute to the enhancement of experimental cutaneous
leishmaniasis. The LaE was fractioned by liquid chromatography on ion-exchange
column. The collected fractions were evaluated by their ability to subvert the normal
functions of macrophages, making BALB/c mice susceptible to the infection by L.
braziliensis. The fractions 2, 3 and 4, but not the fraction 1, were able, as well as the
total extract of L. amazonensis, to aggravate the cutaneous infection. The LaE
suppressed the inflammatory cytokine production (IL-12p70, IL-6 and TNF-α) in LPSstimulated
macrophages. On the other hand, LaE increased the IL-10 production in
LPS-stimulated macrophages. None of the fractions obtained by liquid
chromatography on ion-exchange column, neither the effluent fraction were able to
down-modulate the global production of inflammatory cytokines and NO and increase
the IL-10 production in activated macrophages. The in vitro treatment with the
fraction 3 suppressed the TNF-α production in macrophages. The identification and
elucidation of the action mechanisms of the factors that aggravate cutaneous
leishmaniasis may be determinant for the development of novel strategies to combat
intracellular pathogens but also for therapeutic immunomodulation of autoimmune
and allergic diseases.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/4258 |
| Date | January 2010 |
| Creators | Oliveira, Pablo Rafael Silveira |
| Contributors | Carvalho, Lain Carlos Pontes de, Cardillo, Fabíola, Soares, Milena Botelho Pereira, Carvalho, Lain Carlos Pontes de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | Pablo Rafael Silveira Oliveira, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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