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Corpúsculos lipídicos e eicosanoides nos momentos iniciais da infecção com Leishmania infantum chagasi

Santos, Théo Araújo January 2013 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2013-12-05T18:43:32Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Théo Araújo-Santos.pdf: 8310647 bytes, checksum: 79f3b7453e377fceaa874dda0b7901fe (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso (pbarroso@ufba.br) on 2013-12-17T17:41:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Théo Araújo-Santos.pdf: 8310647 bytes, checksum: 79f3b7453e377fceaa874dda0b7901fe (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-17T17:41:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Théo Araújo-Santos.pdf: 8310647 bytes, checksum: 79f3b7453e377fceaa874dda0b7901fe (MD5) / CNPq; CPqGM; UFBA / Corpúsculos lipídicos são organelas citoplasmáticas envolvidas na produção de eicosanoides em leucócitos. Eicosanoides como as prostaglandinas têm sido envolvidos no controle da resposta inflamatória e imunológica. A saliva de Lutzomyia longipalpis participa do estabelecimento e desenvolvimento da doença pela modulação das respostas hemostática, imunológica e inflamatória do hospedeiro favorecendo a infecção. Entretanto, o papel dos eicosanoides nos momentos iniciais da infecção por Leishmania ainda não foi esclarecido, assim como a participação da saliva neste contexto. Aqui, nós investigamos o papel dos eicosanoides induzidos pela saliva de L. longipalpis e produzidos pela Leishmania infantum chagasi na infecção. O sonicado de glândula salivar (SGS) de L. longipalis induziu um aumento no número de CLs em macrófagos de maneira dose e tempo dependente, o qual esteve correlacionado com o aumento de PGE2 nos sobrenadante de cultura. As enzimas COX- 2 e PGE-sintase foram co-localizadas nos CLs induzidos pela saliva e a produção de PGE2 foi reduzida pelo tratamento com NS-398, um inibidor de COX-2. Nós verificamos que o SGS rapidamente estimulou a fosforilação de ERK-1/2 e PKC-α e a inibição farmacológica dessas vias inibiu a produção de PGE2 pelos macrófagos estimulados com SGS. Em seguida, nós avaliamos o efeito da saliva de L. longipalpis sobre a produção de eicosanoides durante a infecção por L. i. chagasi no modelo peritoneal murino. Nós observamos que a saliva aumentou a viabilidade intracelular de L. i. chagasi tanto em neutrófilos como em neutrófilos recrutados para a cavidade peritoneal. As células recrutadas para cavidade peritoneal apresentaram maiores níveis da relação PGE2/LTB4 e o pré-tratamento com NS-398 reverteu o efeito da saliva sobre a viabilidade intracelular dos parasitas. Parasitas como Leishmania são capazes de produzir PGs utilizando uma maquinaria enzimática própria. Neste estudo nós descrevemos a dinâmica de formação e a distribuição celular dos CLs em L. i. chagasi bem como a participação desta organela na produção de PGs. A quantidade de CLs aumentou durante a metaciclogênese assim como a expressão de PGF2α sintase (PGFS), sendo esta enzima co-localizada nos CLs. A adição de ácido araquidônico AA à cultura de L. i. chagasi aumentou a quantidade de CLs por parasita, bem como a secreção de PGF2α. A infecção com as diferentes formas de L. i. chagasi não foi capaz de estimular a formação de CLs na célula hospedeira. Por outro lado, os parasitas intracelulares apresentaram maiores quantidades de CLs. A infecção estimulou uma rápida expressão de COX-2, mas não foi detectado aumento na produção de PGF2α nos sobrenadantes. Por fim, nós verificamos a presença do receptor de PGF2α (FP) nos vacúolos parasitóforos de macrófagos infectados com L. i. chagasi. O prétratamento das células com um antagonista do receptor FP inibiu os índices de infecção de forma dose-dependente. Em conjunto, nossos dados apontam que os eicosanoides desempenham um papel crucial para evasão da resposta imune durante os momentos iniciais da infecção por L. i. chagasi com diferentes contribuições do parasita, do vetor e da célula hospedeira neste contexto.
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Estudo da modulação de corpúsculs lipídicos em células epiteliais

Moreira, Luciana de Souza January 2007 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-05T18:40:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luciana_moreira_ioc_mest_2007.pdf: 9179691 bytes, checksum: 2c7d90ce2854f60c131128c9ab783c1e (MD5) Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Corpúsculos lipídicos são inclusões preenchidas principalmente por triglicerídeos e ésteres de colesterol, sendo também depósitos intracelulares de ácido araquidônico (AA). A participação de corpúsculos lipídicos na geração eicosanóides por células hematopoiéticas é suportada pela localização de proteínas envolvidas na cascata metabólica do AA e co-localização do produto final desta via, a prostaglandina E2 (PGE2). A PGE2 é o principal metabólito do AA produzido por células epiteliais, sendo um potente mediador capaz de modular a motilidade, sobrevivência celular, proliferação celular e angiogênese, que são processos importantes na restauração da homeostase do tecido epitelial após injúria. O nosso objetivo central é investigar a modulação de corpúsculos lipídicos em células epiteliais. Analisando a indução de corpúsculos lipídicos por mediadores inflamatórios, as vias de sinalização intracelular envolvidas, e a modulação de corpúsculos lipídicos durante a proliferação e migração celular. Utilizamos como modelo experimental uma linhagem celular derivada de epitélio intestinal normal de rato (IEC-6) A avaliação de corpúsculos lipídicos é realizada através da marcação com tetróxido de ósmio e contagem por microscopia de campo claro. Análise da expressão de proteínas é realizada por SDS-PAGE e a produção de PGE2 por ELISA. Células confluentes não apresentam corpúsculos lipídicos, enquanto células não-confluentes possuem em média de 15 a 20 corpúsculos/célula. A deprivação de soro fetal bovino leva a uma redução no número de corpúsculos lipídicos. Estímulos inflamatórios em células confluente, como IL-1?, PAF e PMA não provocam alterações no número de corpúsculos lipídicos. Enquanto a adição de AA induz a formação de corpúsculos lipídicos de maneira dose-dependente. A adição de PGE2, ou o tratamento com inibidores de COXs NS398 e Salicilato de Valeril não alteram o número de corpúsculos lipídicos. Inibidores seletivos de MEK 1 e 2 e de JNK 1,2 e 3 não interferem na indução de corpúsculos lipídicos por AA, enquanto o inibidor de p38 reduz em 80% a formação dessas estruturas. Nossos resultados indicam uma forte relação entre a biogênese de corpúsculos lipídicos e proliferação celular, e que essas organelas são induzidas de forma estímulo-específica em células epiteliais / Lipid Bodies (LBs) are cytoplasmic inclusions manly formed by triglycerides and cholesterol esters, being also intracellular deposits of arachidonic acid (AA), which can be metabolized for generation of eicosanoids. PGE2 is the major AA metabolite produced by epithelial cells. It is a potent mediator of cell motility, survival, proliferation and angiogenesis, all central processes to restoration of epithelial tissue homeostasis after injury. Our aim was to investigate LBs biogenesis and their role in AA metabolic pathway in epithelial cells. Specifically we evaluated: i) induction of LBs by inflammatory mediators; ii) intracellular signaling pathways involved in such induction; iii) and modulation of LBs during cell proliferation and migration. We used IEC-6 as experimental model, a cell line derived from rat normal intestinal epithelium. LBs were evaluated under light microscopy after staining by osmium tetroxide. Protein expression level was assessed by western blotting, and PGE2 generation determined by EIA in cell culture supernatants. IEC-6 cells cultured subconfluently in DMEM supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS) presented 15-20 LBs/cell. FBS withdraw or reaching confluency eliminated LBs. FBS-induced LB biogenesis in sub-confluent cells was blocked by ERK1/2 and p38 inhibitors. Stimulation of confluent IEC-6 by IL-1b, PAF and PMA was unable to induce LBs. In contrast, addition of AA dosedependently- induced LB formation, independent of its metabolism to PGE2, and proliferation foci in confluent cells. LBs formation induced by AA was dependent on signaling through p38, PKC and PI3K, but not on ERK 1/2 or JNK. LB biogenesis by epithelial cells facilitates AA release after activation without changes in cytosolic phospholipase A2-a (cPLA2-a) expression. Altogether, our results suggest a strong relationship between LB biogenesis and cell proliferation, and indicate that such organelles are induced in a stimulus-specific manner and facilitate AA mobilization in epithelial cells.
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Mecanismos de biogênese e função dos corpúsculos lipídicos durante a infecção pelo vírus dengue

Lima, Giselle Barbosa de January 2015 (has links)
Submitted by Gilvan Almeida (gilvan.almeida@icict.fiocruz.br) on 2016-10-11T17:34:20Z No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) / Approved for entry into archive by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-24T11:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 72038.pdf: 3196059 bytes, checksum: 8c47650717cf5a0ee1266bcc0b5d389d (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A dengue é caracterizada como a principal arbovirose humana, representando um grave problema de saúde pública. A superativação de células do sistema imune pode ser destacada como um dos fatores envolvidos na progressão da doença para as formas mais graves. Embora os monócitos sejam reconhecidos como importante fonte de citocinas, a participação das plaquetas na patogênese da dengue permanece pouco explorada. Recentemente, nosso grupo mostrou a contribuição da interação plaqueta-monócito na resposta inflamatória observada durante a dengue. De fato, o papel das plaquetas na resposta imune e inflamatória é cada vez mais frequente. Dentro deste contexto, foi proposto que plaquetas ativadas por estímulo específico sinalizam para mudanças fenotípicas nos monócitos, incluindo a diferenciação em células espumosas que é caracterizada pelo aumento da biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) \2013 organelas citoplasmáticas dinâmicas ricas em lipídios relacionadas a processos inflamatórios e infecciosos. Nossos estudos prévios demonstraram um aumento da biogênese de CL tanto em leucócitos isolados de pacientes com a forma grave da doença quanto em células infectadas com o vírus dengue (DENV) in vitro, com participação na localização da proteína do capsídeo viral e na produção de partículas virais infecciosas. Entretanto, os mecanismos que regulam a biogênese e a função destas organelas durante a infecção pelo DENV precisam ser melhor caracterizados. Assim, pretende-se com este trabalho (i) analisar os mecanismos que levam à biogênese de CL em distintos tipos celulares infectados com o DENV in vitro; (ii) estudar os efeitos de plaquetas ativadas com o DENV in vitro sobre a imunomodulação dos monócitos, no que diz respeito, principalmente, à formação de CL; (iii) investigar o efeito de drogas que atuam na gênese de CL e o seu impacto na replicação viral e na secreção de mediadores inflamatórios Inicialmente, nossos resultados demonstram um aumento na formação e/ou tamanho de CL em distintos tipos celulares infectados in vitro, de uma maneira dependente da integridade viral, visto que o vírus inativado por aquecimento falhou em induzir a biogênese destas organelas. Observamos que a modulação da lipogênese e da formação de CL afetam a capacidade replicativa do vírus. Além disso, constatamos que o DENV é capaz de modular positivamente a expressão de genes envolvidos no metabolismo de lipídios, de forma independente do MIF \2013 citocina que induz a gênese de CL em monócitos \2013 secretado durante a infecção. Na segunda parte deste estudo, observamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro rapidamente formam agregados com monócitos quando comparado com plaquetas estimuladas com mock. Adicionalmente, plaquetas ativadas com o DENV sinalizam para que monócitos aumentem a expressão de COX-2 e a secreção de PGE2 e CXCL8/IL-8. De forma recíproca, observamos que estas células contribuem para uma maior ativação das plaquetas, que então secretam níveis elevados de CCL5/RANTES e CXCL4/PF4. Em seguida, constatamos que plaquetas ativadas com o DENV in vitro são capazes de promover a biogênese de CL em monócitos, de uma maneira dependente da enzima ácido graxo sintase Ao utilizarmos o C75, inibidor desta enzima, também observamos uma redução nos níveis de PGE2, mas não de CXCL-8/IL-8, sugerindo um papel dos CL na produção deste mediador lipídico. O MIF, secretado durante a ativação de plaquetas pelo DENV in vitro, também está envolvido na sinalização que culmina na formação de CL em monócitos expostos a plaquetas ativadas. De forma surpreendente, o sobrenadante de plaquetas ativadas com o DENV não induz a biogênese de CL em monócitos, sugerindo a importância do contato direto entre essas células. De fato, a interação com plaquetas ativadas mostrou-se crucial para que os monócitos respondam funcionalmente, incluindo a secreção de mediadores inflamatórios e o aumento da formação de CL. Por fim, a biogênese destas organelas é maior nos agregados formados com plaquetas ativadas com o DENV, corroborando esta hipótese. Sendo assim, esses dados fortemente sugerem que a interação direta com plaquetas ativadas com o DENV seja crucial para que os monócitos respondam com funções específicas e contribuam para a patogênese da doença. Portanto, o conjunto dos resultados obtidos nos revela a importância em estabelecer estratégias terapêuticas adequadas para controlar a resposta do hospedeiro frente à infecção, onde a própria modulação dos CL possa vir a representar um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dengue / Dengue is characterized as the most important arthropod-borne human viral disease worldwide, representing a public health problem. Increased activation of immune cells could be involved in the progression of disease to severe forms. Although monocytes have been recognized as important sources of cytokines, the role of platelets in dengue pathogenesis remains understood. Recently our group showed the contribution of platelet-monocyte interaction to inflammatory responses observed in dengue. In fact, it is becoming increasingly clear that platelets have inflammatory functions and can influence innate response. Evidences suggest that specific stimuli-activated platelets can promote phenotypic changes in monocytes, including enhanced foam cell formation, that is characterized by an increase in lipid droplets (LD) \2013 dynamic cytoplasmic lipid-rich organelles, associated to inflammatory and infectious conditions \2013 biogenesis. Our previous works showed a significant increase in LD accumulation in leukocytes from dengue hemorrhagic fever patients, as well as in different cell types infected in vitro. Besides, these organelles were involved in capsid protein localization and virus particle morphogenesis. However, the mechanisms involved in LD biogenesis and function during dengue virus (DENV) infection still unclear. Therefore, this study aim to (i) investigate the mechanisms related to LD formation in distinct cell types during DENV infection; (ii) evaluate the roles of DENV-activated platelets on monocytes immunomodulation in vitro, focusing on LD biogenesis; (iii) analyze the effects of drugs that abrogate LD formation and your impact on viral replication and secretion of inflammatory mediators Our results demonstrate a significant increase in LD number and/or area in distinct cell types infected in vitro. Importantly, heat inactivated DENV failed to induce LD biogenesis in vitro. Besides, modulation of lipogenesis and LD formation, by C75- or triacsin C-treated cells, impair DENV replication. We also observe that DENV is able to modulate genes involved in lipid metabolism, in a MIF \2013 cytokine that induces LD genesis in monocytes \2013 independent fashion. In the second part of this study, we show that platelets exposed to DENV in vitro form aggregates with monocytes and activate signaling cascade in these cells, which culminates in CXCL8/IL-8 secretion. In addition, platelet-monocyte aggregates formation reciprocally increase platelet activation, observed by an enhanced production of CCL5/RANTES and CXCL4/PF4. DENV-activated platelets increase LD formation and COX-2 activation in monocytes, leading to secretion of PGE2. Damping LD biogenesis through treatment with the fatty acid synthase (FAS) inhibitor C75 prevents PGE2, but not CXCL8/IL-8, secretion by platelet-monocyte aggregates. We also demonstrate that DENV-activated platelets secrete high levels of MIF. LD formation in monocytes exposed to DENV-activated platelets is partially dependent on platelet-derived MIF However, the supernatant from DENV-activated platelets is not sufficient to induce LD biogenesis in monocytes. Finally, LD formation is higher in monocytes which have platelets adhered on surface compared to monocytes that do not contact platelets, suggesting that beyond soluble mediators, platelet adhesion is a major event in platelet-mediated modulation of lipid metabolism in monocytes. Thus, our results indicate that DENV infection promotes LD biogenesis and that this event seems to be dependent of host lipid metabolism, since specific inhibition of enzymes involved in lipogenesis blocks the formation of these organelles. This inhibition also leads to decreased DENV replication, suggesting a role of LD in this process. Moreover, our data provide new evidence that DENV-activated platelets modulate LD formation as well as cytokine signaling in monocytes, during cellular aggregates formation, and these events may contribute to dengue pathogenesis. Therefore, the modulation of LD formation might represent an attractive therapeutic target for dengue
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Efeito agudo do consumo de suco de Passiflora Setacea na capacidade fagocitária e na produção de corpúsculos lipídicos e radicais livres por monócitos de voluntários com sobrepeso

Duarte, Isabella de Araújo Esteves 10 December 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-04-07T17:15:48Z No. of bitstreams: 1 2015_IsabelladeAraújoEstevesDuarte.pdf: 2801586 bytes, checksum: 0839513f7a6d842d53d240a3695fdff3 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-04-11T20:52:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_IsabelladeAraújoEstevesDuarte.pdf: 2801586 bytes, checksum: 0839513f7a6d842d53d240a3695fdff3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-11T20:52:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_IsabelladeAraújoEstevesDuarte.pdf: 2801586 bytes, checksum: 0839513f7a6d842d53d240a3695fdff3 (MD5) / Passiflora setacea (PS) é uma espécie silvestre de maracujá do Cerrado, que recentemente tem sido descoberta ser rica em compostos fenólicos (CF), compostos bioativos encontrados em frutas e hortaliças. Estudos recentes têm mostrado que a polpa de PS também apresenta efeitos antiestresse e na melhora do sono noturno. Existem algumas associações entre uma dieta rica em CF e modulação do estresse oxidativo na prevenção de doenças crônicas não-transmissíveis (DCNT). Apesar de estas associações ainda estarem em estudo, pode-se sugerir que esses efeitos estejam relacionados à modulação pelos CF da superprodução de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, da expressão de corpúsculos lipídicos e da capacidade fagocitária de macrófagos e monócitos ativados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos imunomodulatórios do consumo de suco de PS por voluntários com sobrepeso. Homens (n=10), de meia-idade foram incluídos em um estudo controlado, randomizado, transversal, duplo-cego para comparar o efeito do consumo de 300mL de suco PS e da bebida placebo (PB) com um período de washout de 4 semanas. Amostras de sangue foram coletadas antes (t0h), em jejum - e 3 h após o consumo (t3h) e as células mononucleares humanas (PBMC) foram isoladas para avaliar a produção de óxido nítrico (NO) e de peróxido de hidrogênio (H2O2), a capacidade fagocitária e expressão de corpúsculos lipídicos (CL) de monócitos. O consumo do suco de PS gerou aumento da capacidade fagocitária, ao aumentar o número de monócitos envolvidos no mecanismo de fagocitose (MO%) por opsoninas (p=0,04). A variação intrapessoal (% delta) causada pelo consumo do suco de PS demonstrou aumento do MO% por opsoninas (p=0,046) e por PAMP (receptores padrões moleculares de patógenos) (p=0,020) quando comparado com a bebida PB, assim como o índice fagocitário (IF) por opsoninas (p=0,04) e por PAMP (p=0,01). O suco de PS não afetou a produção de NO e H2O2, porém, o delta (%) sugeriu uma possível diminuição da produção de H2O2 após o consumo do suco de PS, em comparação com o PB (p=0,09), que seria possível verificar com o aumento da amostra (n). A expressão de CL também não foi alterada pelo suco de PS. Tem sido verificado o aumento de fagocitose de patógenos e células tumorais na presença de CF, o que pode sugerir que o consumo agudo do suco de PS pode gerar uma maior eficácia do sistema imune inato e adquirido frente a um patógeno. A tendência na diminuição da produção de H2O2 pode corroborar a hipótese de um sistema imune eficaz e com redução de dano celular, dano normalmente causado pela superprodução desse radical livre. Porém, é necessário avaliar outras variáveis de análise para confirmar essa eficácia, como aumentar o n da amostra e avaliar um ponto de análise a mais (t6h). / Passiflora setacea (PS) is a wild species of the Cerrado passion fruit, which has recently been found to be rich in phenolic compounds (PC), bioactive compounds found in fruits and vegetables. Recent studies have shown that the pulp of PS has anti-stress effects and also improves nocturnal sleep. There are some associations between a diet rich in PC and modulation of oxidative stress in the prevention of chronic diseases (CDs). Although these associations are still under study, it may be suggested that these effects are related to modulation by PC of the overproduction of reactive oxygen and nitrogen species, of lipid droplets (LD), as well as the expression and phagocytic capacity of activated macrophages and monocytes. Therefore, the aim of this study was to investigate the immunomodulatory effects of PS juice consumption by overweight volunteers. Middle-aged men (n=10) were enrolled in a controlled, randomized, cross, double-blind study to compare the effect of 300mL of PS juice consumption and placebo drink (PB) with a 4-week-washout-period. Blood samples was collected before (t0h) fasting, and 3 hours after (t3h) the consumption and human mononuclear cells (PBMC) were isolated to assess the production of nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide (H2O2), the phagocytic capacity and expression of lipid bodies (CL) of monocytes. The PS juice consumption increased phagocytic capacity, by increasing the number of monocytes involved in phagocytosis mechanism (MO%) by opsonins (p=0.04). The personal variation (% delta) caused by the PS juice consumption, demonstrated an increase of MO% by opsonins (p=0.046) and PAMP (molecular pattern receptors of pathogens) (p=0.020) when compared to PB drink, as well as the index phagocyte (IP) by opsonins (p=0.04) and PAMP (p=0.01). The PS juice did not affect the production of NO and H2O2, however, the delta (%) suggested a possible decrease of the H2O2 production after PS juice consumption compared with PB (p = 0.09), which would be possible to verify through the increase of the sample (n). LD expression was also not altered by the PS juice. It has been found an increase of phagocytosis of pathogens and tumor cells in the presence of PC, which may suggest that acute use of PS juice can generate a greater effectiveness of the innate and acquired immune system against a pathogen. The trend in decreased production of H2O2 can corroborate the assumption of an efficient immune system with cellular damage reduction, which is usually caused by overproduction of this free radical. However, it is necessary to evaluate other variables of analysis to confirm its effectiveness, as to increase the sample (n) and to add another time period of observation (t6h).
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Papel da obesidade na imunomodulação da infecção experimental por Mycobacterium bovis BCG

Rodrigues, Gabriel Santos Cruz 03 April 2014 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-15T13:08:10Z No. of bitstreams: 1 gabrielsantoscruzrodrigues.pdf: 1333283 bytes, checksum: 46d4dabb8192501d9b5b879ecdd9a3e4 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:23:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gabrielsantoscruzrodrigues.pdf: 1333283 bytes, checksum: 46d4dabb8192501d9b5b879ecdd9a3e4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gabrielsantoscruzrodrigues.pdf: 1333283 bytes, checksum: 46d4dabb8192501d9b5b879ecdd9a3e4 (MD5) Previous issue date: 2014-04-03 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é um grande problema de saúde mundial e com os hábitos e estilos de vidas atuais a sua importância social só tende a crescer. Hoje associa-se a obesidade com o mau prognóstico de diversas doenças, como câncer, diabetes e doenças auto-imune brandas, além disso, ela também está associada a uma resposta imune deficitária frente a infecções por diversos patógenos, como alguns vírus e bactérias. A tuberculose é uma doença infecto-contagiosa, mais comumente pulmonar, causada pelo Mycobacterium tuberculosis (ou bacilo de Koch) e outros membros do complexo Mycobacterium tuberculosis. Esta doença causa cerca de 1,4 milhões de morte ao ano, sendo constatados cerca de 8 milhões de novos casos ao ano , estando apenas atrás da AIDS na taxa de mortalidade por doenças infecciosas e seu sucesso se deve em parte à capacidade de viver de meses à décadas no hospedeiro, em estado assintomático. Neste trabalho, avaliamos a relação entre a obesidade e o desenvolvimento da tuberculose, através do modelo de infecção experimental por Mycobacterium bovis BCG em camundongos C57/BL6 controles e tratados com dieta hiperglicídica. Os resultados demonstraram que os animais obesos apresentaram um menor recrutamento leucocitário, dentre estes, menor influxo de neutrófilos e eosinófilos. Além disso, animais obesos apresentaram menor formação de corpúsculos lipídicos, menor produção de PGE2, maior produção de mediadores anti-inflamatórios, como IL-10 e adiponectina, e menor produção de mediadores pró-inflamatórios, como leptina, em comparação aos animais controles. De maneira geral, nossos resultados apontam que a obesidade induz um perfil mais anti-inflamatório, inibindo a expressão de fatores de favorecimento do patógeno, como a formação de corpúsculos lipídicos, PGE2 e eosinofilia, sugerindo que a obesidade, nos estágios iniciais de infecção, pode modular negativamente a resposta inflamatória induzida pela infecção micobacteriana. / Obesity is a huge world health problem and with the habits and lifestyles of these days, it’s important only tend to grown. Today obesity is associated with a bad prognosis of a large number of diseases , like cancer, diabetes and light self-immune diseases, and besides that, its also associated with an uncompleted response to several pathogens, like some virus and bacteria. The tuberculosis is an infect-contagious disease, commonly pulmonary, caused by Mycobacterium tuberculosis (or, Koch bacillus), and other members of the Mycobacterium tuberculosis complex. This illness cause about 1,4 million deaths per year, being registered 8 million new cases per year, being only behind AIDS on the mortality ratio by infectious diseases in the world and ur success can be related to your capacity to live from months to decades on the host , in a asymptomatic state. In this work, we evaluated the relationship between the obesity and the development of tuberculosis, by using the experimental infection model by Mycobacterium bovis BCG. C57/BL6 mice, male, with about 4 to 6 weeks of life, had being fed with standard ration (control group) or hiperglicidic ration (obese group), for 0, 2 or 3 months. The body weight was monitored during this period, and the fat gain and glucose tolerance was measured at the end, so the state of obesity could be characterized. At the end of these periods, this animals received a intraperitoneal inoculation of 100 mL of saline solution (infection control) or 100 mL of BCG solution (infected group) and characteristic processes of this infection were observed, like leukocitary recruitment , lipid bodies formation on these cells, the production of pro and anti-inflammatory cytokines, eicosanoids (PGE2) and adipokines. Was observed then, that the obese animals, presented a lower leukocitary recruitment , among then, less influx of neutrophils and eosinophils, lower formation of lipid bodies and production of PGE2 , higher production of anti-inflammatory mediators (IL-10 and adipokine) and lower production of pro-inflammatory mediators (leptin) . Overall , our data points to a more anti-inflammatory profile on the obese animals , occurring in a minor expression of factors that are important to the pathogen survival , like the formation of lipid bodies and eosinophilia , indicating that, the obesity, on the early stages of the infection, may be representing a disadvantaging factor to the disease.
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Ação da vitamina “E” na modulação do metabolismo lipídico e da tumorigênese na linhagem de câncer de mama triplo negativo MDA-MB-231 suplementada com ácido docosahexaenóico

Vasconcelos, Larissa Fernanda Melo 10 September 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Nutrição, Programa de Pós-Graduação em Nutrição Humana, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-02-17T17:56:37Z No. of bitstreams: 1 2015_LarissaFernandaMeloVasconcelos.pdf: 3272887 bytes, checksum: aa5453ef5b96e8bbe345a1a7aa4c2147 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-02-17T20:46:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_LarissaFernandaMeloVasconcelos.pdf: 3272887 bytes, checksum: aa5453ef5b96e8bbe345a1a7aa4c2147 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-17T20:46:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_LarissaFernandaMeloVasconcelos.pdf: 3272887 bytes, checksum: aa5453ef5b96e8bbe345a1a7aa4c2147 (MD5) / INTRODUÇÃO: O ácido graxo poliinsaturado docosahexaenóico (DHA), da família Ômega-3, e a Vitamina E são bastante estudados no microambiente tumoral em virtude da sua atuação como fator de proteção contra a progressão do câncer de mama, porém a atividade desses compostos na biogênese de corpusculos lipídicos em células tumorais ainda é um pouco explorada. OBJETIVO: Investigar a ação de diferentes isoformas da vitamina E (Alfa-tocoferol, Delta-tocoferol e o Delta-tocotrienol) em células da linhagem de câncer de mama MDA-MB-231 suplementadas com DHA, na atuação na modulação do metabolismo lipídico e tumorigênese. METODOLOGIA: Células MDA-MB-231 foram tratadas com o 50 μM de DHA, 5 μM das isoformas de vitamina E ou ambos (coestimulos) para avaliar citotoxicidade, indução de espécies reativas de oxigênio, biogênese de corpúsculos lipídicos, expressão do receptor PPARγ, lipofagia, e parâmetros da carcinogênese como a proliferação, a sobrevivência e a migração celular. RESULTADOS: O DHA e as vitaminas “E” não reduziram a viabilidade das células nas dosagens estudadas, sendo que o DHA aumentou a produção de ROS, e o coestimulo com Delta-Tocotrienol inibiu a produção de ROS. Houve aumento na biogênese de corpúsculos lipídicos nos tratamentos, porém as vitaminas “E” e os coestimulos apresentaram menor expressão de PPARγ. A lipofagia foi identificada nos tratamentos com DHA e DHA + Delta-Tocotrienol. Em relação aos parâmetros de tumorigênese, foi verificado diminuição da migração celular nos tratamentos com DHA e coestimulos de DHA + Delta-Tocoferol e DHA + Delta-Tocotrienol. CONCLUSÃO: A presença das diferentes isoformas de vitamina E modulam a biogênese dos corpúsculos lipídicos, e na presença do Delta-Tocotrienol há maior ocorrência de lipofagia e menor migração celular. / INTRODUCTION: Polyunsaturated fatty docosahexaenoic acid (DHA), the omega-3 family, and Vitamin E are extensively studied in the tumor microenvironment by virtue of its role as a protective factor against progression of breast cancer, but the activity of these compounds in biogenesis of lipid droplets in tumor cells is still a little explored. To investigate the action of different isoforms of vitamin E (alpha-tocopherol, delta-tocopherol and delta-tocotrienol) in MDA-MB-231 breast cancer cell line supplemented with DHA, in acting in the modulation of lipid metabolism and tumorigenesis. METHODOLOGY: MDA-MB-231 cells were treated with 50μM of DHA, 5μM isoforms of vitamin E or both (coestimulos) to assess cytotoxicity, induction of reactive oxygen species, biogenesis lipid droplets, PPAR gamma receptor expression, lipofagia and carcinogenesis parameters such as proliferation, survival, and cell migration. RESULTS: The DHA and vitamins "E" did not reduce cell viability in the studied dosages, and DHA increased ROS production, and coestimulo with Delta-Tocotrienol inhibited the ROS production. There was an increase in the biogenesis of lipid droplets in treatments, however vitamins "E" and coestimulos had lower expression of PPAR gamma. The lipofagia was identified in the treatments with DHA and DHA + Delta-Tocotrienol. In relation to tumorigenesis parameters, it was found decreased cell migration in treatment with DHA and DHA + coestimulos of Delta-Tocopherol and DHA + Delta-Tocotrienol. CONCLUSION: The presence of different isoforms of vitamin E modulate the biogenesis of lipid droplets, and Delta-Tocotrienol's presence is higher occurrence of lipofagia and lower cell migration.
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Biogênese e função dos corpúsculos lipídicos na infecção pelo vírus dengue

Lima, Giselle Barbosa de January 2011 (has links)
Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-11-29T23:10:02Z No. of bitstreams: 1 giselle_b_lima_ioc_bcm_0040_2011.pdf: 7861380 bytes, checksum: c1b5adc38492ad939e7501fe4217d53a (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-29T23:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 giselle_b_lima_ioc_bcm_0040_2011.pdf: 7861380 bytes, checksum: c1b5adc38492ad939e7501fe4217d53a (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A dengue, em termos de morbidade e mortalidade, é caracterizada como a principal arbovirose humana, sendo responsável pela infecção de milhares de pessoas nas regiões tropical e subtropical do mundo, causando a morte de adultos e crianças. Uma das razões para a ausência de abordagens terapêuticas adequadas se deve ao pouco conhecimento dos mecanismos moleculares envolvidos na interação do vírus dengue com as células hospedeiras. No entanto, evidências sugerem que a regulação de diferentes etapas do metabolismo celular desempenhe funções cruciais tanto na replicação viral quanto na resposta do hospedeiro à infecção. Estudos têm demonstrado que o acúmulo intracelular de lipídios em corpúsculos lipídicos – organelas citoplasmáticas dinâmicas e funcionalmente ativas – está associado a doenças de grande relevância para a saúde pública, incluindo a hepatite C. Além disso, foi observado que estas organelas desempenham funções não apenas na replicação do vírus da hepatite C, mas também na produção de partículas infecciosas; entretanto, o envolvimento dos corpúsculos lipídicos durante a infecção pelo vírus dengue ainda não foi avaliado. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a formação e função dos corpúsculos lipídicos durante a infecção pelo vírus dengue, com foco na interação com proteínas virais, na modulação da capacidade replicativa e/ou infecciosa do vírus e na geração aumentada de mediadores inflamatórios. Nossos resultados demonstraram um aumento no número de corpúsculos lipídicos em leucócitos isolados de pacientes com a forma grave da doença, bem como indução da biogênese destas organelas em diferentes tipos celulares infectados com distintos sorotipos do vírus dengue in vitro. A exposição de células ao vírus dengue inativado por aquecimento não promoveu a formação de corpúsculos lipídicos. Em paralelo à indução da formação destas organelas, em células infectadas in vitro, observamos um aumento na produção de PGE2. Adicionalmente, demonstramos que a proteína do capsídeo viral, bem como o MIF – mediador proinflamatório cuja concentração está diretamente correlacionada com a gravidade da doença – se encontravam colocalizados nos corpúsculos lipídicos durante a infecção. Por fim, observamos que a modulação da lipogênese e da formação de corpúsculos lipídicos, através do tratamento das células com as drogas C75 e triacsin C, afetaram a capacidade replicativa do vírus. Desta forma, os nossos resultados indicam que a infecção pelo vírus dengue promove a biogênese de corpúsculos lipídicos de uma maneira dependente das enzimas ácido graxo sintase e acil-CoA sintetase, uma vez que a inibição destas por drogas específicas leva ao bloqueio da formação destas organelas. Esta inibição também promove uma redução na replicação viral, propondo um papel dos corpúsculos lipídicos neste processo. Além disso, o aumento na geração de PGE2 induzido pelo vírus, bem como a localização do MIF e da proteína do capsídeo viral nestas organelas sugerem que os corpúsculos lipídicos atuem na produção aumentada de mediadores inflamatórios e na regulação temporária do processo viral. Assim, a modulação dos corpúsculos lipídicos pode vir a representar um potencial alvo terapêutico para o tratamento da dengue. / Dengue, in terms of disease and mortality, is characterized as the most important arthropod-borne human viral disease, infecting millions of people in tropical and subtropical regions of the world and being responsible for many deaths in children and adults. The lack of adequate therapeutic approaches for treatment of dengue is a consequence of our limited understanding about the molecular mechanisms that underlie the interaction between dengue virus and human host. However, evidence suggests that the regulation of different steps of cellular metabolism play crucial roles in both viral replication and the host response to infection. Recent studies have shown that intracellular accumulation of lipids within lipid droplets – dynamic and functionally active organelles – is associated with diseases of major relevance to public health, including hepatitis C. Furthermore, it was observed that these organelles play roles not only in hepatitis C virus replication, but also in the production of infectious particles; however the involvement of lipid droplets in dengue virus infection has never been addressed. Therefore, this work aimed to investigate lipid droplets formation and function during dengue virus infection, focusing on interaction with viral proteins, modulation of replication and/or production of infectious virus and increased generation of inflammatory mediators. Our results demonstrated a significant increase in lipid droplets accumulation in leukocytes from dengue hemorrhagic fever patients, as well as induction of biogenesis in different cell types infected with distinct serotypes of dengue virus in vitro. Importantly, heat inactivated dengue virus failed to induce lipid droplets formation in cells infected in vitro. In paralleled to an increased lipid droplets biogenesis, in cells infected in vitro, we observed an increase in PGE2 generation. Additionally, we also demonstrated that the virus core protein and MIF – proinflammatory mediator whose concentration is directly related to disease severity – co-localizes in lipid droplets during infection. Finally, we observed that modulation of lipogenesis and lipid droplets formation, by treatment of the cells with C75 and triacsin C, impaired dengue virus replication. Thus, our results indicate that dengue virus infection promotes lipid droplets biogenesis and that this event seems to be dependent of the enzymes fatty acid synthase and acyl-CoA synthetase, since specific inhibition of these enzymes blocks the formation of these organelles. This inhibition also leads to decreased viral replication, suggesting a role of lipid droplets in this process. Moreover, the increased production of PGE2 induced by dengue virus, as well as MIF and virus core protein localization in these organelles propose that lipid droplets are involved in both increased generation of inflammatory mediators as temporary regulation of viral process. So, the modulation of lipid droplets might represent an attractive therapeutic target for dengue.
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Estudo dos fatores envolvidos na formação de corpúsculos lipídicos, induzido por uma fosfolipase A2, isolada do veneno de serpente: síntese e metabolismo de lipídeos. / Study of factors involved in lipid droplets formation induced by a phospholipase A2, isoleted from snake venom: synthesis and lipid metabolismo.

Leiguez Junior, Elbio 16 March 2015 (has links)
Os venenos de serpentes contêm concentrações elevadas de fosfolipases A2 secretadas (sFLA2), que apresentam homologia com as FLA2s de mamíferos, cujos níveis estão aumentados em doenças inflamatórias. Neste estudo, investigou-se a ativação e a expressão de fatores envolvidos na formação de corpúsculos lipídicos (CLs) em células fagociticas e o papel desses fatores na resposta imune inata, induzida pela MT-III, uma sFLA2s de veneno. A MT-III induziu aumento dos níveis de triacilglicerol, colesterol e lisofosfolipideos e a ativação e expressão dos fatores PPAR-g, PPAR-d/b, SREBP2 e do CD36. Sob estimulo da MT-III, o receptor PPAR-b/d, as enzimas DGAT, ACAT e FAS foram relevantes para a formação de CLs e para a expressão da PLIN2. O CD36 participa da expressão da COX-2, sem modificar a liberação de PGE2. O TLR2 e a MyD88 foram essenciais para a formação de CLs e síntese da IL-1b e IL-10. Ainda, o TLR2 foi relevante para a liberação de PGE2, PGD2 e LTB4, enquanto MyD88 foi fundamental somente para a liberação de PGE2 e expressão da PLIN2, induzidas pela MT-III. / Snake venoms contain high concentrations of secreted phospholipase A2 (sPLA2) with homology to mammalian PLA2s, whose levels are elevated in inflammatory diseases. In this study, we investigated activation and expression of factors involved in lipid droplets formation (LDs) and participation that factors in the innate immune response induced by MT-III, sPLA2s from snake venom, in phagocytic cells. MT-III induced increase of triacylglycerol, cholesterol and lysophospholipids levels and activation and expression of factors PPAR-g, PPAR-d/b, SREBP2 and CD36. PPAR-b/d receptor, DGAT, ACAT and FAS enzymes were relevant to LDs formation and critical to PLIN2 expression induced by MT-III. CD36 participates in COX-2 expression without modifying PGE2 release stimulated by MT-III. TLR2 and MyD88 were essential to LDs formation and IL-1b and IL-10 synthesis stimulated by MT-III. Moreover, TLR2 was relevant to PGE2, PGD2 and LTB4 biosynthesis, while MyD88 is essential only for PGE2 release and PLIN2 expression induced by MT-III.
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Estudo dos fatores envolvidos na formação de corpúsculos lipídicos, induzido por uma fosfolipase A2, isolada do veneno de serpente: síntese e metabolismo de lipídeos. / Study of factors involved in lipid droplets formation induced by a phospholipase A2, isoleted from snake venom: synthesis and lipid metabolismo.

Elbio Leiguez Junior 16 March 2015 (has links)
Os venenos de serpentes contêm concentrações elevadas de fosfolipases A2 secretadas (sFLA2), que apresentam homologia com as FLA2s de mamíferos, cujos níveis estão aumentados em doenças inflamatórias. Neste estudo, investigou-se a ativação e a expressão de fatores envolvidos na formação de corpúsculos lipídicos (CLs) em células fagociticas e o papel desses fatores na resposta imune inata, induzida pela MT-III, uma sFLA2s de veneno. A MT-III induziu aumento dos níveis de triacilglicerol, colesterol e lisofosfolipideos e a ativação e expressão dos fatores PPAR-g, PPAR-d/b, SREBP2 e do CD36. Sob estimulo da MT-III, o receptor PPAR-b/d, as enzimas DGAT, ACAT e FAS foram relevantes para a formação de CLs e para a expressão da PLIN2. O CD36 participa da expressão da COX-2, sem modificar a liberação de PGE2. O TLR2 e a MyD88 foram essenciais para a formação de CLs e síntese da IL-1b e IL-10. Ainda, o TLR2 foi relevante para a liberação de PGE2, PGD2 e LTB4, enquanto MyD88 foi fundamental somente para a liberação de PGE2 e expressão da PLIN2, induzidas pela MT-III. / Snake venoms contain high concentrations of secreted phospholipase A2 (sPLA2) with homology to mammalian PLA2s, whose levels are elevated in inflammatory diseases. In this study, we investigated activation and expression of factors involved in lipid droplets formation (LDs) and participation that factors in the innate immune response induced by MT-III, sPLA2s from snake venom, in phagocytic cells. MT-III induced increase of triacylglycerol, cholesterol and lysophospholipids levels and activation and expression of factors PPAR-g, PPAR-d/b, SREBP2 and CD36. PPAR-b/d receptor, DGAT, ACAT and FAS enzymes were relevant to LDs formation and critical to PLIN2 expression induced by MT-III. CD36 participates in COX-2 expression without modifying PGE2 release stimulated by MT-III. TLR2 and MyD88 were essential to LDs formation and IL-1b and IL-10 synthesis stimulated by MT-III. Moreover, TLR2 was relevant to PGE2, PGD2 and LTB4 biosynthesis, while MyD88 is essential only for PGE2 release and PLIN2 expression induced by MT-III.
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Estudo do papel modulador de adipócitos na ativação macrofágica durante a infecção por Mycobacterium bovis BCG in vitro

Albertoni, Ana Luíza da Silva 14 August 2017 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2018-03-27T15:52:21Z No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2018-04-09T19:21:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-09T19:21:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 analuizadasilvaalbertoni.pdf: 1260028 bytes, checksum: cc0af4aab8dc00d61833430e0eb2ce88 (MD5) Previous issue date: 2017-08-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A obesidade é uma doença crônica multifatorial caracterizada pelo excesso de gordura corporal e por um estado inflamatório de baixo grau, conhecido como metainflamação. Atualmente, é um dos principais problemas de saúde pública do mundo. Dados da OMS indicam que 13% da população mundial é obesa e no Brasil, o índice subiu para 17,9% da população em 2014. Fatores genéticos, dieta, desordens metabólicas, como intolerância à glicose, dislipidemias, hipertensão arterial sistêmica, desbalanço hormonal e mudanças na microbiota intestinal, são gatilhos da inflamação envolvendo adipócitos. O tecido adiposo obeso é caracterizado pelo aumento da infiltração de macrófagos, sendo estes uma fonte importante de inflamação neste tecido. Fatores transcricionais com propriedades imunorregulatórias estão envolvidos em processos inflamatórios e na adipogênese. PPARγ é um importante receptor ativado por ligantes lipídicos, regulador central da adipogênese, com funções na ativação de células do sistema imune e no metabolismo lipídico. Dados de nosso grupo demonstraram que ativação de PPARγ induz a biogênese de organelas dinâmicas denominadas Corpúsculos Lipídicos (CLs) durante infeção micobacteriana. Estas organelas possuem funções ativas no estoque de lipídios para geração de energia, síntese de membrana, síntese de mediadores inflamatórios, sinalização celular e inflamação. Além disso, os CL em macrófagos funcionam como sítios para sobrevivência de patógenos, como as micobactérias. Apesar do impacto da obesidade em doenças metabólicas e cardiovasculares ser bem compreendido, os mecanismos envolvidos na relação entre adipócitos e macrófagos infectados com patógenos intracelulares não são conhecidos, sendo este esclarecimento o objetivo de nosso estudo. Para isso, diferencianciamos células NIH3T3-L1 em adipócitos e utilizamos o sobrenadante obtido, para estimular macrófagos peritoneais infectados ou não com M. bovis BCG. Nós avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos, expressão de PPARγ, síntese e secreção de citocinas, adipocinas e NO. Os resultados comprovaram que a diferenciação de células NIH3T3-L1 em adipócitos é um processo eficiente que envolve mudanças na morfologia celular e acúmulo de Corpúsculos Lipídicos. O estímulo de macrófagos com sobrenadante de adipócitos potencializou a biogênese de CLs, assim como a expressão de PPARγ, na presença de infecção micobacteriana. Nos tempos de 6 e 48 horas de estímulo com sobrenadante e infecção, a produção de TNF-α também foi potencializada, porém um decréscimo significativo foi observado no tempo de 24 horas. Quanto aos níveis de IL-10, um aumento foi observado na presença de infecção e estímulo com sobrenadante nos três tempos analisados. Além disso, apenas no tempo de 24 h observamos a secreção de nitrito de modo significativo pelos macrófagos peritoneais infectados, efeito este independente do estímulo com sobrenadante. Quanto às adipocinas, importantes no desenvolvimento da obesidade e síndrome metabólica, analisamos os níveis de leptina produzida pelos macrófagos que não foram significativos, enquanto a produção de adiponectina, apresentou-se aumentada nos macrófagos controles estimulados com sobrenadante, efeito este, que foi inibido durante a infecção por BCG. Assim, nossos resultados sugerem, um efeito modulador de fatores secretados por adipócitos na ativação de macrófagos, atribuídos a formação de corpúsculos lipídicos, expressão de PPARγ, síntese de citocinas como TNF-α e IL-10 e uma modulação negativa da produção de adiponectina durante a infecção por M. bovis BCG. / Obesity is a chronic multifactorial disease characterized by excess of body fat and a low- grade inflammatory state, known as meta-inflammation. It is currently one of the world's leading public health problems. WHO data indicate that 13% of the world population is obese, in Brazil, the obesity index was 17.9% of the population in 2014. In addition to genetic factors, diet and metabolic disorders, such as glucose intolerance, dyslipidemia, systemic arterial hypertension, hormonal imbalance and changes in the intestinal microbiota have been proposed as triggers for inflammation involving adipocytes. Recent studies have shown that obese adipose tissue is characterized by increased infiltration of macrophages, suggesting that these are an important source of inflammation in this tissue. Transcriptional factors with immunoregulatory properties are involved in inflammatory processes and adipogenesis. Such as the PPARγ, is a receptor activated by lipid ligands, central regulator of adipogenesis, with functions in the immune cells activation and lipid metabolism. Data from our group, demonstrated that PPARγ activation induces the biogenesis of dynamic organelles, the Lipid Droplets (LD) during mycobacterial infection. These organelles have functions in lipid storage for energy generation, membrane synthesis, inflammatory mediators synthesis, cell signaling and inflammation. Moreover, the LD in macrophages are niches for the pathogens survival. Although the impact of obesity on metabolic and cardiovascular diseases is understood, the mechanisms involved in the interactions between adipocytes and macrophages infected with intracellular pathogens are not known. In this study we differentiated NIH3T3-L1 cells into adipocytes and used the supernatant obtained to stimulate peritoneal macrophages infected or not with M. bovis BCG. We analyze the lipids droplets formation, PPARγ expression, cytokine, adipokines and NO synthesis. The results have shown that NIH3T3-L1 cells differentiation into adipocytes is an efficient process involving changes in cell morphology and LD storage. The macrophages stimulation with adipocyte supernatant was able to potentiated LD biogenesis, as well as, PPARγ activation, during mycobacterial infection. After 6 and 48 hours of stimulation and infection, the TNF-α levels were also potentiated, although a significant decrease was observed after 24 hours of infection. The IL-10 levels, was increase in the presence of infection and supernatant stimulation at 6, 24 and 48 hours after infection. To nitrite analysis, we observe that after 24 h of infection, there was an increase of levels secreted by macrophages, however this effect was independent of the supernatant stimulation. The adipokines, as leptin and adiponectin, are important factors in the obesity and metabolic syndrome development. Therefore, we analyzed the levels of leptin and adiponectin produced by macrophages during BCG infection. The Leptin levels were not detect, while adiponectin production, was increased in the control macrophages in presence of supernatant, an effect that was inhibited during BCG infection. Thus, our results suggest a modulating effect of secreted factors by adipocytes on the macrophages activation, attributed to the lipid droplets formation, PPARγ expression, cytokines synthesis as TNF-α and IL-10 and a dowmodulation of adiponectin during M. bovis BCG, infection.

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