CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Gastric cancer is a serious health problem. Several risk factors have been identified to contribute to its development, such as virulence genes of H. pylori, SNPs in hostâs key genes and epigenetic events. The aim of this study was to investigate the relationship between genes methylation in gastric cancer, its association with H. pylori virulence genes, and verify the influence of CDH1 and MLH1 SNPs in the methylation status and correlate methylation of the promoter of miR-34b/c expression of MET protein in those cases. The promoter genes methylation was assessed by MS-PCR and HRM (for miR-34b/c) techniques. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. H.pylori genes were detected by PCR and SNPs, by PCR-RFLP. The genes of higher and lower methylation frequency were MSH2 and MLH1, respectively. Patients aged ≥ 50 had CDH1 more frequently methylated than those younger. The MLH1 gene was significantly less methylated in cardia tumors. As for the TNM, the CDH1-M gene was associated with advanced tumor extension, even when subdivided by subtype, since same association has been shown in tumors of intestinal subtype. Already the combination CDKN2A-M/MLH1-U was associated with absence of distant metastases. Taking into account the virulence genes of H. pylori, it was seen that patients infected vacAm1+ or cagG+ strains had a higher frequency of CDKN2A-U vacAs1 + was associated with COX-2-U and CDH1-U, while hopQII with MLH1-U. Patients infected with cagE+ and virB11+ strains had higher frequency of MSH2-M. It was also observed that less virulent strains tended to non-methylation for CDH1 and MLH1 genes. The classification trees made according to the histological subtype, showed that in tumors of diffuse subtype cagE+ and virB11 + strains (separately or together) were also attached to a methylator character of some of the analyzed genes. Already strains virB11+cagA+ did not lead to methylation in two genes. In intestinal subtype tumors was not observed a pattern having a variation in the combinations of H. pylori genes leading to the methylation. CDH1 SNPs presented no relation to the methylation of this gene, while the GA genotype of MLH1 SNP showed a tendency to not methylation of the gene. As regards the promoter methylation of miR-34b/c, the distribution percentage of the cases showed that the majority of cases presented methylation above 50%. The larger frequency among tumors of the intestinal subtype was in the methylation range of 50-75%, and to diffuse subtype from 75%. Already c-MET expression was positive in 86.36% of cases were not found differences among the different locations and subtypes. There was no correlation between the methylation percentage of miR-34b/c and c-MET expression. Observing each case, it was seen that in most cases whose c-MET expression was negative (H-score 0) had a high percentage of methylation of miR-34b/c. In conclusion, the methylation status of the studied genes appear to be dependent on the tumor location and is also related to the TNM staging and tumor subtype. In addition, more virulent H. pylori strains may be involved in this process by increasing inflammatory response leading to methylation of these genes. Already c-MET is overexpressed in cases of gastric cancer and the promoter region of miR-34b/c hipermethylated, indicating a possible involvement of these factors in carcinogenesis of the stomach, although it was not found a direct relationship between the two variables. / O cÃncer gÃstrico constitui um sÃrio problema de saÃde pÃblica. Diversos fatores de risco parecem estar envolvidos na contribuiÃÃo para o seu desenvolvimento, tais como: genes de virulÃncia de H. pylori, SNPs em genes-chave no hospedeiro e eventos epigenÃticos. Assim, o objetivo desse estudo foi investigar a relaÃÃo entre a metilaÃÃo de genes em casos de cÃncer gÃstrico, sua associaÃÃo com genes de virulÃncia de H. pylori, verificar a influÃncia dos SNPs de CDH1 e MLH1 em seu status de metilaÃÃo, bem como correlacionar a metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna MET nesses mesmos casos. A metilaÃÃo dos genes foi obtida atravÃs da realizaÃÃo da tÃcnica MS-PCR e HRM (para miR-34b/c). Os genes de H. pylori foram detectados por PCR e os SNPs, por PCR-RFLP. Os genes de maior e menor frequÃncia de metilaÃÃo foram MSH2 e MLH1, respectivamente. O corte de idade mostrou que pacientes com idade ≥ 50 anos tiveram CDH1 mais frequentemente metilado que aqueles mais jovens. O gene MLH1 foi significativamente menos metilado em tumores da cÃrdia. Quanto ao TNM, o gene CDH1-M foi associado à extensÃo tumoral avanÃada, inclusive quando subdividido por subtipo, jà que mesma associaÃÃo foi mostrada em tumores do subtipo intestinal. Jà a combinaÃÃo CDKN2A-M/MLH1-U foi associada à ausÃncia de metÃstase à distÃncia. Levando em consideraÃÃo os genes de virulÃncia de H. pylori, foi visto que pacientes infectados por cepas vacAm1+ ou cagG+ tiveram uma maior frequÃncia de CDKN2A-U, vacAs1+ foi associado com COX-2-U e CDH1-U, enquanto hopQII, com MLH1-U. Pacientes infectados por cepas cagE+ e virB11+ tiveram maior frequÃncia de MSH2-M. Foi observado tambÃm que cepas menos virulentas apresentaram uma tendÃncia à nÃo-metilaÃÃo para os genes MLH1 e CDH1. As Ãrvores de classificaÃÃo, feitas de acordo com o subtipo histolÃgico, mostraram que em tumores do subtipo difuso, cepas cagE+ e virB11+ (separados ou em concomitÃncia) tambÃm estavam associadas a um carÃter metilador em alguns dos genes analisados. Jà cepas virB11+cagA+ nÃo levavam à metilaÃÃo em dois genes. Nos tumores do subtipo intestinal, nÃo foi observado um padrÃo, havendo uma variaÃÃo nas combinaÃÃes dos genes de H. pylori que levavam à metilaÃÃo. Os SNPs de CDH1 e nÃo apresentaram relaÃÃo com a metilaÃÃo desses gene, enquanto o genÃtipo GA de MLH1 apresentou uma tendÃncia à nÃo metilaÃÃo do gene. Quanto à metilaÃÃo do promotor de miR-34b/c, a distribuiÃÃo dos casos por percentual mostrou que a maioria dos casos apresentou metilaÃÃo acima de 50%. A maior frequÃncia de casos entre os tumores do subtipo intestinal estava na faixa de metilaÃÃo de 50-75%, e para os do subtipo difuso, a partir de 75%. Jà a expressÃo de c-MET foi positiva em 86,36% dos casos, nÃo sendo encontradas diferenÃas entres as diferentes localizaÃÃes e subtipos. NÃo foi encontrada uma correlaÃÃo entre o percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c e a expressÃo da proteÃna c-MET. Observando caso a caso, foi visto que na maioria dos casos cuja expressÃo de c-MET era negativa (H-score 0) possuia um elevado percentual de metilaÃÃo de miR-34b/c. Assim, pode-se concluir que os status de metilaÃÃo dos genes estudados parecem ser dependentes da localizaÃÃo tumoral e està relacionado tambÃm ao estadiamento TNM e ao subtipo tumoral. AlÃm disso, cepas de H. pylori mais virulentas podem estar envolvidas nesse processo, aumentando a resposta inflamatÃria e levando à metilaÃÃo desses genes. Jà a proteÃna c-MET està superexpressa em casos de cÃncer gÃstrico e a regiÃo promotora de miR-34b/c, hipermetilada, indicando um possÃvel envolvimento desses fatores na carcinogÃnese do estÃmago, embora nÃo tenha sido encontrada uma relaÃÃo direta entre as duas variÃveis.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:www.teses.ufc.br:10978 |
| Date | 16 February 2016 |
| Creators | DÃbora Menezes da Costa |
| Contributors | Silvia Helena Barem Rabenhorst, MÃrcia ValÃria Pitombeira Ferreira, JoÃo Paulo Pordeus Gomes, Marcelo Leite Vieira Costa, Andrà Salim Khayat |
| Publisher | Universidade Federal do CearÃ, Programa de PÃs-GraduaÃÃo em Microbiologia MÃdica, UFC, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | English |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFC, instname:Universidade Federal do Ceará, instacron:UFC |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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