RIVANOR, R. L. C. Efeitos antinociceptivo e anti-inflamatório da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides no modelo de artrite induzida por zymosan na articulação temporomandibular de ratos. 2014. 103 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-09T17:42:09Z
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Previous issue date: 2014 / Seaweeds are sources of bioactive compounds for the pharmaceutical industry and among these compounds include the lectins. The present study aimed to investigate the effects antinociceptive and anti-inflammatory of the lectin of the green seaweed Caulerpa cupressoides (CcL) on model of zymosan-induced arthritis in the temporomandibular joint (TMJ) of rats. CcL was extracted with 25 mM Tris-HCl buffer pH 7.5 and isolated by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose column. In tests of arthritis induced by Zy, male Wistar rats received CcL (0.1, 1 or 10 mg/kg, i.v.) or sterile saline, 30 min before the intra-articular (i.art.) injection of Zy (2 mg/art.; 40 μL) into the left TMJ. Control groups received saline (40 μL; i.art.), indomethacin (5 mg/kg, s.c.) or morphine (5 mg/kg, s.c.). Groups of animals received CcL (10 mg/kg; i.v.) associated with mucin (8 mg/kg; i.v.), a sugar inhibitor, and another group received only mucin before stimulus. To analyze the involvement of HO-1 pathway in arthritis, animals were pretreated (3 mg/kg, s.c.) with a specific inhibitor of heme (zinc protoporphyrin IX-ZnPP IX). Finally, to evaluate the analgesic effect of CcL in the activation of the opioid system, group of animals received an injection i.art. (10 μg/art.; 15 µL) of the opioid receptor antagonist (naloxone), 35 min before injection of Zy. After 5 min, the animals were pretreated with CcL (10 mg/kg). Mechanical hypernociception was recorded before the i.art. injections of Zy or saline and after 4h. After 6 hour, the synovial fluid was collected to perform cell counting and myeloperoxidase (MPO) assay. Also, TMJ tissues were excised to perform histopathological, immunohistochemistry (TNF-α, IL-1β e HO-1) and cytokine assays (IL-1β) in the periarticular tissue and trigeminal ganglion. Pretreatment with CcL (0.1, 1 or 10 mg/kg; i.v.) inhibited (p<0.05) the nociceptive response (81, 83, and 89.5%, respectively) and reduced the influx of leukocytes (77.3, 80.7 and 98.5%, respectively) compared to Zy group, as demonstrated by MPO activity. Sugar inhibitor (mucin) did not inhibit the anti-inflammatory and antinociceptive effect of CcL in arthritis induced by Zy. We observed that during the histological analysis of ATM, animals treated with CcL showed a significant reduction of cell influx in the synovial membrane. Furthermore, CcL significantly reduced the production of IL-1β in the periarticular tissue and expression of IL-1β, TNF-α and HO-1 in the synovial membrane during immunohistochemistry assay. Treatment with ZnPP IX was not able to inhibit the effect CcL, indicating that its antinociceptive and anti-inflammatory action did not occur HO-1 pathway. In addition, treatment with naloxone did not reverse the effect of CcL. Therefore, CcL showed antinociceptive and anti-inflammatory effect on model of Zy-induced arthritis, reducing the production of primary cytokines (TNF-α and IL-1β), however its antinociceptive action did not occur by peripheral opioid mechanism. / As algas marinhas são fontes de compostos bioativos para a indústria farmacêutica e dentre esses compostos destacamos as lectinas. O presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos antinociceptivo e anti-inflamatório da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides (LCc) no modelo de artrite induzida por zymosan (Zy) na articulação temporomandibular (ATM) de ratos. LCc foi extraída com tampão Tris-HCl 25 mM, pH 7,5 e isolada por cromatografia de troca iônica em coluna de DEAE-celulose. Nos ensaios de artrite induzida por Zy, ratos Wistar machos receberam LCc (0,1; 1 ou 10 mg/kg; i.v.) ou salina estéril, 30 min antes da injeção intra-articular (i.art.) de Zy (2 mg/art., 40 µL) na ATM esquerda. Grupos controles receberam salina estéril (40 µL; i.art.), indometacina (5 mg/kg; s.c) ou morfina (5 mg/kg, s.c.). Grupos de animais receberam LCc (10 mg/kg, i.v.) associada à mucina (100 mg/kg, i.v.), um açúcar inibidor, e outro grupo recebeu somente mucina antes dos estímulos. Para analisar o envolvimento da via da HO-1 na artrite, os animais foram pré-tratados (3 mg/kg, s.c.) com um inibidor específico do grupo heme (zinco protoporfirina IX – ZnPP IX). Finalmente, para avaliar se o efeito antinociceptivo de LCc estava envolvido na ativação do sistema opioide, grupo de animais receberam uma injeção i.art. (10 μg/art.;15 µL) de um antagonista de receptores opioides (naloxona), 35 min antes da injeção de Zy. Após 5 min, os animais foram pré-tratados com LCc (10 mg/kg). A hipernocicepção mecânica foi medida utilizando o método de Von Frey elétrico no tempo basal e 4 h após a injeção de Zy. Na 6a hora, os animais foram eutanasiados e suas ATM lavadas para coleta do lavado sinovial e realização da contagem total de células e dosagem de mieloperoxidase (MPO). Posteriormente, as ATM foram removidas para as análises histológicas e imunohistoquímica (TNF-α, IL-1β e HO-1), além da dosagem de IL-1β no tecido periarticular e gânglio trigeminal. O pré-tratamento com LCc (0,1, 1 ou 10 mg/kg; i.v.) reduziu significativamente a hipernocicepção induzida por Zy (81, 83 e 89,5%, respectivamente) e inibiu o influxo de leucócitos (77,3, 80,7 e 98,5%, respectivamente) comparado ao grupo Zy, sendo confirmada pela atividade de MPO. O açúcar inibidor (mucina) não foi capaz de inibir o efeito anti-inflamatório e antinociceptivo de LCc na artrite induzida por Zy. Observamos que durante a análise histológica da ATM, os animais tratados com LCc apresentaram uma redução significativa do influxo celular na membrana sinovial. Além disso, LCc reduziu significativamente a produção de IL-1β no tecido periarticular e a expressão de IL-1β, TNF-α e HO-1 na membrana sinovial durante o ensaio de imunohistoquímica. O tratamento com ZnPP IX não foi capaz de inibir os efeitos de LCc, mostrando que sua ação antinociceptiva e anti-inflamatória não ocorre pela via da HO-1. Além disso, o tratamento com naloxona não reverteu o efeito de LCc. Portanto, LCc apresentou efeito antinociceptivo e anti-inflamatório no modelo de artrite induzida por Zy, reduzindo a produção de citocinas primárias (TNF-α e IL-1β), porém sua ação antinociceptiva não ocorre pelo mecanismo opioide periférico.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.repositorio.ufc.br:riufc/14283 |
| Date | January 2014 |
| Creators | Rivanor, Renata Line da Conceição |
| Contributors | Benevides, Norma Maria Barros |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/masterThesis |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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