Made available in DSpace on 2014-12-05T18:40:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2
license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5)
luciana_moreira_ioc_mest_2007.pdf: 9179691 bytes, checksum: 2c7d90ce2854f60c131128c9ab783c1e (MD5)
Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Corpúsculos lipídicos são inclusões preenchidas principalmente por triglicerídeos e ésteres de colesterol, sendo também depósitos intracelulares de ácido araquidônico (AA). A participação de corpúsculos lipídicos na geração eicosanóides por células hematopoiéticas é suportada pela localização de proteínas envolvidas na cascata metabólica do AA e co-localização do produto final desta via, a prostaglandina E2 (PGE2). A PGE2 é o principal metabólito do AA produzido por células epiteliais, sendo um potente mediador capaz de modular a motilidade, sobrevivência celular, proliferação celular e angiogênese, que são processos importantes na restauração da homeostase do tecido epitelial após injúria. O nosso objetivo central é investigar a modulação de corpúsculos lipídicos em células epiteliais. Analisando a indução de corpúsculos lipídicos por mediadores inflamatórios, as vias de sinalização intracelular envolvidas, e a modulação de corpúsculos lipídicos durante a proliferação e migração celular. Utilizamos como modelo experimental uma linhagem celular derivada de epitélio intestinal normal de rato (IEC-6)
A avaliação de corpúsculos lipídicos é realizada através da marcação com tetróxido de ósmio e contagem por microscopia de campo claro. Análise da expressão de proteínas é realizada por SDS-PAGE e a produção de PGE2 por ELISA. Células confluentes não apresentam corpúsculos lipídicos, enquanto células não-confluentes possuem em média de 15 a 20 corpúsculos/célula. A deprivação de soro fetal bovino leva a uma redução no número de corpúsculos lipídicos. Estímulos inflamatórios em células confluente, como IL-1?, PAF e PMA não provocam alterações no número de corpúsculos lipídicos. Enquanto a adição de AA induz a formação de corpúsculos lipídicos de maneira dose-dependente. A adição de PGE2, ou o tratamento com inibidores de COXs NS398 e Salicilato de Valeril não alteram o número de corpúsculos lipídicos. Inibidores seletivos de MEK 1 e 2 e de JNK 1,2 e 3 não interferem na indução de corpúsculos lipídicos por AA, enquanto o inibidor de p38 reduz em 80% a formação dessas estruturas. Nossos resultados indicam uma forte relação entre a biogênese de corpúsculos lipídicos e proliferação celular, e que essas organelas são induzidas de forma estímulo-específica em células epiteliais / Lipid Bodies (LBs) are cytoplasmic inclusions manly formed by triglycerides and
cholesterol esters, being also intracellular deposits of arachidonic acid (AA), which can be
metabolized for generation of eicosanoids. PGE2 is the major AA metabolite produced by
epithelial cells. It is a potent mediator of cell motility, survival, proliferation and angiogenesis,
all central processes to restoration of epithelial tissue homeostasis after injury. Our aim was
to investigate LBs biogenesis and their role in AA metabolic pathway in epithelial cells.
Specifically we evaluated: i) induction of LBs by inflammatory mediators; ii) intracellular
signaling pathways involved in such induction; iii) and modulation of LBs during cell
proliferation and migration. We used IEC-6 as experimental model, a cell line derived from
rat normal intestinal epithelium. LBs were evaluated under light microscopy after staining by
osmium tetroxide. Protein expression level was assessed by western blotting, and PGE2
generation determined by EIA in cell culture supernatants. IEC-6 cells cultured subconfluently
in DMEM supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS) presented 15-20
LBs/cell. FBS withdraw or reaching confluency eliminated LBs. FBS-induced LB biogenesis
in sub-confluent cells was blocked by ERK1/2 and p38 inhibitors. Stimulation of confluent
IEC-6 by IL-1b, PAF and PMA was unable to induce LBs. In contrast, addition of AA dosedependently-
induced LB formation, independent of its metabolism to PGE2, and proliferation
foci in confluent cells. LBs formation induced by AA was dependent on signaling through
p38, PKC and PI3K, but not on ERK 1/2 or JNK. LB biogenesis by epithelial cells facilitates
AA release after activation without changes in cytosolic phospholipase A2-a (cPLA2-a)
expression. Altogether, our results suggest a strong relationship between LB biogenesis and
cell proliferation, and indicate that such organelles are induced in a stimulus-specific manner
and facilitate AA mobilization in epithelial cells.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.arca.fiocruz.br:icict/9094 |
| Date | January 2007 |
| Creators | Moreira, Luciana de Souza |
| Contributors | Bozza, Patrícia Torres, Díaz, José Andrés Morgado, Canetti, Cláudio Azevedo, Monteiro, Clarissa Maya, Silva, Adriana Ribeiro, Diaz, Bruno Lourenço, Melo, Christianne Bandeira de |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ, instname:Fundação Oswaldo Cruz, instacron:FIOCRUZ |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
Page generated in 0.0028 seconds