FREITAS, Rosa Elayne Marques de. Avaliação biológica e de fatores gênicos modulados pelos retinóides no ciclo celular, proliferação, diferenciação, apoptose e necrose em células de cripta intestinal de rato. 2014. 91 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-02-19T15:58:43Z
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Previous issue date: 2014 / Infant mortality affects millions of children around the world and malnutrition contributes about one third of this mortality. Vitamin A is already used in the treatment of childhood malnutrition. However, few or no study has been done, carried out at the cellular level, to assess the impact of vitamin A supplementation in intestinal epithelial cells under in vitro protein malnutrition. Thus, we aimed to demonstrate the effects of malnutrition and treatment with retinoids in the processes of proliferation, apoptosis/necrosis, cell cycle and cell differentiation as well as activation of signaling pathways in IEC-6 rat cells under protein malnutrition. We demonstrated that malnutrition decreased cell proliferation in periods of 6, 12, 24 and 48 hours. In addition, retinyl palmitate treatment intensified the decrease of cell proliferation when compared to the malnourished group in the periods of 24 and 48 hours after supplementation. However, the reduction in proliferation was not related to cell death. Indeed, retinyl palmitate reduced apoptosis in the period of 48 hours after induction of malnutrition. Additionally, malnutrition stimulated cell quiescence, and the same was enhanced by retinol, which was identified by the increase in the percentage of cells in G0/G1 phase and the reduction of the percentage of cells in S phase and G2/M, especially in periods of 24 and 48 hours. To check if malnutrition, with or without supplementation of retinoids, was stimulating cell differentiation, we evaluated the gene transcription of the specific markers FABP and IAP within 42 hours. Both retinoids tested increased approximately 5-fold the expression of FABP and IAP mRNAs. Knowing that differentiation had been stimulated, we decided to check which intracellular signaling pathways, coupled to the activation of G proteins, were activated. Our results demonstrated that protein malnutrition decreased gene transcription of c-Jun, STAT3, MEF2C and ATF2, but increased the expression of the GLI-3 and c-Fos mRNAs in relation to the nourish group. However, retinoids increased the transcription of ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3, NF-kB in relation to the malnourished group. Thus, this study showed that cell malnutrition interfered with cell proliferation stimulating cell quiescence. However, retinoids treatment intensified cell quiescence, decreased IEC-6 apoptosis and stimulated cell differentiation associated with the activation of the molecular pathways of ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT and NF-kB. / A mortalidade infantil afeta milhões de crianças em todo mundo e a desnutrição contribui com cerca de um terço dessa mortalidade. A vitamina A já é utilizada no tratamento da desnutrição infantil. Contudo, poucos ou nenhum estudo fora realizado, ao nível celular, para avaliar o impacto da suplementação com a vitamina A em células epiteliais intestinais com desnutrição proteica in vitro. Desse modo, objetivamos demonstrar os efeitos da desnutrição e do tratamento com retinoides nos processos de proliferação, apoptose/necrose, ciclo celular e diferenciação celular, assim como na ativação das vias de sinalização em células IEC-6 de rato com desnutrição proteica. Demonstramos que a desnutrição diminuiu a proliferação celular nos tempos de 6, 12, 24 e 48 horas. Em adição, nos tempos de 24 e 48 horas a suplementação com palmitato de retinol intensificou esta redução em comparação ao grupo desnutrido. Contudo, a diminuição da proliferação não estava relacionada à morte celular. Na verdade, o palmitato de retinol reduziu apoptose no tempo de 48 horas após a indução de desnutrição. Adicionalmente, a desnutrição estimulou a quiescência celular e a mesma foi intensificada pelo retinol identificada pelo aumento do percentual de células na fase G0/G1 e diminuição dos percentuais de células nas fases S e G2/M, principalmente nos tempos entre 24 e 48 horas. Para verificar se a desnutrição, associada ou não à suplementação dos retinoides, estimulava a diferenciação celular foi realizada a análise da transcrição gênica dos marcadores específicos FABP e IAP no período de 42 horas. Os dois retinoides testados aumentaram em aproximadamente cinco vezes a expressão dos mRNAs de FABP e IAP. Visto que a diferenciação fora estimulada, foram verificadas quais as vias de sinalização intracelular, acopladas à ativação da proteína G, estavam ativadas. Os resultados deste trabalho demonstraram que a desnutrição proteica diminuiu a transcrição gênica de c-Jun, STAT3, MEF2C, e ATF2, mas aumentou a expressão dos mRNAs de GLI-3 e c-Fos em relação ao grupo nutrido. Entretanto, os retinoides aumentaram a transcrição dos mRNAs de ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3 e NF-κB em relação com o grupo desnutrido. Deste modo, este trabalho mostrou que a desnutrição interferiu na proliferação estimulando a quiescência celular. Porém, o tratamento com os retinoides intensificou a quiescência diminuindo a apoptose com estimulação da diferenciação celular associado com a ativação das vias moleculares do ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT e NF-κB.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/10655 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Freitas, Rosa Elayne Marques de |
| Contributors | Bindá, Alexandre Havt |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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